【摘要】：[研究背景] 人促血液血管細胞生長因子(Hemangiopoietin，HAPO)是我室研究發(fā)現(xiàn)的一個新的細胞生長因子，具有促進造血干細胞，內(nèi)皮祖細胞增殖、黏附、趨化的功能。HAPO蛋白最初是從再生障礙性貧血病人尿液中提取的天然蛋白，我室對其功能進行了深入的研究后成功地構建了原核表達體系，并測定了重組蛋白的細胞因子活性。 N端測序顯示HAPO蛋白是糖蛋白4(proteoglycan 4，PRG4)的一個不同剪接體形式。HAPO蛋白N端為由PRG4第2、3外顯子編碼的兩個促細胞生成素B結構域(Somatomedin B，SMB)，中間為第4外顯子編碼的假定的肝素結合區(qū)(putative Heparin Binding Domain，pHBD)，C端為第6外顯子編碼的黏液素樣重復序列。PRG4尚有若干剪接體形式，其中有兩種為第4、5外顯子同時缺失和3、4、5三個外顯子同時缺失。這為表達缺失突變蛋白以研究rhHAPO各個結構域的功能提供了條件。 目前國內(nèi)外對HAPO蛋白的各項研究課題主要集中在本實驗室以及與香港和法國等實驗室的合作上，工作的重點在于臨床實驗探討HAPO與疾病的相關性，體內(nèi)外實驗探討HAPO生理功能等。已制備得到單克隆抗體，釣得受體，，發(fā)現(xiàn)下游信號傳導途徑之一為磷酸酯酶3激酶ATP途徑等等，但是對于其結構的研究是一個空白。僅僅局限于NCBI網(wǎng)站BLAST數(shù)據(jù)庫搜索程序給出的關于HAPO蛋白含有4個結構域的信息。因此，rhHAPO結構和功能相結合的研究將能夠更好的理解與HAPO蛋白相關的各種實驗現(xiàn)象、實驗結果。 [實驗內(nèi)容] 本研究在分子克隆構建原核表達體系基礎上，利用HPLC，MALDI-TOF-MS，CD，DLS等實驗技術研究了以下四個版塊的內(nèi)容，彼此之間有交叉和銜接：單體分子四個結構域的結構特點對功能發(fā)揮的影響；不同聚集體分子功能的比較；不同剪接體蛋白對聚集行為的影響；驗證假定的肝素結合區(qū)(pHBD)是否結合肝素。 [實驗目的] 闡明rhHAPO活性功能區(qū)所在；闡明形成聚集的區(qū)域所在；找到活性最高穩(wěn)定性最佳的剪接體和聚集體形式；提供初步的理化特性，為rhHAPO新藥的研發(fā)提供實驗室數(shù)據(jù)。
[Abstract]:[background] Hemangiopoietine HAPO (HAPO) is a new cell growth factor found in our laboratory. It can promote the proliferation and adhesion of hematopoietic stem cells and endothelial progenitor cells. The function of chemotaxis. HAPO protein was originally extracted from the urine of aplastic anemia patients. The N-terminal sequencing showed that HAPO protein was a different splice form of proteoglycan 4 (proteoglycan 4 / PRG4). HAPO protein N The two cytopoietin B domains (Somatomedin BnSMB) encoded by exon 2 of PRG4, and the assumed heparin binding region (putative Heparin Binding Domainn pHBD) at the middle of exon 4, have myxin-like repeats at the C end of exon 6. PRG4 still exists. Several splicing forms, Two of them were simultaneous deletion of exon 4 and 3 exon 3. This provides conditions for the expression of deletion mutant proteins to study the function of rhHAPO domains. At present, the research topics of HAPO protein at home and abroad are mainly focused on our laboratory and the cooperation with Hong Kong and France. The focus of our work is clinical experiments to explore the correlation between HAPO and disease. To investigate the physiological function of HAPO in vivo and in vitro. Monoclonal antibodies were prepared, receptors were isolated, and one of the downstream signal transduction pathways was found to be phosphatase 3 kinase ATP pathway, but the study of its structure is a blank. It is only limited to the information given by the BLAST database searcher of NCBI website that HAPO protein contains four domains. Therefore, the research on the combination of structure and function of rhHAPO will be able to better understand the various experimental phenomena related to HAPO protein and the experimental results. [experimental contents] based on the construction of prokaryotic expression system by molecular cloning, the contents of the following four plates were studied by using HPLCU MALDI-TOF-MSMSCD DLS and other experimental techniques. The structure characteristics of the four domains of monomers affect the function, the comparison of the functions of different aggregates, the effects of different splicing proteins on the aggregation behavior; To verify whether the assumed heparin binding region (pHBD) binds heparin. [objective] to elucidate the active functional region of rhHAPO, to clarify the region where the aggregation is formed, to find the best splicing and aggregate form with the highest activity and stability, to provide the preliminary physicochemical properties and to provide laboratory data for the development of new drugs for rhHAPO.
【學位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R341

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