【摘要】：肝糖異生作用是長期饑餓下機體維持血糖平衡的主要途徑,其主要依靠激素的調節(jié),但不適當?shù)恼{節(jié)可引起糖尿病和其他遺傳代謝性疾病。糖異生途徑中關鍵限速酶的調節(jié)是最基礎和最基本的調節(jié)方式,其調控主要發(fā)生在轉錄水平,需要多種轉錄因子協(xié)調作用以適應機體不同的代謝和激素狀態(tài)。在饑餓狀態(tài)下,血胰島素水平降低,胰高血糖素和糖皮質激素水平增高,分別通過活化 cAMP 應答元件結合蛋白(CREB)和糖皮質激素受體(GR)而促進糖異生作用。CREB 和 GR可以表達在多器官組織中,但是糖異生作用主要發(fā)生在肝臟,極少量發(fā)生在腎臟。“翼螺旋” 轉錄因子家族中的肝臟核轉錄因子 Foxa 的轉錄結合位點常與 CREB 和 GR 的結合位點相鄰。但糖異生的活化過程中是否需要 Foxa 轉錄因子以及活化的分子機制尚未闡明。本課題建立了肝細胞轉錄因子 Foxa2 基因特異性剔除小鼠作為體內研究模型,并以從該小鼠分離培養(yǎng)得到的原代肝細胞為體外研究模型,采用免疫熒光染色技術(IFC)、免疫組織化學染色技術(IHC)、實時熒光定量 PCR 技術(RT-PCR)以及染色質免疫沉淀技術(CHIP assay),較系統(tǒng)、全面地對 Foxa2 在 cAMP 和糖皮質激素介導的肝細胞特異性基因 PEPCK、TAT和 IGFBP-1 轉錄活化中的作用和分子機理進行了研究,結果發(fā)現(xiàn): 肝細胞 Foxa2 基因特異性剔除小鼠中 PEPCK、TAT 和 IGFBP-1 基因在饑餓狀態(tài)下 mRNA 表達明顯受抑;體外實驗結果顯示肝細胞中PEPCK、TAT 和 IGFBP-1 基因 mRNA 表達對不同的激素信號刺激,其
[Abstract]:Heterogenesis of liver sugar is the main way to maintain the balance of blood glucose under long-term starvation. It mainly depends on hormone regulation, but inappropriate regulation can cause diabetes mellitus and other genetic metabolic diseases. The regulation of key rate-limiting enzymes is the most basic and basic regulation in the glucose allogeneic pathway, which mainly occurs at the transcriptional level, and requires the coordination of various transcription factors to adapt to different metabolism and hormone status of the body. In hunger, blood insulin levels decreased, glucagon and glucocorticoid levels increased, CAMP response element binding protein (CREB) and glucocorticoid receptor (GR) were activated to promote the expression of glycosylated elements. CREB and gr could be expressed in multiple organ tissues respectively. However, glycosylation mainly occurred in the liver and a very small amount in the kidney. The transcriptional binding sites of liver nuclear transcription factor Foxa in the pterygoid transcription factor family are often adjacent to those of CREB and gr. However, whether Foxa transcription factors are needed in the process of glycosylation and the molecular mechanism of activation have not been elucidated. In this study, a mouse model of hepatocyte transcription factor Foxa2 gene specific knockout was established, and the primary hepatocytes isolated from the mouse were used as the in vitro study model. Immunofluorescence staining (IFC), immunohistochemical staining (IHC), real-time fluorescent quantitative PCR (RT-PCR) and chromatin immunoprecipitation (CHIP assay),) were used. The role and molecular mechanism of Foxa2 in the transcriptional activation of cAMP and glucocorticoid mediated hepatocyte specific gene PEPCK tat and IGFBP-1 were studied. The results showed that the mRNA expression of PEPCK tat and IGFBP-1 genes in hepatocyte Foxa2 gene specific knockout mice was significantly inhibited under starvation. The results of in vitro experiments showed that the expression of PEPCKT tat and IGFBP-1 gene mRNA in hepatocytes stimulated different hormone signals.
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R33

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本文編號：2156056