【摘要】：目的:真核細(xì)胞基因組DNA 包含于染色質(zhì)中,DNA 圍繞組蛋白八聚體形成的核小體是染色質(zhì)的基本構(gòu)成單位。所形成的染色質(zhì)除了包裝DNA 外,還可通過其結(jié)構(gòu)的調(diào)整,即組蛋白共價(jià)修飾和ATP 依賴的染色質(zhì)重塑復(fù)合物,有效地“開/關(guān)”DNA,誘導(dǎo)或阻遏轉(zhuǎn)錄激活子與DNA 的結(jié)合,從而促進(jìn)或抑制基因的表達(dá)。核心組蛋白尾部發(fā)生的多種共價(jià)修飾包括乙�；⒘姿峄�、甲基化、泛素化、SUMO 化等,參與基因的激活與抑制調(diào)控過程,形成組蛋白密碼,成為一種重要的表觀遺傳標(biāo)志。我們通過建立一種染色質(zhì)體外組裝體系,為更好的研究組蛋白修飾及各種修飾之間的相互作用對(duì)基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的作用奠定了基礎(chǔ)。 在染色質(zhì)組裝過程中(H3/H4)2 四聚體首先與DNA 結(jié)合,隨后H2A/H2B 兩個(gè)異源二聚體再結(jié)合到(H3/H4)2結(jié)合處的5’和3’DNA 上形成核小體。研究表明許多分子伴侶參與核小體形成,大多是核心組蛋白的結(jié)合蛋白,如核小體組裝蛋白-1(nucleosome assembly protein-1, NAP-1)可以優(yōu)先與組蛋白H2A 和H2B 結(jié)合,協(xié)助組蛋白與DNA 的結(jié)合。據(jù)此,我們從HeLa 細(xì)胞中提取純化核心組蛋白,并應(yīng)用昆蟲表達(dá)體系表達(dá)、提取染色質(zhì)組裝相關(guān)因子NAP-1,從而為進(jìn)一步在染色質(zhì)模板上研究基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制提供有效的方法。
[Abstract]:Aim: eukaryotic genomic DNA contained in chromatin is the basic unit of chromatin which is formed around histone octamer. In addition to packaging DNA, chromatin can effectively "turn on / off" DNA and induce or suppress the binding of activator to DNA by adjusting its structure, that is, histone covalent modification and ATP-dependent chromatin remodeling complex. In order to promote or inhibit gene expression. Many covalent modifications of core histone tail include acetylation phosphorylation methylation ubiquification and so on which are involved in the activation and inhibition of gene regulation and formation of histone code as an important epigenetic marker. We have established a chromatin assembly system in vitro, which provides the basis for a better study of protein modification and the interaction between various modifications on the regulation of gene transcription. During chromatin assembly, (H3 / H4) 2 tetramer first binds to DNA, then H2A / H2B heterodimer binds to (H3 / H4) 2 binding site to form nucleosome on (H3 / H4) 2 binding site. Many molecular chaperones are involved in nucleosome formation, most of them are binding proteins of core histone, such as nucleosome assembly protein 1 (nucleosome assembly protein-1 (NAP-1), which can preferentially bind to histone H2A and H2B to facilitate the binding of histone to (nucleosome assembly. Therefore, we extracted and purified the core histone from HeLa cells, expressed it in insect expression system, extracted the chromatin assembly related factor (NAP-1), and provided an effective method for further study on the regulation mechanism of gene expression on chromatin template.
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R346

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本文編號(hào)：2137127