發(fā)布時(shí)間：2018-07-17 03:02

【摘要】：目的探討miR-20b對小鼠RAW264.7細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達(dá)的影響。方法以不同濃度(1、10、50、100、200 ng/mL)TNF-α刺激小鼠RAW264.7細(xì)胞24 h,ELISA法檢測上清中VEGF的分泌情況。TNF-α(50 ng/mL)刺激RAW264.7細(xì)胞6 h,Real-Time PCR檢測miR-20b和VEGF mRNA的表達(dá)。使用PicTar算法預(yù)測VEGF是否為miR-20b的調(diào)控靶點(diǎn)。利用脂質(zhì)體Lipofectamine 2000介導(dǎo)miR-20b模擬物及其對照轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞,用TNF-α(100 ng/mL)刺激24 h,ELISA法檢測VEGF的產(chǎn)生情況。結(jié)果 TNF-α能夠誘導(dǎo)小鼠RAW264.7細(xì)胞分泌VEGF,50~100 ng/mL TNF-α是最適合的刺激濃度;50 ng/mL TNF-α刺激RAW264.7細(xì)胞6 h,VEGF mRNA的相對表達(dá)量升高至對照組的(1.60±0.85)倍,而miR-20b的相對表達(dá)量降至對照組(0.55±0.33)倍。PicTar算法表明,小鼠VEGF的3'-UTR區(qū)含有miR-20b種子區(qū)域AAAGUGC的互補(bǔ)序列GCACUUU。轉(zhuǎn)染miR-20b模擬物后,TNF-α誘導(dǎo)的VEGF蛋白表達(dá)升高被完全抑制(P0.01),但轉(zhuǎn)染miR-20b模擬物對照對VEGF的產(chǎn)生無明顯影響(P0.05)。結(jié)論小鼠RAW264.7細(xì)胞中miR-20b負(fù)性調(diào)節(jié)VEGF的表達(dá)。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of miR-20b on the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in mouse RAW264.7 cells. Methods the 1,10,50100200 ng/mL TNF- alpha was used to stimulate the 24 h of mouse RAW264.7 cells, and ELISA method was used to detect the secretion of VEGF in the supernatant. The expression of.TNF- alpha (50 ng/mL) was 6. Using the PicTar algorithm to predict whether VEGF is a regulatory target for miR-20b. Using liposome Lipofectamine 2000 to mediate miR-20b analogue and its control transfected RAW264.7 cells, TNF- alpha (100 ng/mL) stimulates 24 h, ELISA method is used to detect the production of VEGF. 50 ng/mL TNF- alpha stimulated RAW264.7 cells to 6 h, and the relative expression of VEGF mRNA increased to (1.60 + 0.85) times of the control group, while the relative expression of miR-20b decreased to the control group (0.55 + 0.33) times.PicTar algorithm, indicating that the 3'-UTR region of VEGF contained the complementary sequence of AAAGUGC in the miR-20b seed region. After that, the expression of VEGF protein induced by TNF- alpha was completely inhibited (P0.01), but the transfection of miR-20b analogue control had no significant effect on the production of VEGF (P0.05). Conclusion miR-20b negatively regulated the expression of VEGF in mouse RAW264.7 cells.
【作者單位】： 蚌埠醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室安徽省感染與免疫重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;蚌埠醫(yī)學(xué)院科研中心;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81273273) 安徽省自然科學(xué)基金(1308085MH114)~~
【分類號】：R346

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2128722