【摘要】：色素上皮細(xì)胞衍生因子(Pigment epithelium-derived factor, PEDF)是近年來發(fā)現(xiàn)的最有效的內(nèi)源性新生血管抑制因子。它只作用于活化的血管內(nèi)皮細(xì)胞,具有高效性、特異性及安全性等特點(diǎn)。由于胚胎來源受限,國外學(xué)者通過DNA 體外重組技術(shù)克隆表達(dá)PEDF,并對其進(jìn)行的研究相對于其它抑制因子還不是很多,國內(nèi)學(xué)者在這方面的研究就更少。鑒于此,我們在國內(nèi)首次通過從胚胎中釣取PEDF 的總RNA,采用RT-PCR 技術(shù),得到PEDF 的全基因序列,通過雙酶切(EcoRI/SalI),采用現(xiàn)今最有效的原核表達(dá)系統(tǒng)--pET28a 原核表達(dá)載體,構(gòu)建了pET28a/PEDF 原核表達(dá)重組體,并轉(zhuǎn)化至原核表達(dá)宿主菌大腸桿菌BL21 中克隆、表達(dá),并通過一步法的Ni2+螯合層析對表達(dá)的重組人PEDF 進(jìn)行了純化,得到的可溶性重組人PEDF 的純度在90%以上。 通過體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn),在細(xì)胞水平觀察了克隆表達(dá)的重組人PEDF 對人血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖及遷移的作用;在活體水平觀察了重組人PEDF 對雞胚絨毛尿囊膜新生血管及兔角膜堿燒傷后新生血管的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明,我們克隆表達(dá)的重組人PEDF 對人血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖及遷移、雞胚絨毛尿囊膜及兔角膜堿燒傷后新生血管均有顯著抑制作用,并呈量效關(guān)系。其作用靶位點(diǎn)為活化的新生血管的內(nèi)皮細(xì)胞。 我們利用中科院大連化學(xué)物理研究所生物醫(yī)學(xué)材料工程組的先進(jìn)技術(shù)對PEDF 應(yīng)用劑型進(jìn)行了研究,制備了直徑在300-400μm 之間的注射型重組人PEDF 微囊,構(gòu)建了重組人PEDF 的緩釋
[Abstract]:Pigment epithelium-derived factor (PEDF) is the most effective endogenous angiogenic inhibitor found in recent years. It acts only on activated vascular endothelial cells and has the characteristics of high efficiency, specificity and safety. Due to the limited source of embryos, foreign scholars clone and express PEDFs by DNA recombination in vitro, and there are few researches on PEDFs compared with other inhibitors. In view of this, for the first time in China, we obtained the whole gene sequence of PEDF by using RT-PCR technique by fishing the total RNA of PEDF from embryos, and using the prokaryotic expression vector pET28a, which is the most effective prokaryotic expression system-pET28a by double enzyme digestion (EcoRI / SalI). A prokaryotic expression recombinant pET28a / PEDF was constructed and transformed into E. coli BL21. The recombinant human PEDF was purified by one step Ni 2 chelation chromatography. The purity of soluble recombinant human PEDF was above 90%. The effects of recombinant human PEDF on proliferation and migration of human vascular endothelial cells were observed in vitro and in vivo. The effects of recombinant human PEDF on chorioallantoic membrane neovascularization and rabbit corneal neovascularization after alkali burn were observed in vivo. The results showed that the recombinant human PEDF could significantly inhibit the proliferation and migration of human vascular endothelial cells, chorioallantoic membrane and neovascularization after alkali burn of rabbit cornea in a dose-dependent manner. The target site was activated neovascularization endothelial cells. Using advanced technology of biomedical materials engineering group of Dalian Institute of Chemical Physics, Chinese Academy of Sciences, we have studied the application form of PEDF. The injectable recombinant human PEDF microcapsules with diameter of 300-400 渭 m were prepared and the sustained release of recombinant human PEDF was constructed.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R341

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本文編號：2124366