本文選題：生殖支原體 + 脂質(zhì)相關(guān)膜蛋白　； 參考：《南華大學(xué)》2007年碩士論文

【摘要】： 目的: 本研究試圖探討生殖支原體(Mg)脂質(zhì)相關(guān)膜蛋白(LAMPs)能否誘導(dǎo)人單核細(xì)胞系THP-1產(chǎn)生前炎癥細(xì)胞因子(CKs)TNF-α,IL-1β和IL-6;以及對(duì)絲裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)和激活蛋白-1 (AP-1)的激活情況;并研究LAMPs誘導(dǎo)產(chǎn)生CKs是否與這些信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活有關(guān)。 方法: 培養(yǎng)Mg標(biāo)準(zhǔn)株G37并提取其LAMPs。用所提取的LAMPs刺激THP-1細(xì)胞,ELISA雙抗體夾心法檢測其對(duì)前炎癥細(xì)胞因子TNF-α,IL-1β和IL-6的誘生情況;同時(shí)通過Western blot檢測其對(duì)應(yīng)激活化蛋白激酶/ c-Jun氨基端激酶(SAPK/JNK)、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2(ERK1/2)和p38磷酸化的影響;并用凝膠遷移滯后實(shí)驗(yàn)(EMSA)分析LAMPs對(duì)THP-1細(xì)胞NF-κB和AP-1 DNA結(jié)合活性的改變情況;隨后將THP-1細(xì)胞分別與不同濃度的SAPK/JNK抑制劑SP600125、ERK1/2特異性抑制劑PD98059、p38特異性抑制劑SB203580或NF-κB特異性抑制劑二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)孵育30min,再加入3μg/ml LAMPs刺激24h,ELISA分析其對(duì)LAMPs所誘導(dǎo)產(chǎn)生CKs的影響。 結(jié)果: ⑴不同濃度的LAMP(s0.5μg/ml～3μg/ml)能明顯誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α,IL-1β和IL-6,且CKs的產(chǎn)生與LAMPs呈明顯的劑量依賴性;當(dāng)LAMPs濃度高于3μg/ml時(shí),TNF-α,IL-1β和IL-6產(chǎn)生的量明顯減少。 ⑵LAMPs刺激THP-1細(xì)胞15min后,Western blot能檢測到明顯的磷酸化的SAPK/JNK1/2、p38和ERK1/2條帶,30min后達(dá)到高峰,隨后逐漸下降,持續(xù)時(shí)間達(dá)60min以上;而細(xì)胞總SAPK/JNK1/2和p38的量(包括磷酸化和非磷酸化的量)在不同時(shí)間段幾乎保持恒定;同時(shí)LAMPs也能增強(qiáng)NF-κB和AP-1 DNA結(jié)合活性,其峰值位于刺激后2h。 ⑶PD98059能以劑量依賴性方式抑制LAMPs誘導(dǎo)的TNF-α和IL-β產(chǎn)生,但不能抑制IL-6; SP600125能部分抑制IL-6產(chǎn)生,但對(duì)TNF-α和IL-β的產(chǎn)生無明顯影響;而SB203580和PDTC能抑制TNF-α,IL-1β和IL-6這三種CKs的產(chǎn)生。 結(jié)論: ⑴Mg LAMPs能誘導(dǎo)THP-1產(chǎn)生TNF-α,IL-1β和IL-6; ⑵LAMPs能激活THP-1細(xì)胞MAPKs,NF-κB和AP-1; ⑶LAMPs誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生CKs與其MAPKs、NF-κB的激活有關(guān)。
[Abstract]:Objective: this study was to investigate whether the lipid associated membrane proteins (lamps) of Mycoplasma genitalium (mg) can induce the production of proinflammatory cytokines (CKs) TNF- 偽, IL-1 尾 and IL-6 in human monocyte cell line THP-1, as well as the expression of mitogen-activated eggs. Activation of white kinase (MAPKs), nuclear transcription factor 魏 B (NF- 魏 B) and activator protein 1 (AP-1); To investigate whether the production of CKs induced by lamps is related to the activation of these signal transduction pathways. Methods: mg standard strain G37 was cultured and its lamps were extracted. The induction of proinflammatory cytokines TNF- 偽, IL-1 尾 and IL-6 in THP-1 cells was detected by Elisa double antibody sandwich method. The phosphorylation of activated protein kinase / c-Jun amino terminal kinase (SAPKP / JNK), extracellular signal-regulated kinase 1 / 2 (ERK1 / 2) and p38 was detected by Western blot, and the changes of lamps on NF- 魏 B and AP-1 DNA-binding activities in THP-1 cells were analyzed by gel migration lag assay (EMSA). THP-1 cells were then incubated with different concentrations of SAPKP / JNK inhibitor SP600125 ERK1 / 2 specific inhibitor PD98059 / p38 or NF- 魏 B specific inhibitor SB203580 or NF- 魏 B specific inhibitor pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC) for 30 min, and then added 3 渭 g/ml lamps to stimulate 24 h Elisa. The influence of CKs is generated by the derivation. Results: (1) different concentrations of lamp (s 0.5 渭 g/ml~3 渭 g/ml) could induce TNF- 偽 g/ml~3 尾 and IL-6 production in THP-1 cells in a dose-dependent manner. When the concentration of lamps was higher than 3 渭 g/ml, the production of IL-1 尾 and IL-6 in THP-1 cells was significantly decreased. 2 the phosphorylated SAPK-1 / JNK1 / 2p38 and ERK1 / 2 bands reached the peak after 30 minutes, and then decreased gradually. The total amount of SAPK- / JNK1 / 2 and p38 (both phosphorylation and non-phosphorylation) remained almost constant at different time periods, and lamps also increased the DNA-binding activity of NF- 魏 B and AP-1. The peak of TNF- 偽 and IL- 尾 induced by LAMPs was inhibited in a dose-dependent manner, but IL-6 was not inhibited by SP600125, but the production of TNF- 偽 and IL- 尾 was not affected by SP600125, but the production of TNF- 偽 and IL- 尾 was inhibited by SP600125 in a dose-dependent manner. SB203580 and PDTC inhibited the production of three kinds of CKs, TNF- 偽, IL-1 尾 and IL-6. Conclusion: (1) mg lamps can induce THP-1 to produce TNF- 偽 IL-1 尾 and IL-6; 2LAMPs can activate MAPKsNF-kB and AP-1of THP-1 cells; 3LAMPs can activate THP-1 cell line MAPKsNF-kappa B and AP-1. The production of CKs in THP-1 cells is related to the activation of MAPKsN-魏 B.
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R375

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