本文選題：EPCs + E-基因��； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報》2014年16期

【摘要】：目的構(gòu)建轉(zhuǎn)錄因子E2-2基因腺病毒載體,觀測內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPCs)過表達(dá)E2-2基因?qū)NA結(jié)合抑制因子-1(inhibitor of DNA binding/differentiation,ID1)表達(dá)的影響。方法分離、培養(yǎng)并鑒定小鼠骨髓EPCs。RT-PCR法擴(kuò)增E2-2基因CDs全長DNA,克隆入載體pTG19-T后,亞克隆入腺病毒穿梭載體pAdTrack-CMV中,構(gòu)建pAdTrack/E2-2重組載體,與pAdEasy-1骨架質(zhì)粒同源重組形成重組病毒pAd/E2-2,經(jīng)293細(xì)胞包裝,獲具高效感染力的重組pAd/E2-2病毒。將該病毒感染EPCs,倒置顯微鏡觀測經(jīng)感染的EPCs的GFP表達(dá)情況。CCK-8(cell count kit-8)法檢測病毒pAd/E2-2對EPCs生長、增殖的影響。RT-PCR、Western blot分別檢測經(jīng)感染的EPCs中E2-2與ID1基因及其編碼蛋白的表達(dá)情況,并予以定量分析。結(jié)果分離、培養(yǎng)并鑒定到小鼠骨髓EPCs�？寺〉�2013 bp的E2-2基因,并獲得高效感染力的重組pAd/E2-2病毒。CCK-8法檢測表明,與對照比較,過表達(dá)E2-2的EPCs的生長、增殖速度減慢,48h開始變得尤為明顯(P0.01);RT-PCR、Western blot及定量分析結(jié)果顯示,E2-2能下調(diào)ID1的表達(dá),與對照比較,差異具統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論分離、培養(yǎng)并鑒定小鼠骨髓EPCs,克隆出E2-2基因,證實(shí)E2-2能明顯抑制EPCs的生長、增殖,并能下調(diào)ID1基因的表達(dá)。
[Abstract]:Objective to construct the adenovirus vector of transcription factor E2-2 gene and to investigate the effect of E2-2 gene overexpression on the expression of DNA-binding inhibitor 1 (inhibitor of binding / differentiation / differentiation (ID1) in endothelial progenitor cells (endothelial progenitor cells). Methods the full-length DNA of E2-2 gene CDs was amplified by RT-PCR from mouse bone marrow. After cloned into pTG19-T vector, subcloned into adenovirus shuttle vector pAdTrack-CMV, pAdTrack-E2-2 recombinant vector was constructed. The recombinant virus pAd-E2-2 was formed by homologous recombination with pAdEasy-1 skeleton plasmid. The recombinant pAd-E2-2 virus was highly infectious after being packaged in 293 cells. The EPCs were infected with the virus. The expression of EPCs was detected by inverted microscope. CCK-8 (cell count kit-8) was used to detect the effect of pAd-E2-2 on the growth and proliferation of EPCs. RT-PCRX Western blot was used to detect the expression of E2-2 and ID1 genes and their encoded proteins in infected EPCs. And quantitative analysis was made. Results the mouse bone marrow EPCs were isolated, cultured and identified. The E2-2 gene of 2013 BP was cloned, and the recombinant pAd-E2-2 virus. CCK-8 assay showed that the growth of EPCs with overexpression of E2-2 was higher than that of control. The results of Western blot and quantitative analysis showed that E2-2 could down-regulate the expression of ID1, and the difference was statistically significant (P0.01). Conclusion E2-2 gene was isolated, cultured and identified in mouse bone marrow, and E2-2 gene was cloned. It was proved that E2-2 could significantly inhibit the growth and proliferation of EPCs and down-regulate the expression of ID1 gene.
【作者單位】： 成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院干部病房;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81270224);國家自然科學(xué)基金青年基金(81000070)~~
【分類號】：R3416

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本文編號：2114454