發(fā)布時(shí)間：2018-07-06 09:43

  本文選題：HaCaT + EGF��； 參考：《暨南大學(xué)》2006年碩士論文

【摘要】：目的： 探討ERK信號在HaCaT細(xì)胞增殖及凋亡中的作用。 方法： 1．HaCaT細(xì)胞和HEK293細(xì)胞的培養(yǎng)：培養(yǎng)基為含有10％FBS的DMEM培養(yǎng)基，培養(yǎng)于37℃、5％CO_2恒溫飽和濕度培養(yǎng)箱。細(xì)胞80～90％融合時(shí)，0.25％胰蛋白酶消化，37℃孵育5min，加入2mL完全培養(yǎng)基，吹打成單個(gè)細(xì)胞，以1：3的比例接種，通常3～4天即可傳代。實(shí)驗(yàn)時(shí)細(xì)胞接種密度為5×10~4cells／mL。 2．細(xì)胞的處理： 1) 增殖模型的建立：培養(yǎng)板細(xì)胞達(dá)到70～80％融合時(shí)，加入EGF(終濃度分別為1、10和100μg／L)，繼續(xù)培養(yǎng)24h。MEK特異性阻斷劑PD98059(6.25、12.5、25、50和100μM)在EGF加入前5h加入。 2) 凋亡模型的建立：細(xì)胞融合至80％以上時(shí)，PBS洗2次后每孔加入PBS 1mL，將細(xì)胞放置于紫外燈管下照射(低劑量組照射強(qiáng)度為UVA2J／cm~2、UVB10mJ／cm~2；高劑量組為UVA6J／cm~2、UVB 30mJ／cm~2)，對照組不照射。 3．增殖的檢測方法：在培養(yǎng)結(jié)束前每孔加入37kBq的~3H-TdR，繼續(xù)培養(yǎng)6h。 參照Wallac提供的操作程序檢測~3H-TdR的摻入量，結(jié)果以Counts／min(CPM)表示。
[Abstract]:Objective: to investigate the role of ERK signal in the proliferation and apoptosis of HaCaT cells. Methods: 1. Culture of HaCaT cells and HEK293 cells: DMEM medium containing 10 FBS was cultured in 37 鈩，

本文編號：2102375