本文選題：雙酚A + 卵泡內(nèi)膜細(xì)胞��； 參考：《南京醫(yī)科大學(xué)》2007年碩士論文

【摘要】： 目的： 雙酚A(Bisphenol A，BPA)是一種常見(jiàn)的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(Environmental endocrine disruptors，EEDs)，對(duì)女性生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)有潛在的影響。本文通過(guò)大鼠卵巢內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞及顆粒細(xì)胞的原代培養(yǎng)體系，研究BPA對(duì)卵泡內(nèi)膜細(xì)胞睪酮生成和對(duì)細(xì)胞色素P45017α羥化酶(P450c17)、膽固醇側(cè)鏈裂解酶(P450scc)和類(lèi)固醇激素急性調(diào)節(jié)蛋白(StAR)mRNA的影響；以及研究BPA對(duì)顆粒細(xì)胞激素生成及芳香化酶(P450arom)、膽固醇側(cè)鏈裂解酶(P450scc)和類(lèi)固醇激素急性調(diào)節(jié)蛋白(StAR)mRNA的影響，探討B(tài)PA對(duì)女性生殖系統(tǒng)激素生成的影響機(jī)制，論證環(huán)境內(nèi)分泌干擾物BPA影響女性生殖系統(tǒng)生長(zhǎng)，發(fā)育，疾病產(chǎn)生的可能機(jī)理。 方法： 分別采用大鼠的卵泡內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞、顆粒細(xì)胞進(jìn)行體外原代培養(yǎng)，培養(yǎng)72 h后以0、10~(-7)、10~(-6)、10~(-5)、10~(-4) M五個(gè)不同濃度的BPA作用細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)48 h，收集細(xì)胞培養(yǎng)液，用超敏感的固相放射免疫方法測(cè)定內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞生成的睪酮濃度及顆粒細(xì)胞分泌的雌二醇、孕酮的水平。沉淀細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA，，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用熒光實(shí)時(shí)RT-PCR(TaqMan.assay)方法測(cè)定卵泡內(nèi)膜細(xì)胞P450c17a、P450Scc二種酶和StAR mRNA表達(dá)水平及顆粒細(xì)胞P450arom、P450Scc二種酶和StAR mRNA表達(dá)水平的變化。 結(jié)果： BPA刺激原代培養(yǎng)的卵泡內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞睪酮的分泌，培養(yǎng)液中睪酮水平顯著升高(p＜0.05)。睪酮合成相關(guān)的酶的基因表達(dá)水平也升高，在BPA 10~(-4)M劑量組出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。StAR的表達(dá)也顯著增加(p＜0.05)。原代培養(yǎng)的顆粒細(xì)胞孕酮分泌量隨BPA濃度的增加而增加(p＜0.05)，但在10~(-4) M劑量組其濃度出現(xiàn)陡降(p＜0.01)；而雌二醇的分泌量則隨BPA濃度的增加而下降(p＜0.01)。雌孕激素生成相關(guān)基因P450arom mRNA表達(dá)顯著降低；P450Scc表達(dá)量在10~(-7) M到10~(-5)M組逐漸升高(p＜0.05)，而10~(-4)組卻出現(xiàn)顯著降低(p＜0.01)。StAR mRNA表達(dá)則有不同程度的增高(p＜0.05)。 結(jié)論： BPA能直接作用于卵巢內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞及顆粒細(xì)胞：通過(guò)誘導(dǎo)P450c17a，P450Scc等相關(guān)酶的表達(dá)增加、以及增加類(lèi)固醇合成的限速因子-StAR的表達(dá)，增加內(nèi)膜細(xì)胞睪酮的合成；通過(guò)作用于P450arom，P450Scc等相關(guān)酶的表達(dá)以及類(lèi)固醇合成的限速因子-StAR的表達(dá)而干擾顆粒細(xì)胞雌孕激素的分泌。故生物體如果暴露于一定量的BPA，很可能導(dǎo)致生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)的紊亂從而產(chǎn)生一些內(nèi)分泌疾病。其中一部分原因可能是通過(guò)影響卵巢激素生成酶的表達(dá)而造成女性卵巢激素生成水平的異常，從而使下丘腦-垂體-卵巢軸的正常調(diào)節(jié)機(jī)制發(fā)生改變所造成的。
[Abstract]:Objective: bisphenol A (BPA) is a common environmental endocrine disruptor (endocrine), which has a potential effect on female reproductive endocrine system. The primary culture system of rat endometrial stromal cells and granulosa cells was used. To study the effects of BPA on testosterone production and mRNA expression of cytochrome P45017 偽 -hydroxylase (P450c17), cholesterol side chain lyase (P450 SCC) and steroid hormone acute regulatory protein (star) in endometrial follicle cells. The effects of BPA on granulosa hormone production and aromatase (P450 aromatase), cholesterol side chain lyase (P450 SCC) and steroid hormone acute regulatory protein (star) mRNA were studied. The possible mechanism of environmental endocrine disruptor BPA affecting the growth, development and disease of female reproductive system was demonstrated. Methods: rat endometrial stromal cells and granulosa cells were cultured in vitro. After 72 hours of culture, the cells were treated with 10 ~ (-7) 10 ~ (-6) 10 ~ (-5) 10 ~ (-4) M BPA. After 48 hours of culture, the cell culture medium was collected, and the concentration of testosterone produced by endometrial stromal cells and the levels of estradiol and progesterone secreted by granulosa cells were measured by hypersensitive solid phase radioimmunoassay. The total RNAs were extracted from the cells and reversely transcribed into cDNA.The expression levels of two enzymes and star mRNA and the expression levels of P450aromonas P450Scc and star mRNA were measured by TaqMan.Assay in the endometrial cells of follicle. The expression of P450c17aSc and star mRNA in granulosa cells were measured by TaqMan.Assay. The expression of P450c17aFSC and P450Scc mRNA in granulosa cells were determined by TaqMan.Assay. Results: BPA stimulated the secretion of testosterone in primary cultured endometrial stromal cells, and the level of testosterone in culture medium was significantly increased (p < 0.05). The gene expression level of testosterone synthesis-related enzymes was also increased, and the expression of star was significantly increased in BPA 10 ~ (-4) M group (p < 0.05) .Star expression was also significantly increased in BPA 10 ~ (-4) M group (p < 0.05). Progesterone secretion of primary cultured granulosa cells increased with the increase of BPA concentration (p < 0.05), but decreased sharply in 104M group (p < 0.01), while that of estradiol decreased with the increase of BPA concentration (p < 0.01). The expression of P450arom mRNA decreased significantly in the 10 ~ (-7) M to 10 ~ (-5) M groups (p < 0.05), but decreased significantly in the 10 ~ (-4) group (p < 0.01). The star mRNA expression increased in varying degrees (p < 0.05). Conclusion: BPA can directly act on stromal cells and granulosa cells of ovary. By inducing the expression of P450 SCC and other related enzymes, and increasing the expression of steroid synthesis-limiting factor -Star, BPA can directly affect the expression of P450 SCC and P450 SCC in endometrial stromal cells and granulosa cells. Increase the synthesis of testosterone in endometrial cells and interfere with the secretion of estrogen and progesterone in granulosa cells by acting on the expression of P450 SC and steroid biosynthesis limiting factor -Star. Therefore, if the organism is exposed to a certain amount of BPA, it may lead to the disorder of reproductive endocrine system and some endocrine diseases. Some of the reasons may be caused by the abnormal level of female ovarian hormone production by affecting the expression of ovarian hormone producing enzyme, which may result in the change of the normal regulation mechanism of hypothalamus-pituitary-ovary axis.
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R363

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本文編號(hào)：2097674