本文選題：神經(jīng)節(jié)苷脂GD1a + FBJ骨肉瘤細(xì)胞�。� 參考：《沈陽藥科大學(xué)》2007年碩士論文

【摘要】： 神經(jīng)節(jié)苷脂(Gangliosides)是一類含唾液酸的鞘糖脂，存在于細(xì)胞膜的外表面。在胚胎形成、細(xì)胞分化、細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化和細(xì)胞轉(zhuǎn)移等生理現(xiàn)象中發(fā)揮著重要作用。本文闡述了神經(jīng)節(jié)苷脂GD1a的一種新的功能即誘導(dǎo)FBJ病毒感染的小鼠骨肉瘤細(xì)胞產(chǎn)生凋亡。在無血清培養(yǎng)條件下，富含GD1a的FBJ-S1細(xì)胞趨向死亡，而缺乏GD1a的FBJ-LL細(xì)胞卻卻未見明顯影響。通過流式細(xì)胞儀對細(xì)胞進(jìn)行膜聯(lián)蛋白V異硫氰酸熒光素(FITC-AnnexinV)和碘化丙啶(PI)雙染檢測和細(xì)胞周期分析發(fā)現(xiàn)FBJ-S1細(xì)胞在無血清條件下趨向死亡是因凋亡而引起的。因此，我們推測GD1a可誘導(dǎo)FBJ細(xì)胞凋亡。為了驗(yàn)證這一推論，外源性GD1a在無血清培養(yǎng)條件下處理FBJ-LL細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)FBJ-LL細(xì)胞出現(xiàn)死亡。FBJ-S1細(xì)胞通過加入葡萄糖苷神經(jīng)酰胺合成酶抑制劑(D-PDMP)處理和轉(zhuǎn)染入唾液酸轉(zhuǎn)移酶(st3ga15)的siRNA的來抑制GD1a的合成，發(fā)現(xiàn)在無血清條件下經(jīng)D-PDMP處理后FBJ-S1細(xì)胞抵抗死亡，且轉(zhuǎn)染siRNA到FBJ-S1細(xì)胞后得到的單克隆細(xì)胞也同樣抵抗死亡。另外，很多文章報(bào)道神經(jīng)酰胺和神經(jīng)節(jié)苷脂GD3可誘導(dǎo)凋亡，但在發(fā)生凋亡的FBJ細(xì)胞中神經(jīng)酰胺的表達(dá)含量并沒有變化，而GD3并未見在FBJ細(xì)胞中表達(dá)，這說明神經(jīng)酰胺和GD3不是引起FBJ細(xì)胞凋亡的因素。 窖蛋白1(caveolin-1，亦譯為小窩蛋白1)是一種腫瘤抑制蛋白。本文研究發(fā)現(xiàn)，窖蛋白1參與了GD1a誘導(dǎo)的FBJ細(xì)胞凋亡并起著關(guān)鍵作用。FBJ-S1細(xì)胞在無血清條件下趨向死亡，而FBJ-LL細(xì)胞并未出現(xiàn)此現(xiàn)象，逆轉(zhuǎn)錄PCR法檢測發(fā)現(xiàn)FBJ-S1細(xì)胞中窖蛋白1的表達(dá)量是FBJ-LL細(xì)胞的5倍。FBJ-LL細(xì)胞在外源性GD1a處理后促進(jìn)其趨向死亡，免疫印跡法(Western blot)發(fā)現(xiàn)窖蛋白1的表達(dá)量也明顯增加。另外，利用siRNA技術(shù)沉降FBJ-S1細(xì)胞中窖蛋白1的表達(dá)量，無血清培養(yǎng)條件下，結(jié)果使其存活。數(shù)據(jù)表明窖蛋白1可促進(jìn)FBJ細(xì)胞的凋亡。存活蛋白(survivin，亦譯為生存蛋白或生存素)是一種凋亡抑制蛋白，研究發(fā)現(xiàn)窖蛋白1可以調(diào)節(jié)存活蛋白，且存活蛋白也參與了GD1a誘導(dǎo)的FBJ細(xì)胞凋亡。生長因子。因此我們隨機(jī)檢測了FBJ-LL和FBJ-S1細(xì)胞中一些生長因子的mRNA水平表達(dá)，發(fā)現(xiàn)FBJ-LL細(xì)胞中生長因子如PDGFα，，TNFα和VEGFβ的表達(dá)量是FBJ-S1細(xì)胞中的數(shù)倍，且FBJ-S1細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中加入PDGFα或TNFα培養(yǎng)后使其存活。數(shù)據(jù)表明內(nèi)源性GDla可調(diào)節(jié)生長因子的表達(dá)同時(shí)也可誘導(dǎo)凋亡。另外，通過信號傳導(dǎo)抑制劑和細(xì)胞內(nèi)吞抑制劑來研究GDla誘導(dǎo)FBJ細(xì)胞凋亡的機(jī)制，發(fā)現(xiàn)p38MAPK途徑和細(xì)胞內(nèi)吞途徑對GDla誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡發(fā)揮著重要作用。
[Abstract]:Gangliosides (Gangliosides) are a kind of sphingolipids containing sialic acid, which exist on the outer surface of cell membrane. It plays an important role in embryogenesis, cell differentiation, cell proliferation, transformation and cell metastasis. This paper describes a new function of ganglioside GD1a which induces apoptosis of mouse osteosarcoma cells infected with FBJ virus. In serum-free culture, FBJ-S1 cells rich in GD1a tended to die, but FBJ-LL cells lacking GD1a had no obvious effect. FITC-Annexin V (FITC-Annexin V) and Pi (Pi) double staining and cell cycle analysis showed that FBJ-S1 cell death in serum-free condition was caused by apoptosis. Therefore, we speculate that GD1a can induce apoptosis of FBJ cells. In order to verify this inference, FBJ-LL cells were treated with exogenous GD1a in serum-free culture. It was found that FBJ-LL cells died. FBJ-S1 cells inhibited the synthesis of GD1a by adding glucoside ceramide synthase inhibitor (D-PDMP) and siRNA transfected into sialic acid transferase (st3ga15). The monoclonal cells transfected with siRNA into FBJ-S1 cells were also resistant to death. In addition, it has been reported that ceramide and ganglioside GD3 can induce apoptosis, but there is no change in ceramide expression in FBJ cells, but GD3 is not expressed in FBJ cells. This suggests that ceramide and GD 3 are not the factors that induce apoptosis of FBJ cells. Caveolin-1 is a tumor suppressor protein. In this study, we found that cellar protein 1 participated in the apoptosis of FBJ cells induced by GD1a and played a key role. FBJ-S1 cells tended to die in serum-free condition, but FBJ-LL cells did not. The expression of cellar protein 1 in FBJ-S1 cells was 5 times higher than that in FBJ-LL cells by reverse transcriptase polymerase chain reaction. FBJ-LL cells increased to death after treatment with exogenous GD1a. Western blot showed that the expression of cellar protein 1 was also significantly increased. In addition, the expression of cellar protein 1 in FBJ-S1 cells was deposited by siRNA technique and survived in serum-free culture. The data showed that cellar protein 1 could promote the apoptosis of FBJ cells. Survival protein (survivin) is an inhibitor of apoptosis. It has been found that cellar protein 1 can regulate survival protein, and survivin also participates in GD1a induced apoptosis of FBJ cells. Growth factor. Therefore, we randomly detected the mRNA expression of some growth factors in FBJ-LL and FBJ-S1 cells, and found that the expression of growth factors such as PDGF 偽 TNF- 偽 and VEGF 尾 in FBJ-LL cells was several times higher than that in FBJ-S1 cells. Moreover, FBJ-S1 cells were cultured in serum-free medium with PDGF 偽 or TNF 偽. The data showed that endogenous GDla could regulate the expression of growth factor and induce apoptosis. In addition, signal transduction inhibitors and endocytosis inhibitors were used to study the mechanism of GDla induced apoptosis in FBJ cells. It was found that p38 MAPK pathway and intracellular endocytosis pathway play an important role in GDla induced apoptosis.
【學(xué)位授予單位】：沈陽藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R341

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本文編號：2095496