本文選題：神經節(jié)苷脂GD1a + FBJ骨肉瘤細胞　； 參考：《沈陽藥科大學》2007年碩士論文

【摘要】： 神經節(jié)苷脂(Gangliosides)是一類含唾液酸的鞘糖脂，存在于細胞膜的外表面。在胚胎形成、細胞分化、細胞增殖、轉化和細胞轉移等生理現(xiàn)象中發(fā)揮著重要作用。本文闡述了神經節(jié)苷脂GD1a的一種新的功能即誘導FBJ病毒感染的小鼠骨肉瘤細胞產生凋亡。在無血清培養(yǎng)條件下，富含GD1a的FBJ-S1細胞趨向死亡，而缺乏GD1a的FBJ-LL細胞卻卻未見明顯影響。通過流式細胞儀對細胞進行膜聯(lián)蛋白V異硫氰酸熒光素(FITC-AnnexinV)和碘化丙啶(PI)雙染檢測和細胞周期分析發(fā)現(xiàn)FBJ-S1細胞在無血清條件下趨向死亡是因凋亡而引起的。因此，我們推測GD1a可誘導FBJ細胞凋亡。為了驗證這一推論，外源性GD1a在無血清培養(yǎng)條件下處理FBJ-LL細胞，發(fā)現(xiàn)FBJ-LL細胞出現(xiàn)死亡。FBJ-S1細胞通過加入葡萄糖苷神經酰胺合成酶抑制劑(D-PDMP)處理和轉染入唾液酸轉移酶(st3ga15)的siRNA的來抑制GD1a的合成，發(fā)現(xiàn)在無血清條件下經D-PDMP處理后FBJ-S1細胞抵抗死亡，且轉染siRNA到FBJ-S1細胞后得到的單克隆細胞也同樣抵抗死亡。另外，很多文章報道神經酰胺和神經節(jié)苷脂GD3可誘導凋亡，但在發(fā)生凋亡的FBJ細胞中神經酰胺的表達含量并沒有變化，而GD3并未見在FBJ細胞中表達，這說明神經酰胺和GD3不是引起FBJ細胞凋亡的因素。 窖蛋白1(caveolin-1，亦譯為小窩蛋白1)是一種腫瘤抑制蛋白。本文研究發(fā)現(xiàn)，窖蛋白1參與了GD1a誘導的FBJ細胞凋亡并起著關鍵作用。FBJ-S1細胞在無血清條件下趨向死亡，而FBJ-LL細胞并未出現(xiàn)此現(xiàn)象，逆轉錄PCR法檢測發(fā)現(xiàn)FBJ-S1細胞中窖蛋白1的表達量是FBJ-LL細胞的5倍。FBJ-LL細胞在外源性GD1a處理后促進其趨向死亡，免疫印跡法(Western blot)發(fā)現(xiàn)窖蛋白1的表達量也明顯增加。另外，利用siRNA技術沉降FBJ-S1細胞中窖蛋白1的表達量，無血清培養(yǎng)條件下，結果使其存活。數(shù)據(jù)表明窖蛋白1可促進FBJ細胞的凋亡。存活蛋白(survivin，亦譯為生存蛋白或生存素)是一種凋亡抑制蛋白，研究發(fā)現(xiàn)窖蛋白1可以調節(jié)存活蛋白，且存活蛋白也參與了GD1a誘導的FBJ細胞凋亡。生長因子。因此我們隨機檢測了FBJ-LL和FBJ-S1細胞中一些生長因子的mRNA水平表達，發(fā)現(xiàn)FBJ-LL細胞中生長因子如PDGFα，，TNFα和VEGFβ的表達量是FBJ-S1細胞中的數(shù)倍，且FBJ-S1細胞在無血清培養(yǎng)基中加入PDGFα或TNFα培養(yǎng)后使其存活。數(shù)據(jù)表明內源性GDla可調節(jié)生長因子的表達同時也可誘導凋亡。另外，通過信號傳導抑制劑和細胞內吞抑制劑來研究GDla誘導FBJ細胞凋亡的機制，發(fā)現(xiàn)p38MAPK途徑和細胞內吞途徑對GDla誘導的細胞凋亡發(fā)揮著重要作用。
[Abstract]:Gangliosides (Gangliosides) are a kind of sphingolipids containing sialic acid, which exist on the outer surface of cell membrane. It plays an important role in embryogenesis, cell differentiation, cell proliferation, transformation and cell metastasis. This paper describes a new function of ganglioside GD1a which induces apoptosis of mouse osteosarcoma cells infected with FBJ virus. In serum-free culture, FBJ-S1 cells rich in GD1a tended to die, but FBJ-LL cells lacking GD1a had no obvious effect. FITC-Annexin V (FITC-Annexin V) and Pi (Pi) double staining and cell cycle analysis showed that FBJ-S1 cell death in serum-free condition was caused by apoptosis. Therefore, we speculate that GD1a can induce apoptosis of FBJ cells. In order to verify this inference, FBJ-LL cells were treated with exogenous GD1a in serum-free culture. It was found that FBJ-LL cells died. FBJ-S1 cells inhibited the synthesis of GD1a by adding glucoside ceramide synthase inhibitor (D-PDMP) and siRNA transfected into sialic acid transferase (st3ga15). The monoclonal cells transfected with siRNA into FBJ-S1 cells were also resistant to death. In addition, it has been reported that ceramide and ganglioside GD3 can induce apoptosis, but there is no change in ceramide expression in FBJ cells, but GD3 is not expressed in FBJ cells. This suggests that ceramide and GD 3 are not the factors that induce apoptosis of FBJ cells. Caveolin-1 is a tumor suppressor protein. In this study, we found that cellar protein 1 participated in the apoptosis of FBJ cells induced by GD1a and played a key role. FBJ-S1 cells tended to die in serum-free condition, but FBJ-LL cells did not. The expression of cellar protein 1 in FBJ-S1 cells was 5 times higher than that in FBJ-LL cells by reverse transcriptase polymerase chain reaction. FBJ-LL cells increased to death after treatment with exogenous GD1a. Western blot showed that the expression of cellar protein 1 was also significantly increased. In addition, the expression of cellar protein 1 in FBJ-S1 cells was deposited by siRNA technique and survived in serum-free culture. The data showed that cellar protein 1 could promote the apoptosis of FBJ cells. Survival protein (survivin) is an inhibitor of apoptosis. It has been found that cellar protein 1 can regulate survival protein, and survivin also participates in GD1a induced apoptosis of FBJ cells. Growth factor. Therefore, we randomly detected the mRNA expression of some growth factors in FBJ-LL and FBJ-S1 cells, and found that the expression of growth factors such as PDGF 偽 TNF- 偽 and VEGF 尾 in FBJ-LL cells was several times higher than that in FBJ-S1 cells. Moreover, FBJ-S1 cells were cultured in serum-free medium with PDGF 偽 or TNF 偽. The data showed that endogenous GDla could regulate the expression of growth factor and induce apoptosis. In addition, signal transduction inhibitors and endocytosis inhibitors were used to study the mechanism of GDla induced apoptosis in FBJ cells. It was found that p38 MAPK pathway and intracellular endocytosis pathway play an important role in GDla induced apoptosis.
【學位授予單位】：沈陽藥科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R341

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本文編號：2095496