本文選題：胰腺干樣細胞 + 巢蛋白(Nestin)�。� 參考：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2006年碩士論文

【摘要】： 目的:自新生昆明小鼠胰腺組織中分離出胰腺干樣細胞,在體外條件下培養(yǎng),觀察其形態(tài)學(xué)和生物學(xué)特性,并進行初步鑒定;在胚胎成纖維細胞作為飼養(yǎng)層的培養(yǎng)條件下進行連續(xù)傳代,獲得單一性和富集度均較高的胰腺干樣細胞。 方法:取新生SPF級昆明小鼠的胰腺組織,使用Ⅴ型膠原酶消化,采用Percoll不連續(xù)密度梯度離心,使胰腺組織內(nèi)、外分泌部細胞分散在三個不同的密度界面,通過雙硫腙染色結(jié)合細胞生長特性對細胞來源進行檢測;來源于胰腺內(nèi)、外分泌部的細胞,分別以無血清、添加bFGF和EGF等生長因子的低糖DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng),倒置相差顯微鏡下觀察其形態(tài)學(xué)特征及生長特性,通過免疫細胞化學(xué)染色等技術(shù)和方法,檢測胰腺干細胞特異性標志-Nestin,對胰腺組織中的胰腺干樣細胞進行初步鑒定,并對其體外分化潛能進行觀察。體外培養(yǎng)小鼠胚胎成纖維細胞,傳至第三代后與絲裂霉素C作用,制成飼養(yǎng)層;在飼養(yǎng)層的培養(yǎng)條件下進行胰腺干樣細胞的傳代培養(yǎng)。 結(jié)果:采用Percoll不連續(xù)密度梯度離心和進行細胞來源檢測后顯示,胰腺內(nèi)分泌部細胞集中在第一、二密度界面,胰腺外分泌部的細胞分布在第三密度界面。體外培養(yǎng)觀察發(fā)現(xiàn),從胰腺內(nèi)、外分泌部獲取的胰腺組織細胞,均存在一類大、圓、單個核的細胞,呈附壁生長,具有較活躍的分裂增殖能力,堿性磷酸酶染色呈陽性,表達胰腺干細胞的特異性標志-巢蛋白(Nestin);在無飼養(yǎng)層條件下,隨著體外培養(yǎng)時間的延長,來源于胰腺內(nèi)分泌部的部分胰腺干樣細胞表達PDX-1,呈現(xiàn)向胰腺內(nèi)分泌部β-細胞分化的趨勢;來源于胰腺外分泌部的部分胰腺干樣細胞表達胰腺導(dǎo)管上皮細胞特異性標志CK-19,呈現(xiàn)向胰腺外分泌部導(dǎo)管上皮細胞分化的趨勢。在飼養(yǎng)層的培養(yǎng)條件下,胰腺干樣細胞能連續(xù)傳至第三代,均保持未分化狀態(tài)和旺盛的增殖能力。
[Abstract]:Objective: to isolate pancreatic stem cells from the pancreatic tissue of newborn Kunming mice, culture in vitro, observe their morphological and biological characteristics, and identify them preliminarily. Under the condition of embryo fibroblast as feeder layer, the pancreatic dry like cells with high uniformity and enrichment were obtained. Methods: pancreatic tissues of new SPF Kunming mice were digested with type 鈪，

本文編號：2084203