本文選題：雌激素 + 磷酸果糖激酶�。� 參考：《中南大學(xué)》2007年碩士論文

【摘要】： 胰島素抵抗，是指外周組織及器官，主要是骨骼肌、脂肪組織及肝臟，對(duì)生理水平胰島素的敏感性及反應(yīng)性低于正常的效應(yīng)。因而正常量的胰島素產(chǎn)生低于正常的生理效應(yīng)。在不同疾病狀態(tài)下所產(chǎn)生的胰島素抵抗，其機(jī)制不盡相同。 絕經(jīng)后婦女的雌激素水平明顯下降。絕經(jīng)后婦女的出現(xiàn)肥胖與胰島素抵抗，并發(fā)展為2型糖尿病的機(jī)率明顯增加，而糖尿病患者的心血管疾病的發(fā)病率明顯增高，說明胰島素抵抗與心血管疾病的發(fā)生有著密切聯(lián)系。有研究表明，，雌激素對(duì)治療更年期婦女胰島素抵抗綜合癥、預(yù)防心血管疾病起非常重要的作用。雌激素替代能在短期內(nèi)降低絕經(jīng)后婦女空腹血清葡萄糖水平、胰島素水平，提高胰島素敏感性，緩解胰島素抵抗綜合癥，并使絕經(jīng)后婦女的心血管疾病發(fā)生率減少35-50％。 2002年7月，美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院婦女健康倡議(WHI)的一項(xiàng)臨床試驗(yàn)結(jié)果表明，使用激素替代療法的女性患中風(fēng)和心臟病明顯增加，并建議中止激素替代治療。然而國(guó)內(nèi)外許多專家仍支持激素替代療法并認(rèn)為：WHI的研究主要目的是研究激素替代療法與心血管疾病和乳腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，并沒有全面總結(jié)激素替代療法的益處。激素替代治療的利與弊再次成為當(dāng)前研究的一個(gè)熱點(diǎn)。2005年，Michael E．等科學(xué)家在Science雜志上指出：為了合理客觀評(píng)價(jià)雌激素對(duì)心血管系統(tǒng)的作用，需從細(xì)胞和分子水平研究揭示其作用機(jī)制，從而闡明其利與弊。 本論文從細(xì)胞水平和分子水平深入探討雌激素對(duì)心肌細(xì)胞H9c2糖代謝的影響及其機(jī)制，并為理解合理使用激素替代療法提供有力的理論依據(jù)。 方法： H9c2細(xì)胞用含10％去雌激素胎牛血清的DMEM培基(采用右旋糖苷T-70包裹的活性碳吸附法去除血清中的雌激素)，在37℃，5％CO_2環(huán)境中培養(yǎng)。待細(xì)胞生長(zhǎng)至60％匯合，用無血清DMEM培基洗滌，并在無血清DMEM培基中培養(yǎng)1小時(shí)，然后將細(xì)胞培養(yǎng)在含2％的去雌激素牛血清的DMEM培基中，并進(jìn)行如下處理：(1)細(xì)胞分3組，在無雌激素培養(yǎng)24小時(shí)后，0，1 nM，100 nM的E2處理10分鐘，0濃度E2組為對(duì)照組；(2)細(xì)胞分5組，分別用0，0.01 nM，1nM，100nM，1μM的E2處理24小時(shí)，0濃度E2組為對(duì)照組；(3)細(xì)胞分4組，分別用1 nM E2，0 E2，1 nM E2+10 nM ICI和1 nM E2+100 nM ICI處理24小時(shí)，1 nM E2組為對(duì)照組。每組5個(gè)樣品。檢測(cè)(1)測(cè)定葡萄糖代謝關(guān)鍵酶PFK、GS、ICDH活性；(2)半定量RT-PCR方法檢測(cè)PFK-M、GS、ICDH-α在mRNA水平表達(dá)差異；(3)Western blotting檢測(cè)PFK-M亞基、GS在蛋白質(zhì)水平表達(dá)差異。 結(jié)果： (1)經(jīng)10分鐘的雌激素作用后，1 nM E2和100 nM E2組中PFK活性與0濃度E2組的比較都無顯著性差異(p＞0.05，p＞0.05)。1 nM和100 nM E2組中GS活性(總活性和活化活性)與0濃度E2組的比較都無顯著性差異(p＞0.05，p＞0.05，p＞0.05，p＞0.05)。1 nM和100 nME2組中ICDH活性與對(duì)照組的比較都無顯著性差異(p＞0.05，p＞0.05)。 (2)經(jīng)24小時(shí)雌激素作用后，0.01 nM、1 nM、100 nM及1μME2各組的PFK活性較0濃度E2組明顯上升(p＜0.05，p＜0.05，p＜0.05和p＜0.05)。1 nM雌二醇組顯著高于0.01 nM E2組(p＜0.05)、100nM E2組(p＜0.05)和1μM E2組(p＜0.05)。同樣的結(jié)果，見于GS的活性的變化。0.01 nM、1 nM、100 nM及1μM E2各組的GS活性(總活性和活化活性)較對(duì)照組明顯上升(p＜0.05，p＜0.05，p＜0.05和p＜0.05)。1 nM E2組顯著高于0.01 nM E2組(p＜0.05)、100 nM E2組(p＜0.05)和1μM E2組(p＜0.05)。而0.01 nM、1 nM、100 nM及1μM E2各組中ICDH活性與對(duì)照組的比較都無顯著性差異(p＞0.05，p＞0.05，p＞0.05，p＞0.05)。 (3)雌激素受體抑制劑ICI 182，780(ICI)能降低1nM E2組的PFK活性與總GS的活性。其中1nM E2+10nM ICI組和1nM E2+100nM ICI組降低1nM E2所誘導(dǎo)增加的PFK活性約36％(p＜0.05)與70％(p＜0.05)，1nM E2+10nM ICI組和1nM E2+100nM ICI組降低1nM E2所誘導(dǎo)的總GS活性38％(p＜0.05)與68％(p＜0.05)。 (4) RT—PCR結(jié)果表明，0.01 nM、1 nM、100 nM和1μM E2各組的PFK-M其mRNA表達(dá)量較0濃度E2組明顯上升(p＜0.05，p＜0.05，p＜0.05和p＜0.05)。其中1nM E2作用效果顯著高于0.01 nME2組(p＜0.05)，100 nM E2組(p＜0.05)和1μM E2組(p＜0.05)。0.01 nM、1 nM、100 nM和1μM E2各組的GS mRNA表達(dá)量較0濃度E2組明顯上升(p＜0.05，p＜0.05，p＜0.05和p＜0.05)。其中1nM E2作用效果顯著高于0.01 nM E2組(p＜0.05)，100 nM E2組(p＜0.05)和1μM E2組(p＜0.05)。而0.01 nM，1 nM，100 nM和1μM E2各組ICDH-α亞基mRNA表達(dá)量與對(duì)照組沒有顯著性差異(p＞0.05，p＞0.05，p＞0.05和p＞0.05)。 (5) Western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示：0.01nM，1 nM 1 nM，100 nM及1μM E2刺激24小時(shí)以后，PFK-M的蛋白表達(dá)都較0濃度E2組明顯上升(p＜0.05，p＜0.05，p＜0.05和p＜0.05)。1nM E2組PFK-M的蛋白表達(dá)顯著高于0.01nM(p＜0.05)，100 nM(p＜0.05)和1μM E2組(p＜0.05)。同樣，0.01nM，1 nM，100 nM及1μM E2組GS的蛋白表達(dá)都較0濃度E2組明顯上升(p＜0.05，p＜0.05，p＜0.05和p＜0.05)。1nM E2組GS的蛋白表達(dá)量顯著高于0.01nM(p＜0.05)，100 nM(p＜0.05)和1μM E2組(p＜0.05)。 (6)1nM E2+10nM ICI組能降低1nM E2所誘導(dǎo)增加的PFK-M的mRNA表達(dá)約35％(p＜0.05)，1nM E2+100nM ICI組能降低1nME2所誘導(dǎo)增加的PFK-M mRNA表達(dá)約63％(p＜0.05)。相應(yīng)組別中GS的mRNA表達(dá)量則降低約32％(p＜0.05)與60％(p＜0.05)。蛋白質(zhì)水平上的改變與mRNA改變相一致。 結(jié)論 1．雌激素通過ER介導(dǎo)的方式，提高PFK與GS活性，促進(jìn)PFK-M與GS在mRNA與蛋白質(zhì)水平的表達(dá)，促進(jìn)葡萄糖氧化利用，從而改善心肌糖代謝。 2．雌激素通過基因表達(dá)而不是快速調(diào)節(jié)方式增加酶活性。 3．E2不影響細(xì)胞ICDH的活性與ICDH-αmRNA表達(dá)。 4．雌激素對(duì)酶活性的影響存在著劑量效應(yīng)，其最適濃度是生理濃度(1 nM E2)。 5．在絕經(jīng)后婦女的激素替代治療(HRT)中，選用適當(dāng)?shù)拇萍に赜昧渴顷P(guān)鍵。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R341

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉美蓮,徐霞,謝平,盧瑾,陳淑華,曾衛(wèi)民,宋惠萍;長(zhǎng)期雌激素替代治療對(duì)血壓及心肌IR和IRS-1表達(dá)的影響[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年01期

2 謝平,劉美蓮,曾衛(wèi)民,黃建軍,陳淑華,盧瑾,徐霞,宋惠萍;雌激素和高胰島素調(diào)節(jié)胰島素受體底物-1,2表達(dá)機(jī)制研究[J];中國(guó)病理生理雜志;2005年01期

本文編號(hào)：2080563