本文選題：福氏2a痢疾桿菌 + ArgT　； 參考：《鄭州大學(xué)》2005年碩士論文

【摘要】：福氏2a痢疾桿菌在37℃條件下具有毒力,而在30℃時(shí)不具有毒力,原因是其喪失了侵襲力,有研究表明福氏2a痢疾桿菌在30℃條件下高表達(dá)ArgT蛋白,而在37℃條件下表達(dá)量很低,ArgT蛋白的低溫誘導(dǎo)表達(dá)未有相關(guān)報(bào)道,這意味著研究ArgT的高表達(dá)與2457T在低溫時(shí)沒有毒力的關(guān)系既有意義,同時(shí)又富于挑戰(zhàn)性。 目的: 研究賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸結(jié)合蛋白(ArgT蛋白)與痢疾桿菌毒力的相關(guān)性;探討ArgT蛋白在低溫時(shí)高表達(dá)可能的機(jī)制以及在痢疾桿菌生長(zhǎng)過程中的作用。 方法: 一、福氏2a痢疾桿菌2457T argT基因插入突變體的構(gòu)建 1.同源序列的克隆:選定argT基因中間一段約440bp的序列作為進(jìn)行同源重組的同源序列,定義為argTI,將PCR擴(kuò)增的argTI產(chǎn)物與pMD18-T克隆載體連接,將重組子轉(zhuǎn)化入DH5α感受態(tài)中,用藍(lán)白斑法篩選陽(yáng)性克隆。用BamHⅠ和SalⅠ酶切重組質(zhì)粒pMDargTI,得到同源序列argTI。2.重組質(zhì)粒pXLargTI的構(gòu)建:將argTI與同樣經(jīng)BamHⅠ和SalⅠ酶切過的自殺質(zhì)粒pXL275進(jìn)行連接,電擊轉(zhuǎn)化S_(17-1)λpir感受態(tài),用氯霉素和鏈霉素雙抗平板篩選陽(yáng)性克隆pXLargTI。3.細(xì)菌固相交配:將2457T野生株(受體菌)和含有pXLargTI的S_(17-1)λpir按1:1混合涂無(wú)抗性LB平板,37℃培養(yǎng)5h后用新鮮液體LB洗下菌體,依次稀釋10倍、
[Abstract]:Shigella flexneri 2a is virulent at 37 鈩，

本文編號(hào)：2077158