本文選題：幽門螺桿菌 + 中性粒細(xì)胞激活蛋白　； 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2006年碩士論文

【摘要】： 第一部分:幽門螺桿菌NapA-CtxB融合蛋白的基因克隆與表達(dá) 目的:采用基因工程技術(shù)克隆、表達(dá)幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,H.pylori)中性粒細(xì)胞激活蛋白NapA與霍亂毒素B亞單位ctxB融合基因NapA-ctxB,為研制H.pylori疫苗提供有效抗原,為探討NapA致病機(jī)理、制備預(yù)防H.pylori感染的疫苗奠定基礎(chǔ)。 方法:用PCR方法擴(kuò)增ctxB目的基因片段,克隆至pQE30-NapA質(zhì)粒的NapA基因上游,構(gòu)建含雙基因的表達(dá)質(zhì)粒pQE-nctB,轉(zhuǎn)化E.coli DH5α,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白NCTB;Western blot分析其抗原性。結(jié)果:經(jīng)測序HCTB融合基因片段由807bp組成,編碼269個氨基酸殘基的多肽。經(jīng)SDS-PAGE分析相對分子量(Mr)約為30 000�？扇苄员磉_(dá)占全菌的27%以上,經(jīng)親和層析后可獲得純度為94%以上的重組蛋白。Western blot分析顯示能分別與NpaA抗血清和CT抗血清反應(yīng)。 結(jié)論:NapA和ctxB融合基因原核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建成功,并在大腸桿菌DH5α中高效的表達(dá)。 第二部分:幽門螺桿菌重組NapA-IgY和NapA-CtxB-IgY的制備 目的:以重組幽門螺桿菌中性粒細(xì)胞激活蛋白(NapA)和NapA-CtxB為抗原,制備高效價的抗NapA蛋黃抗體(IgY)和抗NCTB蛋黃抗體(IgY),為研制幽門螺桿菌治療、預(yù)防性抗體奠定基礎(chǔ)。方法:以制備的重組蛋白免疫雞,水稀釋結(jié)合氯仿有機(jī)沉淀法提取IgY。ELISA法測定抗體產(chǎn)生的時間-效價變化。將效價高的NapA-IgY
[Abstract]:The first part: cloning and expression of the fusion protein of Helicobacter pylori NapA-CtxB objective: to clone the fusion protein of Helicobacter pylori NapA-CtxB by genetic engineering technique. To express the fusion gene NapA-ctxB of Helicobacter pylori Helicobacter pylori (Helicobacter pylori) neutrophil activating protein NapA and cholera toxin B subunit ctxB, to provide an effective antigen for the development of H. pylori vaccine, to explore the pathogenesis of NapA and to prepare a vaccine to prevent H. pylori infection. Methods: the ctxB gene fragment was amplified by PCR and cloned into the upstream of Napa gene of pQE30-NapA plasmid. The expression plasmid pQE-nctB containing two genes was constructed and transformed into E. coli DH5 偽. Its antigenicity was analyzed by blot induced by IPTG. Results: the fusion gene was composed of 807bp and encoded 269 amino acid residues. SDS-PAGE analysis showed that the relative molecular weight was about 30 000. The recombinant protein with purity of more than 94% was obtained by affinity chromatography. Western blot analysis showed that the recombinant protein could react with NpaA antiserum and CT antiserum respectively. Conclusion the prokaryotic expression plasmid of the fusion gene of the two fusion genes was successfully constructed and highly expressed in Escherichia coli DH5 偽. The second part: preparation of recombinant NapA-IGY and NapA-CtxB-IGY of Helicobacter pylori objective: to use the recombinant Helicobacter pylori neutrophil activator protein NapA and NapA-CtxB as antigens. The preparation of high titer anti-NapA yolk antibody (IgY) and anti-NCTB yolk antibody (IgYY) laid the foundation for the development of Helicobacter pylori treatment and prophylactic antibody. Methods: the chicken was immunized with recombinant protein. The time-titer of antibody was determined by using the method of water dilution and chloroform organic precipitation to extract IgY. Elisa. NapA-IGY with high tite
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R392

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本文編號：2048717