本文選題：肺炎支原體 + 膜脂蛋白��； 參考：《武漢大學》2005年碩士論文

【摘要】：目的 用Triton X-114 提取肺炎支原體的膜脂蛋白(Mp-LAMP),觀察Mp-LAMP對ECV304細胞膜表面細胞間粘附分子1(mICAM-1)表達的影響,并初步探討膜脂蛋白中的活性成分;觀察抗氧化劑維生素C對Mp-LAMP誘導ECV304細胞、A549細胞表達mICAM-1的影響,為闡明肺炎支原體感染所致炎性反應奠定基礎,并探討維生素C對肺炎支原體膜脂蛋白誘導的炎癥反應的抑制作用。 方法 本實驗主要分為兩個階段:第一階段提取肺炎支原體膜脂蛋白,并用提取的膜脂蛋白刺激臍靜脈血管內(nèi)皮細胞系ECV304細胞。采用流式細胞法檢測不同Mp-LAMP濃度(0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml、25μg/ml、30μg/ml、40μg/ml)及不同作用時間(0h、4h、8h、16h、24h、32h)對ECV304細胞表達mICAM-1水平的影響;用蛋白酶K(0.2μg/ml)及脂蛋白脂肪酶(0.2μg/ml)處理Mp-LAMP,以觀察兩種酶對膜脂蛋白誘導的mICAM-1表達水平的影響。第二階段用流式細胞術檢測不同濃度維生素C(0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)對Mp-LAMP誘導ECV304細胞及肺上皮細胞系A549細胞表達mICAM-1水平的影響。 結果 與基礎表達水平相比,ECV304細胞受到Mp-LAMP作用后,mICAM-1的表達水平明顯上調(diào)(P0.01),且對Mp-LAMP具有濃度依賴性,但當Mp-LAMP的刺激濃度超過25μg/ml后,mICAM-1的表達水平不再升高。隨著Mp-LAMP作用時間的延長,ECV304細胞mICAM-1表達水平逐漸上升,16—24h之間達到高峰,然后開始下降;經(jīng)蛋白酶K消化后的Mp-LAMP仍然可以誘導ECV304細胞mICAM-1表達水平的上調(diào),與Mp-LAMP對照組相比無顯著性差異(P0.05);而經(jīng)脂蛋白脂肪酶消化的Mp-LAMP誘導ECV304細胞表達mICAM-1的能力與對照相比則明顯下降(P0.01);與對照組相比,不同濃度的維生素C對膜脂蛋白刺激A549細胞表達mICAM-1的水平無顯著性差異(P0.05),但對膜脂蛋白刺激ECV304細胞表達mICAM-1具有抑制作用(P0.05),維生素C濃度越高,抑制作
[Abstract]:Objective to study the effect of Mp-LAMP on the expression of intercellular adhesion molecule (1mICAM-1) on the surface of ECV304 cell membrane, and to explore the active components of membrane lipoprotein (MMP) in mycoplasma pneumoniae extracted from Mycoplasma pneumoniae by Triton X-114, and to investigate the effect of Mp-LAMP on the expression of ICAM-1 on ECV304 cell membrane. To observe the effect of vitamin C on the expression of mICAM-1 in ECV304 cells induced by Mp-LAMP, and to lay a foundation for elucidating the inflammatory response induced by mycoplasma pneumoniae infection. To investigate the inhibitory effect of vitamin C on the inflammatory response induced by mycoplasma pneumoniae membrane lipoprotein. Methods the experiment was divided into two stages: in the first stage, mycoplasma pneumoniae membrane lipoprotein was extracted, and the ECV304 cell line was stimulated by the extracted membrane lipoprotein. The expression of mICAM-1 in ECV304 cells was detected by flow cytometry with different Mp-LAMP concentrations of 0 渭 g / ml (5 渭 g / ml) and 10 渭 g / ml / ml (15 渭 g / ml) and 20 渭 g / 20 渭 g / ml ~ (20 渭 g / ml), respectively, and the effect of two enzymes on the expression of mICAM-1 in ECV304 cells induced by lipoprotein membrane was observed by observing the effects of two kinds of enzymes on the expression of mICAM-1 in ECV304 cells induced by lipoprotein membrane at 8 h, 8 h, 16 h, 24 h and 32 h), and treated with protease K (0.2 渭 g / ml) and lipoprotein lipase (0.2 渭 g / ml) to observe the effects of the two enzymes on the expression of mICAM-1 in ECV304 cells induced by lipoprotein membrane. In the second stage, flow cytometry was used to detect the effect of different concentrations of vitamin C 0 渭 mol / L ~ (25 渭 mol / L) ~ (50 渭 mol / L ~ (-1) ~ (100 渭 mol / L ~ (-1) on the expression of mICAM-1 in ECV304 cells and lung epithelial cell line A549 induced by Mp-LAMP. Results compared with the basic expression level, the expression of mICAM-1 in ECV304 cells was significantly up-regulated by Mp-LAMP and was concentration-dependent on Mp-LAMP, but the expression level of mICAM-1 in ECV304 cells did not increase when the stimulation concentration of Mp-LAMP exceeded 25 渭 g/ml. The expression of mICAM-1 in ECV304 cells increased gradually with the prolongation of Mp-LAMP and reached its peak between 16-24 hours and then decreased, and the expression level of mICAM-1 in ECV304 cells was still up-regulated by Mp-LAMP after digestion with protease K, and the expression of mICAM-1 was up-regulated in ECV304 cells. There was no significant difference between Mp-LAMP and Mp-LAMP, but the ability of Mp-LAMP digested by lipoprotein lipase to induce mICAM-1 expression in ECV304 cells was significantly lower than that in control group (P 0.01). There was no significant difference in the expression of mICAM-1 in A549 cells stimulated by membrane lipoprotein at different concentrations of vitamin C, but it had an inhibitory effect on the expression of mICAM-1 in ECV304 cells stimulated by membrane lipoprotein. The higher the concentration of vitamin C was, the more inhibitory effect was on the expression of mICAM-1 in ECV304 cells.
【學位授予單位】：武漢大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R375

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