酵母雙雜交技術(shù)篩選與SOX4相互作用的蛋白質(zhì)及其功能研究
本文選題:SOX4 + Ubc9。 參考:《中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2005年碩士論文
【摘要】:SOX4是SOX[SRY(Sex-related region Y)-box]轉(zhuǎn)錄因子家族重要成員,在胚胎發(fā)育過程中起關(guān)鍵的調(diào)控作用。SOX4選擇性表達于動物卵巢,睪丸,胸腺以及T,前B淋巴細胞中。近年來越來越多的研究表明,SOX4在許多腫瘤組織中高表達,包括乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、成髓細胞瘤以及肝癌等,提示SOX4可能與腫瘤形成有關(guān)。另有研究顯示,SOX4在前列腺素誘導(dǎo)的肝細胞凋亡中表達增加,提示它可能參與了凋亡調(diào)控。SOX4參與了許多生理及病理過程的調(diào)控,但它發(fā)揮作用的機制尚不清楚。為了進一步揭示SOX4重要的生物學(xué)功能,特別是它在細胞凋亡中發(fā)揮的重要作用,我們應(yīng)用酵母雙雜交篩選技術(shù)對SOX4相互作用蛋白質(zhì)進行了篩選并對其功能進行了初步研究。 我們分別以人SOX4的兩個片斷SOX4(aa1-133)和SOX4(aa130-380)分別作為誘餌,從人乳腺文庫中篩選與其相互作用的蛋白質(zhì)。通過四缺培養(yǎng)板的初步篩選,我們從總共4.11x10~6個文庫質(zhì)粒中得到184個候選克隆可能與SOX4存在相互作用,隨后經(jīng)過藍白斑繼續(xù)篩選,剩下138個候選克隆。提取138個文庫質(zhì)粒后再分別與誘餌質(zhì)粒共轉(zhuǎn)酵母細胞后再通過四缺培養(yǎng)板和藍白斑篩選,最終我們得到4個陽性克隆。測序結(jié)果表明,這4個克隆為同一基因來源:Ubc9(Ubiquitin-conjugating enzyme 9)。Ubc9蛋白全長158個氨基酸,從酵母到人進化高度保守,是泛素連接E2酶(Ubiquitin-Conjugating Enzyme)家族重要成員。我們從人乳腺文庫中釣取了其cDNA序列,為下一步的結(jié)構(gòu)和功能研究做好準備。SOX4與Ubc9之間的相互作用隨后通過體
[Abstract]:SOX4 plays a key role in the development of tumor . SOX4 is highly expressed in many tumor tissues , including breast cancer , colon cancer , lung cancer , myelocytoma and liver cancer .
A total of 184 candidate clones were isolated from a total of 4 . 11 10 - 6 library plasmids with SOX4 ( aa1 - 133 ) and SOX4 ( aa130 - 380 ) , respectively . The total length of Ubc9 protein is 158 amino acids and is highly conserved from yeast to human evolution . It is an important member of ubiquitin - linked E2 enzyme family .
【學(xué)位授予單位】:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2005
【分類號】:Q789
【相似文獻】
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,本文編號:2039304
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