發(fā)布時(shí)間：2018-06-18 03:45

  本文選題：MAb03.2C1-C2 + 白念珠菌�。� 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2006年碩士論文

【摘要】： 目的:觀察抗白念珠菌芽管胞壁外膜單克隆抗體MAb03.2C1-C2的特異性,并初步應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室口腔念珠菌病真菌涂片菌絲陽(yáng)性標(biāo)本中白念珠菌的檢測(cè),以探討其用于臨床真菌檢測(cè)可行性及其意義,并用于白念珠菌與都柏林念珠菌的實(shí)驗(yàn)室鑒別。分析該單抗靶抗原表位的性質(zhì),對(duì)其抗原性質(zhì)進(jìn)行分析。 方法:復(fù)蘇凍存的雜交瘤細(xì)胞株03.2C1-C2,傳代培養(yǎng)20代,檢測(cè)培養(yǎng)液中單抗滴度,觀察雜交瘤細(xì)胞持續(xù)分泌抗體的穩(wěn)定性;用雜交瘤技術(shù)獲得小鼠腹水單抗MAb03.2C1-C2。用不同念珠菌的孢子和菌絲、其他常見酵母菌、細(xì)菌做抗原,用間接免疫熒光法(IIF)檢測(cè)抗體特異性。收集臨床口腔念珠菌病患者口腔真菌涂片中菌絲陽(yáng)性標(biāo)本,用MAb03.2C1-C2通過(guò)IIF方法檢測(cè)白念珠菌。用不同的液體培養(yǎng)基在不同的溫度條件下誘導(dǎo)白念珠菌和都柏林念珠菌的菌絲形成,用該單抗通過(guò)IIF試驗(yàn)鑒別兩者。用生化試劑處理白念珠菌芽管后,觀察其與單抗結(jié)合情況,通過(guò)IIF試驗(yàn)分析抗原表位性質(zhì)。 結(jié)果: 1. 125株臨床分離白念珠菌芽管或菌絲100%可與MAb03.2C1-C2結(jié)合,孢子均不與單抗結(jié)合。都柏林念珠菌、類星形念珠菌、熱帶念珠菌、克柔氏念珠菌、季也蒙念珠菌、近平滑念珠菌、高里念珠菌、葡萄牙念珠菌、光滑念珠菌、產(chǎn)膜念珠菌、軟念珠菌、副禿發(fā)念珠菌、產(chǎn)阮念珠菌、木藍(lán)念珠菌的孢子、菌絲表面沒(méi)有可以與MAb03.2C1-C2相結(jié)合的靶抗原。新型隱球菌、無(wú)名酵母、粘紅酵母、光滑球擬酵母、皮狀絲孢酵母、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌表面均不存在可與該單抗相結(jié)合的靶抗原。MAb03.2C1-C2特異性好。 2.臨床口腔念珠菌病患者真菌涂片中鏡檢菌絲陽(yáng)性標(biāo)本,IIF試驗(yàn)檢測(cè)白念珠菌結(jié)果與實(shí)驗(yàn)室常規(guī)培養(yǎng)鑒定結(jié)果一致。 3.用不完全1640液37℃誘導(dǎo)靜止態(tài)的白念珠菌和都柏林念珠菌孢子,6h后兩者菌絲形成率最高。 4.復(fù)蘇凍存1年、2年的雜交瘤細(xì)胞,傳代培養(yǎng)20代后,培養(yǎng)液中抗體效價(jià)通
[Abstract]:Objective: To observe the specificity of monoclonal antibody MAb03.2C1-C2 of the outer membrane of Candida albicans germ tube wall, and to apply it to the detection of Candida albicans in the positive specimens of oral candidiasis fungal smear, in order to explore the feasibility and significance of its application in clinical fungal detection and to be used in the laboratory of Candida albicans and Candida albicans in Dublin. To identify the target epitopes of the monoclonal antibody and analyze its antigenic properties.
Methods: the hybridoma cell line, 03.2C1-C2, was resuscitation and cultured for 20 generations to detect the titer of the monoclonal antibody in the culture medium, and to observe the stability of the hybridoma cells continuously secreting the antibody. The hybridoma technique was used to obtain the spores and mycelium of the mouse ascites MAb03.2C1-C2. with different Candida albicans, other common yeasts, bacteria as antigens and indirect immunofluorescence. The positive specimens of mycelium in oral fungal smears of patients with oral candidiasis were collected, and Candida albicans were detected by MAb03.2C1-C2 by IIF method. The mycelia of Candida albicans and Candida Dublin were induced by different liquid medium at different temperature conditions, and the monoclonal antibody was used for the IIF test. Both of them were treated with biochemical reagent to observe the combination of Candida albicans and McAb. The antigenic epitopes were analyzed by IIF test.
Result:
1.125 clinical isolates of Candida albicans or mycelium 100% can be combined with MAb03.2C1-C2. Spores are not combined with monoclonal antibodies. Candida albicans, Candida albicans, Candida Kurus, Monilia Monilia, Candida albicans, Candida albicans, Candida albicans, Candida albicans, Candida, Candida, Candida Candida alir, Nguyen Candida, and spores of Candida albicans, and there is no target antigen on the surface of the mycelium that can be combined with MAb03.2C1-C2. New Cryptococcus, innominant yeast, mycelium yeast, smooth yeast, hyphomycosis, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, and Pseudomonas aeruginosa have no target antigen that can be combined with the monoclonal antibody. .MAb03.2C1-C2 is very specific.
2. microscopy positive specimens of fungus in smear of oral candidiasis patients. The results of IIF test for Candida albicans were consistent with the results of routine laboratory culture.
3.. The spores of Candida albicans and Candida albicans in Dublin were induced by incomplete 1640 fluid and 37 degrees celidius, and the mycelium formation rate was highest after 6h.
4., after 1 years of cryopreservation, 2 years of hybridoma cells were passaged for 20 generations.
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R379

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本文編號(hào)：2033908