本文選題：人γ干擾素 + 密碼子　； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2005年碩士論文

【摘要】：γ干擾素(Interferon-γ,IFN-γ)又稱(chēng)免疫干擾素(Immune interferon),是由淋巴細(xì)胞分泌的一類(lèi)功能調(diào)節(jié)蛋白。除具有抗病毒、抗腫瘤的作用外,它還是人體內(nèi)一種雙向免疫調(diào)節(jié)因子,在治療自身免疫性疾病方面有廣闊的應(yīng)用前景。天然人γ干擾素(hlFN-γ)來(lái)源有限、產(chǎn)量甚微,不能滿足科研和臨床應(yīng)用的需要。因此,利用基因工程方法獲得高表達(dá)的重組人γ干擾素(rhlFN-γ)成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)。 本文依據(jù)遺傳密碼具有簡(jiǎn)并性的特點(diǎn),在不改變氨基酸順序的條件下,用大腸桿菌基因序列中使用頻率高的強(qiáng)密碼子取代hlFN-γ基因編碼序列中的弱密碼子,并將修改后的編碼序列分為六段,進(jìn)行人工化學(xué)合成。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增出目的基因后,將其克隆到表達(dá)載體pBV220上,進(jìn)而轉(zhuǎn)化入E.coli JM109中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。經(jīng)SDS-PAGE和Western Blotting檢測(cè)證實(shí),表達(dá)產(chǎn)物的分子量約為18KD,與預(yù)期相符。通過(guò)優(yōu)化表達(dá)條件,可提高目的蛋白表達(dá)產(chǎn)量,使其占菌體總蛋白的39.9%。重組蛋白rhlFN-γ主要存在于E.coli JM109的包涵體中,純化時(shí)將其自包涵體中溶出后,采用分步稀釋的方法進(jìn)行復(fù)性。梯度透析后獲得的rhlFN-γ樣品委托中國(guó)藥品生物制品檢定所對(duì)其抗病毒活性進(jìn)行測(cè)定,其活性效價(jià)為5.6×10~3IU/ml,比活性為2.8×10~4IU/mg。
[Abstract]:Interferon 緯 Interferon- 緯 (IFN- 緯), also known as immune interferon, is a kind of functional regulatory protein secreted by lymphocytes. In addition to its antiviral and anti-tumor effects, it is also a bidirectional immunomodulatory factor in human body, and has a broad application prospect in the treatment of autoimmune diseases. The source of natural human interferon 緯 hlFN- 緯 is limited and the yield is very small, which can not meet the needs of scientific research and clinical application. Therefore, the high expression recombinant human interferon 緯 (rhlFN- 緯) obtained by genetic engineering has become a hot research topic at home and abroad. Based on the degeneracy of genetic code and without changing the sequence of amino acids, the weak codon of hlFN- 緯 gene was replaced by a strong codon with high frequency in Escherichia coli gene sequence. The modified coding sequence was divided into six segments for artificial chemical synthesis. The target gene was amplified by PCR and cloned into the expression vector pBV220, which was transformed into E. coli JM109 for induction expression. SDS-PAGE and Western blotting showed that the molecular weight of the expressed product was about 18kD, which was in accordance with the expectation. By optimizing the expression conditions, the expression yield of the target protein can be increased, which accounts for 39.9% of the total bacterial protein. The recombinant protein rhlFN- 緯 was mainly found in the inclusion body of E. coli JM109. After being purified from the inclusion body, the recombinant protein was renatured by a step dilution method. The rhlFN- 緯 sample obtained after gradient dialysis was entrusted to the Chinese Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological products for the determination of its antiviral activity. The titer of its antiviral activity was 5.6 脳 10 ~ (-3) U / ml, and its specific activity was 2.8 脳 10 ~ (4) IUU / mg.
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類(lèi)號(hào)】：R346

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 俞超;一種新穎、簡(jiǎn)便的人γ干擾素生物測(cè)定法[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊(cè);1995年01期

2 張智清,侯云德,李玉英,趙小俠,周園,段淑敏,姚立紅;應(yīng)用P_RP_L串聯(lián)啟動(dòng)子和CIts857調(diào)控基因高效表達(dá)人γ干擾素[J];病毒學(xué)報(bào);1988年02期

3 馮根生,葉天星,楊嗣坤;人γ干擾素純化方法的初步研究[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1984年03期

4 康蕾,梁東春,孫蓓,郭剛,張鏡宇;大腸桿菌偏嗜性人γ干擾素基因編碼序列的克隆[J];天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2004年03期

5 王小寧;抗人γ干擾素的單克隆抗體——Ⅱ.具有中和活性的抗體[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;1987年03期

6 鄒曙光;氡致肺癌中P_(53)突變熱點(diǎn)[J];化工勞動(dòng)保護(hù).工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病分冊(cè);1995年04期

7 ;結(jié)腸直腸癌中一種新型的密碼子12和13的K-ras突變可伴有長(zhǎng)期生存率[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊(cè);1998年02期

8 童福易,馬欣,朱傳武;甘露糖結(jié)合蛋白基因突變與感染性疾病間關(guān)系的研究進(jìn)展[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2003年01期

9 陳景山,杜平;一種篩選人γ干擾素McAb方法[J];現(xiàn)代免疫學(xué);1987年01期

10 馬志章,丁仁瑞,周晴,馮根生,陳常慶;人γ干擾素/β腫瘤壞死因子融合蛋白原核高效表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與表達(dá)[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;1997年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 陳婕;郭興中;朱凡;鄒媛;白法安;方國(guó)偉;;焦磷酸測(cè)序法檢測(cè)大腸癌患者k-ras基因突變[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)成立30周年慶典大會(huì)資料匯編[C];2009年

2 朱延明;柏錫;李杰;張彬彬;李晶;;t-PA基因在植物中高水平表達(dá)的研究[A];中國(guó)的遺傳學(xué)研究——中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)第七次代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編[C];2003年

3 李崇高;;《周易》64卦與遺傳64密碼子[A];第六屆全國(guó)優(yōu)生科學(xué)大會(huì)論文匯編[C];2006年

4 黃麟;許劍濤;張傳輝;葉建仁;吳小芹;李超;;松材線蟲(chóng)和擬松材線蟲(chóng)hsp70基因結(jié)構(gòu)特征及其分子進(jìn)化[A];第三屆中國(guó)森林保護(hù)學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2010年

5 楊威;任群;敖楊;張學(xué);;Taal限制酶分析快速檢測(cè)BRAF中599位密碼子點(diǎn)突變[A];中國(guó)的遺傳學(xué)研究——中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)第七次代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編[C];2003年

6 胡秀珍;黃延昭;肖奕;;密碼子上下文關(guān)聯(lián)與蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)[A];第九次全國(guó)生物物理大會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2002年

7 張秋業(yè);劉紅勤;雷珂;徐愛(ài)晶;;反復(fù)呼吸道感染兒童血漿甘露聚糖結(jié)合血凝素水平及基因突變特征研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2010年

8 陳尊器;涂洪斌;葛日萍;;P~(53)和ras基因在人肝癌細(xì)胞的改變及其相互關(guān)系[A];2000全國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

9 陳江;楊力;CatherineC.Y.Chang;周培;陳佳;楊新穎;王甄真;劉蘭英;Ta-Yuan Chang;李伯良;;人ACAT1 mRNA ORF上游莖環(huán)結(jié)構(gòu)對(duì)下游AUG密碼子的翻譯起始作用[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2003年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要集[C];2003年

10 于建興;邱華玲;陳宏權(quán);殷宗俊;;鵝LPL基因外顯子4、5、6克隆及序列分析[A];第十次全國(guó)畜禽遺傳標(biāo)記研討會(huì)論文集[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 王振嶺;涎腺多形性腺瘤基因研究有新發(fā)現(xiàn)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2002年

2 衣曉峰 聶松義 李華虹;哈醫(yī)大二院發(fā)現(xiàn)先天性白內(nèi)障新致病位點(diǎn)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

3 衣曉峰 本報(bào)記者　 李華虹 喬蕤琳;專(zhuān)家研究發(fā)現(xiàn)先天性白內(nèi)障新致病位點(diǎn)[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2006年

4 李靜;“遺傳、變異及進(jìn)化”重難點(diǎn)辨析[N];山西科技報(bào);2003年

5 本報(bào)記者 王源;飲用水，一個(gè)備受關(guān)注的話題[N];科技日?qǐng)?bào);2000年

6 記者 毛磊;第二十二個(gè)天然氨基酸被發(fā)現(xiàn)[N];光明日?qǐng)?bào);2002年

7 謝文緯 張朔;氨基酸的東方探索[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2006年

8 ;基因科學(xué)的耕耘者[N];上�？萍紙�(bào);2008年

9 董仁威;地球生命從太空來(lái)？[N];成都日?qǐng)?bào);2006年

10 本欄目主持人 毛黎 張亮;人類(lèi)生物學(xué)研究大事記（十四）[N];科技日?qǐng)?bào);2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉禮兵;奎尼酸生物合成的代謝工程研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2006年

2 鄭燕;優(yōu)化密碼沙眼衣原體主要外膜蛋白DNA疫苗免疫效果的研究[D];山東大學(xué);2007年

3 張帆;中國(guó)高發(fā)區(qū)肝細(xì)胞癌中HBVx基因的普遍存在及其與p53基因249密碼子高頻度點(diǎn)突變的緊密相關(guān)[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1997年

4 魏拴增;1.六株胰腺癌細(xì)胞系和30例中國(guó)人胰腺癌的K-ras基因第12、13密碼子突變模式的研究 2.23例脾臟淋巴瘤的T細(xì)胞受體，免疫球蛋白重鏈和輕鏈的單克隆重排檢測(cè)[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

5 明利華;肝細(xì)胞癌病因的剖析、遺傳標(biāo)志的論證及其臨床意義的探討[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2002年

6 李德春;人胰腺癌癌基因的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1992年

7 劉紹嚴(yán);P53基因與下咽頸段食管癌[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1995年

8 陳仁武;鼻咽癌抑癌基因p53的突變和表達(dá)[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1994年

9 錢(qián)海蓉;朊蛋白基因及細(xì)胞型朊蛋白與增齡和老年性癡呆的相關(guān)性研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2007年

10 李振華;TGF-β_1基因第10密碼子多態(tài)性和SRD5A2基因V89L多態(tài)性在前列腺癌和前列腺增生癥中的作用[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2004年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 康蕾;大腸桿菌偏嗜性人γ干擾素基因編碼序列的克隆與表達(dá)[D];天津醫(yī)科大學(xué);2005年

2 柏錫;t-PA基因?qū)S瓜的遺傳轉(zhuǎn)化及其在不同植物中的表達(dá)效率分析和密碼子改造[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

3 劉義俊;基于PKI的密碼子系統(tǒng)的設(shè)計(jì)與實(shí)現(xiàn)[D];西南交通大學(xué);2004年

4 郁鋒;耐熱堿性磷酸酶耐熱機(jī)理研究和互補(bǔ)密碼子使用關(guān)系探討[D];南京師范大學(xué);2003年

5 陳義群;基于密碼子替代矩陣的序列比對(duì)[D];華中科技大學(xué);2006年

6 段麗紅;p53第72位密碼子Arg/Pro及PIN3多態(tài)性與上皮性卵巢癌易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2004年

7 馮兆勇;原核生物基因翻譯起始位點(diǎn)的識(shí)別[D];河北工業(yè)大學(xué);2007年

8 韓志嫻;原核生物基因及基因組結(jié)構(gòu)分析[D];河北工業(yè)大學(xué);2005年

9 王亞峰;杜氏鹽藻（Dunaliella salina）MAR序列結(jié)合蛋白基因cDNA全長(zhǎng)的克隆及序列分析[D];鄭州大學(xué);2006年

10 楊賀;WSSV的感染、高效檢測(cè)及生物信息學(xué)分析[D];蘇州大學(xué);2008年

，

本文編號(hào)：2021339