本文選題：細(xì)胞株 + 乙肝病毒/藥物作用�。� 參考：《福建醫(yī)科大學(xué)》2006年碩士論文

【摘要】： 目的RNA干擾現(xiàn)象(RNA interference, RNAi)指的是雙鏈RNA可引發(fā)同源mRNA降解。它已被成功應(yīng)用于下調(diào)內(nèi)源性基因表達(dá),并應(yīng)用于抑制哺乳動(dòng)物體內(nèi)各種病原體的復(fù)制。在本研究中,我們?cè)u(píng)估了以U6啟動(dòng)子作為啟動(dòng)序列(pSilencer2.0-U6)載體介導(dǎo)的小RNA干擾片段在培養(yǎng)細(xì)胞株中抑制HBV復(fù)制的效應(yīng)。 方法將針對(duì)HBV基因組不同區(qū)域的核苷酸序列插入至pSilencer載體中,并將重組后的pSilencer質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染入HepG2-N10細(xì)胞株中。HepG2-N10是一個(gè)可穩(wěn)定表達(dá)HBsAg及HBeAg的細(xì)胞株(其表達(dá)HBV血清型為adw2亞型)。以ELISA法檢測(cè)病毒抗原,以RT-PCR檢測(cè)病毒mRNA,并以熒光定量PCR法檢測(cè)分泌入培養(yǎng)基的cccDNA。 結(jié)果質(zhì)粒載體介導(dǎo)的RNAi能明顯抑制培養(yǎng)基中HBsAg及HBeAg的表達(dá)(P0.05)。并且RT-PCR法檢測(cè)顯示病毒mRNA也被降解了,從而減少了蛋白表達(dá)及病毒逆轉(zhuǎn)錄復(fù)制的模板(P0.05)。熒光定量PCR法檢測(cè)顯示分泌入培養(yǎng)基的cccDNA明顯下降(P0.05)。 結(jié)論RNAi能抑制HBV基因表達(dá)及病毒復(fù)制,RNAi可能對(duì)HBV感染具有潛在的治療作用。
[Abstract]:Objective RNA interference ( RNAi ) refers to double - stranded RNA to induce homologous mRNA degradation . It has been successfully used to downregulate endogenous gene expression and to inhibit replication of various pathogens in mammals .









Methods The nucleotide sequences of different regions of HBV genome were inserted into ptase vector , and the recombinant pected plasmid vector was transfected into HepG2 - N10 cell line . The HepG2 - N10 was a cell line stably expressing HBsAg and HBeAg ( which expresses HBV serotype adw2 subtype ) . The virus antigen was detected by ELISA . The mRNA was detected by RT - PCR and the cccDNA was detected by fluorescence quantitative PCR .









Results The expression of HBsAg and HBeAg in the culture medium was significantly inhibited by plasmid vector - mediated RNAi ( P0.05 ) .









Conclusion RNAi can inhibit HBV gene expression and viral replication , and RNAi may have potential therapeutic effect on HBV infection .
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R346

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2019221