本文選題：胎肝細(xì)胞 + 免疫缺陷鼠　； 參考：《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)》2005年碩士論文

【摘要】：世界上對(duì)干細(xì)胞的研究已有多年的歷史,它已經(jīng)成為當(dāng)今生命科學(xué)研究的前沿之一。當(dāng)前,由于各種肝病患者不斷增長(zhǎng)和肝臟捐獻(xiàn)器官來源的缺乏,對(duì)肝干細(xì)胞的研究已經(jīng)成為熱點(diǎn),這將有助于更好的了解許多肝臟疾病的產(chǎn)生機(jī)理和可能的治療途徑,而胎肝是研究肝干細(xì)胞很好的實(shí)驗(yàn)材料。本文通過以下三個(gè)方面對(duì)胎肝細(xì)胞的分離,培養(yǎng),體外誘導(dǎo)分化及體內(nèi)移植進(jìn)行了研究: 1 將慢病毒載體plv的CMV啟動(dòng)子替換為人基因組AFP啟動(dòng)子,使該病毒感染胎肝細(xì)胞后,在AFP陽性細(xì)胞中表達(dá)綠色熒光蛋白,從而可利用流式細(xì)胞儀分選出表達(dá)AFP即GFP陽性的胎肝細(xì)胞。該標(biāo)記篩選系統(tǒng)的建立為進(jìn)一步研究胎肝細(xì)胞的生物學(xué)特性和肝干細(xì)胞的分離和應(yīng)用奠定了良好的基礎(chǔ)。 2 為了得到大量用于臨床治療和科學(xué)研究的細(xì)胞,僅靠分離原代細(xì)胞,不僅無法得到細(xì)胞量的保障,而且樣品不穩(wěn)定,費(fèi)用昂貴。解決該問題最好的方法就是建立穩(wěn)定的原代細(xì)胞系,但通常原代分離胚胎來源的細(xì)胞在培養(yǎng)一段時(shí)間后會(huì)分化,增殖能力逐漸減弱直到停止分裂。通過兩種方法來建立胎肝來源的細(xì)胞系:分離胎肝細(xì)胞挑取細(xì)胞克隆,與飼養(yǎng)層細(xì)胞共培養(yǎng)來建立細(xì)胞系;分離胎肝細(xì)胞并穩(wěn)定轉(zhuǎn)染hTERT端粒酶基因,使之永生化。 3 為了研究分離的胎肝細(xì)胞的分化潛能,將其移植到免疫缺陷鼠體內(nèi),經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)它能夠分化為多個(gè)組織的細(xì)胞。
[Abstract]:Stem cells have been studied in the world for many years. At present, due to the increasing number of patients with various liver diseases and the lack of donor organ sources, the research on liver stem cells has become a hot topic, which will contribute to a better understanding of the mechanism and possible therapeutic approaches of many liver diseases. Fetal liver is a good experimental material for studying liver stem cells. In this paper, the fetal liver cells were isolated and cultured in the following three aspects. The induction and differentiation in vitro and transplantation in vivo were studied. 1 the plv promoter of lentivirus vector was replaced with human genome AFP promoter, and the virus was infected with fetal hepatocytes. The expression of green fluorescent protein (GFP) in AFP positive cells can be used to select the fetal hepatocytes expressing AFP or GFP positive by flow cytometry. The establishment of the marker screening system laid a good foundation for the further study of the biological characteristics of fetal liver cells and the isolation and application of hepatic stem cells. 2. In order to get a large number of cells for clinical treatment and scientific research, The isolation of primary cells not only can not be guaranteed by the quantity of cells, but also the sample is unstable and expensive. The best way to solve this problem is to establish stable primary cell lines, but usually the cells derived from primary embryos will differentiate after a period of culture, and the ability of proliferation will gradually weaken until the division is stopped. The cell lines derived from fetal liver were established by two methods: isolation of fetal liver cells, isolation of cell clones from fetal liver cells, co-culture with feeder layer cells to establish cell lines, isolation of fetal liver cells and stable transfection of hTERT telomerase gene. To study the differentiation potential of isolated fetal hepatocytes, they were transplanted into immunodeficient mice. It was found to be able to differentiate into cells of multiple tissues.
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R346

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本文編號(hào)：2016022