本文選題：丙型肝炎 + 治療性疫苗　； 參考：《吉林大學(xué)》2006年博士論文

【摘要】：為了進(jìn)行丙型肝炎(HCV)治療性DNA疫苗的研制,本實驗成功建造了HCV感染的細(xì)胞模型。以紅色熒光蛋白(RFP)和綠色熒光蛋白(GFP)為報告基因,將其分別插入乙肝核心抗原基因(HBc)的e1 loop和e2 loop處,構(gòu)建質(zhì)粒pcDNA 3.1-HBc-GFP和pcDNA 3.1-HBc-GFP并在Hela細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。構(gòu)建了含有HCV T細(xì)胞表位的真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-HBc-T1T2,通過RFP和GFP表達(dá)情況的觀察、質(zhì)粒pcDNA 3.1-HBc-T1T2表達(dá)產(chǎn)物HBcAg-T1T2電鏡下成顆粒性觀察及融合蛋白HBcAg-T1T2三維構(gòu)象展示,證實了HBc作為疫苗免疫載體的可行性。真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA 3.1-HBc-T1T2肌肉注射免疫小鼠,適時進(jìn)行了抑瘤實驗、CTL細(xì)胞毒活性、HBcAb、脾淋巴細(xì)胞胞內(nèi)細(xì)胞因子IL-4和IL-γ、血清中細(xì)胞因子IL-5、IL-10和IL-12、脾淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)(SI)、血液和脾淋巴細(xì)胞亞群、IgG2α/IgG1及脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-2水平的檢測,以對真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA 3.1-HBc-T1T2的免疫原性進(jìn)行分析。 本研究結(jié)果揭示了,真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-HBc-T1T2能夠誘導(dǎo)出特異性的細(xì)胞免疫應(yīng)答,可作為HCV治療性DNA疫苗的候選,本實驗為HCV的治療奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to develop a therapeutic DNA vaccine for hepatitis C virus (HCV), a cell model of HCV infection was successfully constructed. Using red fluorescent protein (RFP) and green fluorescent protein (GFP) as reporter genes, the recombinant plasmids pcDNA3.1-HBc-GFP and pcDNA3.1-HBc-GFP were constructed and expressed in Hela cells by inserting them into e1 loop and e2 loop, respectively. The eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1-HBc-T1T2 containing HCV T cell epitopes was constructed. By observing the expression of RFP and GFP, the plasmid pcDNA3.1-HBc-T1T2 was granulated under electron microscope and the fusion protein HBcAg-T1T2 was displayed in 3D conformation. The feasibility of HBc as vaccine immune vector was confirmed. Eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1-HBc-T1T2 was injected intramuscularly into mice. The cytotoxic activity of CTL, IL-4 and IL- 緯, the cytokines IL-5, IL-10 and IL-12 in serum, the spleen lymphocyte stimulation index (SI), IgG2 偽 / IgG1 in blood and splenic lymphocyte subsets, and the culture of splenic lymphocytes were carried out in a timely manner. The detection of IL-2 level in the serum, The immunogenicity of eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1-HBc-T1T2 was analyzed. The results showed that the eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1-HBc-T1T2 could induce a specific cellular immune response and could be used as a candidate for HCV therapeutic DNA vaccine. This study laid a foundation for the treatment of HCV.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2009632