本文選題：miRNA芯片 + 雞胚絨毛尿囊膜　； 參考：《南華大學(xué)》2007年碩士論文

【摘要】： 目的:建立雞胚絨毛尿囊膜動態(tài)血管發(fā)育模型,觀察和分析血管發(fā)育過程中miRNA的表達變化,為確定血管發(fā)育關(guān)鍵調(diào)控miRNA及其下游基因提供實驗依據(jù)。 方法:利用雞胚絨毛尿囊膜血管發(fā)育周期短,可操作性強的特點,選取新鮮、大小均勻的種蛋,自行孵育,原位觀察第一天到第二十一天的雞胚絨毛尿囊膜血管發(fā)育情況,確定尿囊膜血管初生、旺盛和消退的三個時間點,建立動態(tài)血管發(fā)育模型。選取不同時間點的尿囊膜血管,提取蛋白,用Western blotting技術(shù)檢測FGF2和TGF-β2蛋白在血管發(fā)育的這三個階段的表達量的變化,判斷動態(tài)血管發(fā)育模型是否建立成功。用Trizol法提取總RNA,紫外吸收測定法測RNA濃度和純度,瓊脂糖凝膠電泳觀察28s、18s帶,檢測提取的RNA的質(zhì)量,制作miRNA芯片,分析在血管發(fā)育過程中miRNA的變化。 結(jié)果:研究發(fā)現(xiàn)第四天、第十三天、第十六天分別為血管發(fā)育的初生、旺盛和消退的三個時間點;Western blotting檢測結(jié)果與文獻報道相符;血管發(fā)育過程中miRNA的表達變化:⑴、旺盛期與初生期比較:表達上調(diào)的有5個miRNA,表達下調(diào)的有1個miRNA;⑵、消退期與初生期比較:表達上調(diào)的有37個miRNA,表達下調(diào)的有4個miRNA;⑶、消退期與旺盛期比較:表達上調(diào)的有27個miRNA,表達下調(diào)的有2個miRNA。 結(jié)論:1、利用雞胚絨毛尿囊膜血管動態(tài)發(fā)育周期短,血管發(fā)育過程中存在明顯的初生期、旺盛期、消退期不同階段,且可重復(fù)性強的特點,可建立一種新型動態(tài)血管發(fā)育模型。 2、血管發(fā)育的初生期、旺盛期、消退期不同階段,相對應(yīng)出現(xiàn)的miRNA表達譜的顯著變化,為確定血管發(fā)育關(guān)鍵調(diào)控miRNA及其下游基因提供了新的思路和方向。
[Abstract]:Objective: to establish a dynamic angiogenesis model of chicken chorioallantoic membrane and to observe and analyze the expression of miRNA during the development of chorioallantoic membrane. In order to provide experimental basis for determining the key regulation of miRNA and its downstream genes in vascular development methods: the chorioallantoic membrane vascular development cycle of chicken embryo was short and maneuverability was strong. Fresh and evenly sized eggs were selected and incubated by themselves. The angiogenesis of chorioallantoic membrane of chorioallantoic embryo was observed in situ from the first day to the 21 day, and the dynamic vascular development model was established by determining the three time points of the origin, exuberance and regression of the allantoic membrane vessels. The expression of FGF2 and TGF- 尾 2 proteins in the three stages of vascular development were detected by Western blotting to determine whether the dynamic vascular development model was established successfully. The total RNAs were extracted by Trizol method, the concentration and purity of RNA were measured by ultraviolet absorption assay, the 28s ~ (18 s) band was observed by agarose gel electrophoresis, the quality of extracted RNA was detected, the miRNA microarray was made, and the changes of miRNA during vascular development were analyzed. On the thirteenth and sixteenth days, the results of Western blotting were consistent with those of the literature at the three time points of exuberant, exuberant and regression, respectively, and the expression of miRNA was changed at 1: 1 during vascular development. There were 5 miRNAs up-regulated, 1 miRNA-2 down-regulated, 37 miRNAs upregulated and 4 miRNAs down-regulated. There were 27 miRNAs upregulated and 2 miRNAs down-regulated in extinction period and exuberant phase. Conclusion: 1. The dynamic development cycle of allantoic membrane of chicken embryo chorioallantoic membrane is short, and there are obvious primary and exuberant phases in the process of vascular development. A new type of dynamic vascular development model can be established with different stages of regression period and strong reproducibility. 2. The significant changes of miRNA expression profiles in different stages of vascular development, such as the primary stage, the exuberant stage, and the extinction stage, can be established. It provides a new idea and direction for determining the key regulation of miRNA and its downstream genes in vascular development.
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R-332;R346

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本文編號：1998175