本文選題：胎盤 + 臍帶��； 參考：《中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》2007年碩士論文

【摘要】： 間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是來(lái)源于中胚層的具有高度自我更新能力和多向分化潛能的成體干細(xì)胞,廣泛存在于全身結(jié)締組織和器官間質(zhì)中。由于MSCs具有多向分化的潛能,而且體外容易擴(kuò)增,很快成為組織工程的理想的種子細(xì)胞。胎盤和臍帶都屬于胎兒附屬物,出生后即被遺棄。二者都具有胚外中胚層來(lái)源的結(jié)構(gòu),因此,如果從胎盤和臍帶獲取間充質(zhì)干細(xì)胞,將為組織工程提供巨大的種子細(xì)胞庫(kù)。 本研究體外分離和培養(yǎng)胎盤臍帶MSCs,比較兩種MSCs與骨髓來(lái)源的MSCs在形態(tài)、生長(zhǎng)特性、表面標(biāo)志、分化潛能等生物學(xué)特征的區(qū)別,進(jìn)而對(duì)它們?cè)诮M織工程中的應(yīng)用以及向內(nèi)皮分化時(shí)基因的差異表達(dá)做了進(jìn)一步的研究。 第一部分研究體外分離和培養(yǎng)胎盤臍帶單克隆MSCs,比較兩種MSCs與骨髓來(lái)源的MSCs在形態(tài)、生長(zhǎng)特性、表面標(biāo)志、分化潛能等生物學(xué)特征的區(qū)別,取上述所得的單克隆來(lái)源MSCs分別向脂肪、成骨、內(nèi)皮定向誘導(dǎo)。 結(jié)果提示,可以獲得性狀穩(wěn)定的單細(xì)胞克隆,三種來(lái)源的MSCs在形態(tài)、免疫表型、分化能力方面并無(wú)明顯差異。但是骨髓來(lái)源MSCs免疫原性較強(qiáng),倍增時(shí)間略長(zhǎng)于另外兩種MSCs。 第二部分研究胎盤MSCs的組織工程應(yīng)用。第一部分實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)胎盤MSCs具有獲得容易分離成功率高,細(xì)胞增殖能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),故選用該細(xì)胞作為組織工程的種子細(xì)胞,將胎盤來(lái)源的MSCs和MSC-EC接種于三維支持物上,與培養(yǎng)板表面的MSCs生長(zhǎng)情況對(duì)比。 結(jié)果提示,MSCs和MSC-EC可以在三維支持物上生長(zhǎng),增值,但與培養(yǎng)板表面的細(xì)胞生長(zhǎng)有差距。MSCs和MSC-EC之間并無(wú)明顯差異。 第三部分研究間充質(zhì)干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化后差異表達(dá)基因的微陣列分析,使用芯片技術(shù)高通量篩選大量基因,尋找內(nèi)皮細(xì)胞化過(guò)程中的基因表達(dá)改變。結(jié)果提示,在內(nèi)皮細(xì)胞化過(guò)程中有多種編碼粘附分子和ECM、血管內(nèi)皮細(xì)胞功能相關(guān)蛋白和受體基因發(fā)生變化。 該研究首先完成了胎盤臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的單克隆分離、生物學(xué)特性檢測(cè),為后續(xù)工作奠定了基礎(chǔ),而后又探索了胎盤MSCs在組織工程中的初步應(yīng)用以及向血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化后基因表達(dá)的改變,為今后MSCs的應(yīng)用及研究打下了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Mesenchymal stem cells (MSCs) are adult stem cells with high self-renewal and multi-differentiation potential from mesoderm, which are widely found in connective tissues and organs of the whole body. Because MSCs has the potential of multidirectional differentiation and is easy to expand in vitro, it becomes an ideal seed cell for tissue engineering. Placenta and umbilical cord are fetal appendages and are abandoned after birth. Both have the structure of ectodermal origin, so if mesenchymal stem cells were obtained from placenta and umbilical cord, they would provide a huge seed cell bank for tissue engineering. In this study, we isolated and cultured placental umbilical cord MSCs in vitro, and compared the differences between MSCs and bone marrow-derived MSCs in morphology, growth characteristics, surface markers, differentiation potential and other biological characteristics. Their applications in tissue engineering and differential expression of genes in endothelial differentiation were further studied. In the first part, we studied the isolation and culture of placental umbilical cord monoclonal MSCs in vitro, and compared the differences between the two kinds of MSCs and bone marrow-derived MSCs in morphology, growth characteristics, surface markers, differentiation potential and other biological characteristics. The MSCs derived from the above monoclonal source was directed to adipose, osteoblast and endothelium respectively. The results showed that the single cell clones with stable characters could be obtained, and there was no significant difference in morphology, immunophenotype and differentiation ability of MSCs from the three sources. However, the immunogenicity of bone marrow derived MSCs was stronger, and the doubling time was slightly longer than that of the other two. The second part studies the application of placental MSCs in tissue engineering. In the first part of the experiment, it was found that placental MSCs had the advantages of high success rate of easy isolation and strong ability of cell proliferation, so it was selected as seed cells of tissue engineering, and MSCs and MSC-EC from placenta were inoculated on three-dimensional support. Compared with the growth of MSCs on the surface of culture plate. The results suggested that MSCs and MSC-EC could grow on three dimensional support and increase in value, but there was no significant difference between MSCs and MSC-EC in cell growth on the surface of culture plate. In the third part, microarray analysis of differentially expressed genes after differentiation of mesenchymal stem cells into vascular endothelial cells was studied. A large number of genes were screened by high-throughput microarray technique to find the gene expression changes in the process of endothelial cell formation. The results suggest that there are many kinds of coding adhesion molecules and ECM during the process of endothelial cellulization and the changes of vascular endothelial cell function-related proteins and receptor genes. In this study, we first completed the monoclonal isolation of placental umbilical cord mesenchymal stem cells and the detection of biological characteristics, which laid the foundation for further work. Then the preliminary application of placental MSCs in tissue engineering and the changes of gene expression after differentiation into vascular endothelial cells were explored, which laid a foundation for the application and study of MSCs in the future.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：1973876