本文選題：沙眼衣原體 + E型�。� 參考：《山東大學(xué)》2007年博士論文

【摘要】： 沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis，Ct)泌尿生殖道感染是當(dāng)今世界上最常見(jiàn)的性傳播疾病(STD)。據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)，全球每年新感染約1千萬(wàn)例，每年耗資約40億～50億美元，僅次于HIV感染。衣原體持續(xù)性感染可導(dǎo)致女性慢性盆腔炎、不孕和異位妊娠等嚴(yán)重并發(fā)癥。Ct生殖道感染還能提高HIV和高危型HPV傳播的機(jī)率。雖然抗生素可用于治療衣原體生殖道感染，但由于無(wú)癥狀性衣原體感染普遍存在，給預(yù)防Ct的感染和并發(fā)癥帶來(lái)很大困難。因此研制安全有效的疫苗是控制泌尿生殖道Ct感染的最好方法。 人們最早試驗(yàn)用紫外線或熱處理滅活的完整Ct原體做疫苗，在人體試驗(yàn)中僅取得局部、短時(shí)的保護(hù)效應(yīng)，而且在部分個(gè)體可能導(dǎo)致機(jī)體對(duì)某種Ct抗原發(fā)生病理反應(yīng)。因此目前的衣原體疫苗研究主要以Ct蛋白抗原為基礎(chǔ)。衣原體主要外膜蛋白(Major outer membrane protein，MOMP)是引起宿主免疫反應(yīng)的主要靶抗原，目前多數(shù)疫苗的研究均以鼠型沙眼衣原體(C．muridarum，以往稱(chēng)為MoPn)的MOMP為研究對(duì)象，包括亞單位疫苗、重組疫苗、DNA疫苗、樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗等，均處在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段，且免疫保護(hù)效果差異較大。 鼠型沙眼衣原體并非人的天然病原體，人型沙眼衣原體D～K血清型是引起人類(lèi)泌尿生殖道感染的主要病原體。人型沙眼衣原體與鼠型沙眼衣原體在生物學(xué)特性及致病特征上均存在一定差異。在人Ct的19個(gè)血清型中，E型為國(guó)內(nèi)外最流行的血清型，占全部衣原體感染的40％以上。E型Ct流行較廣的原因可能是E型具有某些生物學(xué)優(yōu)勢(shì)，從而增強(qiáng)了它們感染、傳播和潛伏在宿主中的能力。與鼠型沙眼衣原體相比，感染人的Ct尤其是E型Ct對(duì)小鼠的毒力較弱，因此目前有關(guān)人Ct的疫苗研究較少。 Darville等(1997)建立了E型Ct生殖道感染C57BL／6和C3H／HeN小鼠的模型；最近國(guó)內(nèi)王紅楓等(2006)成功建立了E型Ct的BALB／c小鼠生殖道感染模型，為我們選擇E型Ct作為研究對(duì)象提供了可行性。為探索新型的沙眼衣原體疫苗，我們以E型Ct MOMP為研究對(duì)象，進(jìn)行了以下研究： 一．含E型Ct MOMP基因的重組腺病毒和DNA疫苗的構(gòu)建 尋找有效的輔佐運(yùn)載系統(tǒng)是衣原體疫苗研制的重要目標(biāo)。由于E型Ct自生殖道粘膜入侵感染，研制能有效激發(fā)局部粘膜免疫反應(yīng)的疫苗顯得尤為重要。復(fù)制缺陷型重組腺病毒嗜性廣泛，能感染包括粘膜上皮細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞，介導(dǎo)外源基因在細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定表達(dá)，并可通過(guò)類(lèi)似天然感染的鼻腔接種途徑在局部粘膜以及遠(yuǎn)端生殖道粘膜表面誘發(fā)特異性免疫反應(yīng)；且病毒基因不與受體細(xì)胞基因組發(fā)生整合，，具有良好的生物安全性，是較理想的Ct候選疫苗。DNA疫苗刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)的方式與自然感染病原體的方式非常接近，具有其他疫苗不可比擬的優(yōu)勢(shì)而受到普遍重視。為此我們與加拿大曼尼托巴大學(xué)醫(yī)學(xué)微生物系合作，從E型Ct基因組中擴(kuò)增出MOMP基因，在國(guó)內(nèi)外首次構(gòu)建了含E型Ct MOMP基因的重組腺病毒Ad-MOMP及重組真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-MOMP，為進(jìn)一步動(dòng)物免疫及有關(guān)蛋白生物學(xué)功能的實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。 首先，根據(jù)Genebank中E型Ct MOMP基因序列設(shè)計(jì)引物，用高保真PCR方法從E型Ct基因組DNA中擴(kuò)增得到MOMP基因片段，克隆至pcDNAⅡ載體，測(cè)序后連接入腺病毒穿梭載體pDC316，經(jīng)酶切鑒定及PCR測(cè)定證實(shí)pDC316-MOMP重組質(zhì)粒構(gòu)建正確。穿梭載體pDC316-MOMP與含腺病毒Ad5大部分基因組的輔助質(zhì)粒PBHGlox△E1，3Cre共轉(zhuǎn)染至HEK293細(xì)胞，在Cre-loxP重組酶作用下進(jìn)行重組，包裝成重組腺病毒顆粒。用PCR技術(shù)證實(shí)重組腺病毒含有E型Ct MOMP基因，RT-PCR證實(shí)重組腺病毒在感染的293細(xì)胞能有效轉(zhuǎn)錄MOMP基因，Western blotting檢測(cè)到MOMP基因在293細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)，表明重組腺病毒Ad-MOMP構(gòu)建成功。 自重組質(zhì)粒pcDNAⅡ-MOMP中酶切釋放MOMP基因片斷，克隆至真核表達(dá)載體pVAX1，構(gòu)建卡那霉素抗性重組質(zhì)粒pVAX1-MOMP，經(jīng)酶切鑒定及PCR證實(shí)pVAX1-MOMP重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。以重組質(zhì)粒pVAX1-MOMP轉(zhuǎn)染COS-1細(xì)胞，Western blotting方法檢測(cè)MOMP能在COS-1細(xì)胞中表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物能與抗MOMP單克隆抗體特異性結(jié)合，具有良好抗原性。 二．含MOMP基因的重組腺病毒與DNA疫苗聯(lián)合免疫效果的研究 近年來(lái)，聯(lián)合免疫的研究受到學(xué)者們?cè)絹?lái)越多的關(guān)注。大量研究表明，同一種免疫原的兩種不同的疫苗采用初免-加強(qiáng)(prime-boost)的免疫方案來(lái)接種，其免疫效果優(yōu)于其中任何一種單獨(dú)使用的效果。Zhang等(2000)報(bào)道用MoPn的MOMP DNA疫苗初次免疫繼以MOMP ISCOM蛋白復(fù)合體加強(qiáng)免疫能顯著增強(qiáng)細(xì)胞免疫及肺部SIgA產(chǎn)生。本研究設(shè)計(jì)了四種免疫方案，比較了DNA疫苗單獨(dú)免疫、重組腺病毒Ad-MOMP單獨(dú)免疫、DNA疫苗初次免疫—重組腺病毒加強(qiáng)免疫、重組腺病毒初次免疫—DNA疫苗加強(qiáng)免疫等4種免疫模式的免疫效果。相關(guān)研究國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。 1．重組真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-MOMP經(jīng)肌肉注射3次免疫小鼠(間隔兩周免疫一次，每次100μg)，可誘導(dǎo)較弱的脾細(xì)胞IFN-γ產(chǎn)生及血清特異性IgG、IgA反應(yīng)，并且未檢測(cè)到粘膜SIgA抗體，沒(méi)有發(fā)生明顯Th1類(lèi)反應(yīng)偏倚。提示重組質(zhì)粒pVAX1-MOMP免疫小鼠的結(jié)果并不理想。 2．重組腺病毒Ad-MOMP經(jīng)鼻免疫小鼠(1×10~8Pfu／只，間隔兩周免疫1次，共免疫2次)，可誘導(dǎo)生殖道局部粘膜SIgA抗體產(chǎn)生，血清IgG、IgA抗體及脾細(xì)胞IFN-γ水平均顯著高于DNA疫苗，血清IgG1、IgG2a均增高，并以IgG2a為主，表明Th1類(lèi)反應(yīng)占優(yōu)勢(shì)。 3．DNA疫苗初次免疫—重組腺病毒加強(qiáng)免疫(DNA／Ad)、重組腺病毒初次免疫—DNA疫苗加強(qiáng)免疫(Ad／DNA)的聯(lián)合免疫策略，均能有效誘導(dǎo)明顯強(qiáng)于單獨(dú)免疫的生殖道局部粘膜SIgA反應(yīng)、血清抗體反應(yīng)以及Th1占優(yōu)勢(shì)的細(xì)胞免疫應(yīng)答。與DNA／Ad聯(lián)合免疫方案相比，Ad／DNA聯(lián)合免疫方案能顯著增強(qiáng)小鼠的Th1細(xì)胞免疫應(yīng)答，表現(xiàn)為Ad／DNA免疫誘導(dǎo)的脾細(xì)胞IFN-γ水平顯著高于DNA／Ad免疫，血清抗體以IgG2a增高為主。而DNA／Ad免疫產(chǎn)生的血清抗體和粘膜抗體水平強(qiáng)于Ad／DNA免疫。 理想的Ct疫苗應(yīng)誘導(dǎo)強(qiáng)的Th1細(xì)胞免疫反應(yīng)及粘膜IgA抗體反應(yīng)。本研究首次報(bào)道Ct MOMP重組腺病毒疫苗鼻腔免疫能誘導(dǎo)Th1反應(yīng)及粘膜抗體反應(yīng)；首次證實(shí)重組腺病毒初免—DNA疫苗加強(qiáng)的聯(lián)合免疫策略能明顯增強(qiáng)抗衣原體的Th1保護(hù)性免疫應(yīng)答，并發(fā)現(xiàn)不同的聯(lián)合免疫次序各有其不同的加強(qiáng)效應(yīng)。 大量文獻(xiàn)已報(bào)道DNA疫苗初免、重組病毒加強(qiáng)可獲得較好的免疫效果。最近Khanam等(2006，2007)在登革熱病毒疫苗的研究中發(fā)現(xiàn)，腺病毒初免、DNA加強(qiáng)的免疫效果甚至強(qiáng)于DNA初免、腺病毒加強(qiáng)免疫。但也有文獻(xiàn)報(bào)道，用重組病毒初免、DNA疫苗加強(qiáng)免疫所誘發(fā)的免疫應(yīng)答并不理想。我們研究結(jié)果證實(shí)DNA／Ad和Ad／DNA聯(lián)合免疫均能誘導(dǎo)明顯強(qiáng)于單獨(dú)免疫的免疫效應(yīng)。但更重要的是，我們同時(shí)發(fā)現(xiàn)Ad／DNA聯(lián)合免疫能顯著增強(qiáng)小鼠的Th1細(xì)胞免疫應(yīng)答，免疫效果明顯強(qiáng)于DNA／Ad聯(lián)合免疫。由于以Th1為主的細(xì)胞免疫應(yīng)答在清除衣原體感染中起關(guān)鍵作用，因此Ad／DNA聯(lián)合免疫對(duì)于衣原體免疫治療新方案的設(shè)計(jì)有重要意義。Ad／DNA免疫增強(qiáng)Th1應(yīng)答的機(jī)制我們推測(cè)可能與以下因素有關(guān)：1)腺病毒主要作用于樹(shù)突狀細(xì)胞，腺病毒初免比DNA初免能更有效的遞呈MOMP抗原；2) DNA肌肉注射偏向誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答，DNA再次免疫時(shí)可能相應(yīng)的細(xì)胞免疫得到更有效的加強(qiáng)。 以上研究提示聯(lián)合免疫應(yīng)用較為復(fù)雜，接種順序會(huì)影響免疫應(yīng)答的強(qiáng)弱及類(lèi)型，負(fù)載的目的抗原不同可能也會(huì)導(dǎo)致差異，因此針對(duì)特定抗原應(yīng)對(duì)其聯(lián)合免疫順序、途徑等進(jìn)行具體的研究。本研究為人Ct疫苗免疫方案、免疫途徑的確立及免疫保護(hù)作用等的進(jìn)一步研究奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。聯(lián)合免疫作用的機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。 三．重組腺病毒轉(zhuǎn)染的樹(shù)突狀細(xì)胞體內(nèi)外免疫功能研究 樹(shù)突狀細(xì)胞(Dendritic cell，DC)是機(jī)體內(nèi)最強(qiáng)大的抗原遞呈細(xì)胞，可誘導(dǎo)Th1型免疫應(yīng)答，因此負(fù)載Ct抗原的DC疫苗是一個(gè)重要的研究方向。Su等(1998)研究顯示，死衣原體(EB)沖擊的DC能在動(dòng)物體內(nèi)誘導(dǎo)Th1保護(hù)性免疫，能抵抗衣原體的生殖道感染，并與自然感染產(chǎn)生的保護(hù)性相當(dāng)。但完整Ct表面存在的病理性抗原可以導(dǎo)致機(jī)體嚴(yán)重的病理反應(yīng)，完整衣原體沖擊DC不適合應(yīng)用于人體。Shaw等(2002)證實(shí)鼠肺炎沙眼衣原體(MoPn)重組MOMP蛋白沖擊的DC在體外能有效激活CD4~+T細(xì)胞，分泌IL-12和IFN-γ；但重組MOMP蛋白沖擊的DC回輸動(dòng)物后，產(chǎn)生了以Th2為主的抗-MOMP免疫反應(yīng)，不能保護(hù)小鼠免受感染。MOMP-DC疫苗產(chǎn)生Th2免疫反應(yīng)的機(jī)制還不是很清楚。諸多實(shí)驗(yàn)已證明基因修飾DC比相應(yīng)抗原沖擊DC能更有效的激發(fā)體內(nèi)免疫效應(yīng)。但至今為止，尚未見(jiàn)到基因修飾DC誘導(dǎo)抗衣原體免疫的研究報(bào)道。 腺病毒由于轉(zhuǎn)染效率高，可轉(zhuǎn)染非增殖細(xì)胞及不整合宿主染色體DNA等優(yōu)點(diǎn)，成為轉(zhuǎn)染DC的首選病毒載體。本研究通過(guò)腺病毒介導(dǎo)MOMP基因轉(zhuǎn)染DC，自體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)分別探討了轉(zhuǎn)染DC的生物學(xué)特征以及轉(zhuǎn)染DC回輸后誘導(dǎo)的特異性免疫效應(yīng)。 1．用20ng／ml重組小鼠粒細(xì)胞—巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)及20ng／ml白細(xì)胞介素4(IL-4)從小鼠骨髓干細(xì)胞中誘導(dǎo)培養(yǎng)DC，鏡下觀察誘導(dǎo)的DC形態(tài)典型，流式檢測(cè)其表面高表達(dá)CD11c、MHCⅡ類(lèi)分子，中度表達(dá)CD80分子，提示誘導(dǎo)的DC趨于成熟。 2．以不同滴度的腺病毒Ad-EGFP轉(zhuǎn)染DC，48h后熒光顯微鏡下觀察表達(dá)綠色熒光蛋白的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。當(dāng)MOI為1000時(shí)，90％以上的DC表達(dá)綠色熒光蛋白，并且DC細(xì)胞的形態(tài)無(wú)明顯變化。因此重組腺病毒Ad-MOMP按MOI為1000轉(zhuǎn)染DC，48h后經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)，DC表面特異性標(biāo)記CD11c無(wú)明顯變化，表面分子MHCⅡ和CD80均較轉(zhuǎn)染前升高，其中CD80水平變化較大，明顯高于未轉(zhuǎn)染組和對(duì)照空病毒Ad轉(zhuǎn)染組。對(duì)照空病毒Ad轉(zhuǎn)染也可致MHCⅡ輕微上調(diào)，但CD80略微下調(diào)。表明Ad-MOMP轉(zhuǎn)染對(duì)DC的成熟有明顯促進(jìn)作用，而對(duì)照空病毒Ad的促DC成熟功能不明顯。 3．Ad-MOMP轉(zhuǎn)染DC后，用Western blotting檢測(cè)到MOMP蛋白的表達(dá)，轉(zhuǎn)染后DC功能顯著增強(qiáng)，分泌大量IL-12，具有較強(qiáng)的刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖的能力，并刺激T細(xì)胞分泌大量IFN-γ(2802pg／ml)。提示Ad-MOMP轉(zhuǎn)染后DC可能誘導(dǎo)CD4~+ T細(xì)胞向Th1細(xì)胞的極化。同時(shí)空腺病毒Ad轉(zhuǎn)染DC組IFN-γ含量(1010pg／ml)也顯著高于未轉(zhuǎn)染組(306.8pg／ml)，提示空腺病毒Ad轉(zhuǎn)染DC可能有一定的促Th1極化功能。 4．Ad-MOMP轉(zhuǎn)染DC經(jīng)尾靜脈回輸小鼠后，誘導(dǎo)高強(qiáng)度的Th1免疫反應(yīng)，并且明顯強(qiáng)于DNA／Ad、Ad／DNA聯(lián)合免疫組，其誘導(dǎo)IFN-γ水平(4002.8pg／ml)分別為后兩者的2.2、1.6倍；但Ad-MOMP轉(zhuǎn)染DC免疫小鼠誘導(dǎo)的血清特異性IgG、IgA抗體及陰道分泌物中SIgA抗體基本上接近Ad／DNA組，弱于DNA／Ad組。盡管Ad-DC誘導(dǎo)小鼠IFN-γ含量顯著低于Ad-MOMP-DC組，但也高于未轉(zhuǎn)染DC組，與以上空腺病毒Ad增強(qiáng)DC的體外功能相一致。 本研究首次應(yīng)用MOMP基因轉(zhuǎn)染的方式修飾DC，證實(shí)腺病毒是介導(dǎo)E型Ct MOMP基因修飾DC較理想的載體，腺病毒具有高的轉(zhuǎn)染DC效率，能介導(dǎo)MOMP在DC內(nèi)表達(dá)；重組腺病毒Ad-MOMP體外轉(zhuǎn)染對(duì)DC形態(tài)影響不大，能促進(jìn)DC的成熟，增強(qiáng)DC的生物學(xué)功能。而且腺病毒載體本身可能對(duì)DC生物學(xué)功能有一定影響。 Ad-MOMP轉(zhuǎn)染DC在體外能誘導(dǎo)CD4~+ T細(xì)胞向Th1細(xì)胞的極化，經(jīng)尾靜脈注射小鼠后可誘導(dǎo)高強(qiáng)度Th1細(xì)胞免疫為主的免疫反應(yīng)，體液免疫和局部粘膜免疫也有所加強(qiáng)，這對(duì)于抵抗衣原體的感染具有重要意義。此結(jié)果與上述Shaw等MoPn MOMP蛋白沖擊DC誘導(dǎo)小鼠Th2反應(yīng)的研究不一致。其原因可能是單純的MOMP蛋白質(zhì)抗原沖擊不能完全激活DC。而由腺病毒介導(dǎo)MOMP基因修飾DC一方面有利于MOMP基因在DC內(nèi)的持續(xù)表達(dá)而延長(zhǎng)抗原呈遞作用；另一方面腺病毒載體本身還有佐劑樣作用，本研究證實(shí)空載腺病毒Ad轉(zhuǎn)染DC有一定的促Th1極化功能，由此腺病毒載體可能起到佐劑的作用，輔助MOMP抗原充分激活DC的功能，誘導(dǎo)強(qiáng)的抗衣原體Th1反應(yīng)。本研究符合以往腺病毒介導(dǎo)基因修飾DC的免疫效果強(qiáng)于相應(yīng)蛋白直接沖擊DC的結(jié)論。 此外，MOMP的多態(tài)性是否導(dǎo)致E型MOMP與MoPn MOMP對(duì)DC功能影響的差別，尚需實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。本研究有助于確定MOMP導(dǎo)入DC的最佳方式，并為衣原體性病的免疫治療提供有價(jià)值的理論依據(jù)及臨床應(yīng)用基礎(chǔ)。 四．衣原體密碼偏愛(ài)性分析 近年來(lái)優(yōu)化密碼成為有效改善疫苗效果的重要策略之一。優(yōu)化密碼，即用宿主基因組偏愛(ài)密碼取代異源基因的相應(yīng)密碼，可以使原本在宿主體內(nèi)低表達(dá)的異源基因表達(dá)水平明顯提高，從而增強(qiáng)該異源基因的免疫原性。同時(shí)在以上研究中我們觀察到，重組質(zhì)粒pVAX1-MOMP轉(zhuǎn)染COS-1細(xì)胞后MOMP的表達(dá)較弱，重組腺病毒Ad-MOMP感染293細(xì)胞及DC后MOMP的表達(dá)也不是很強(qiáng)，提示Ct蛋白可能并不適合在哺乳動(dòng)物中表達(dá)，對(duì)MOMP基因進(jìn)行修飾可能增強(qiáng)重組腺病毒Ad-MOMP及其轉(zhuǎn)染DC的免疫效果。 為探索優(yōu)化密碼的策略增強(qiáng)MOMP重組腺病毒免疫原性是否具有可行性，本研究利用DNAStar、EMBOSS、codon usage database等數(shù)據(jù)庫(kù)及生物信息學(xué)軟件，對(duì)不同種及亞種的衣原體(包括鼠肺炎衣原體，人沙眼衣原體，肺炎衣原體和鸚鵡熱衣原體)基因組密碼子使用特點(diǎn)進(jìn)行了全面分析，發(fā)現(xiàn)了有價(jià)值的信息： 1．不同種及亞種的衣原體存在共同的密碼子使用規(guī)律，偏愛(ài)使用第三位堿基上為A或T的密碼子。在T或A結(jié)尾的密碼子中，衣原體偏好使用A、T含量高的密碼子。 2．不同種及亞種的衣原體密碼子使用各有其自身特點(diǎn)，其中C．psittaci對(duì)偏愛(ài)密碼的偏愛(ài)程度最大。衣原體與人類(lèi)基因組密碼使用差異較大，與人相比，不同種類(lèi)衣原體的偏愛(ài)密碼并不完全相同。 3．感染人的Ct與酵母的密碼子偏愛(ài)性較為一致，而與大腸桿菌、腺病毒和人類(lèi)細(xì)胞的密碼子偏愛(ài)性差別均較大。 以上結(jié)果提示：①不同種及亞種的衣原體密碼子使用頻率既有共性，也有個(gè)性，在考慮具體的優(yōu)化措施時(shí)應(yīng)區(qū)分不同的衣原體種或亞種，對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行具體的分析，以更準(zhǔn)確的反映其個(gè)性特征。②酵母系統(tǒng)可能比較適于Ct基因表達(dá)。③Ct的密碼子使用傾向與腺病毒及人類(lèi)細(xì)胞不同，可能是限制MOMP基因重組腺病毒及重組質(zhì)粒在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中高效表達(dá)的原因之一。對(duì)Ct的抗原基因進(jìn)行改造修飾可能是提高Ct疫苗免疫原性的有效策略。同時(shí)我們分析得出腺病毒與其宿主人類(lèi)細(xì)胞密碼使用相似，按照人類(lèi)細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)密碼子來(lái)優(yōu)化MOMP基因是可行的。今后我們將用實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證這一點(diǎn)。 本研究為進(jìn)一步設(shè)計(jì)高表達(dá)的E型MOMP基因、增強(qiáng)MOMP基因重組腺病毒的免疫原性奠定基礎(chǔ)，同時(shí)也為肺炎衣原體、鸚鵡熱衣原體等基因的改造提供重要信息。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R392

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1 吳仁孝;相軍;劉官信;;新生兒沙眼衣原體結(jié)膜炎[A];新世紀(jì)全國(guó)首屆小兒綜合研究學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

2 鄭英如;李力;胡珊;郭建新;顏耀華;;女性生殖道沙眼衣原體和解脲支原體感染與輸卵管性不孕癥的關(guān)系的研究[A];第八次全國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

3 黃祝娟;;225例盆腔炎患者解脲支原體及沙眼衣原體的檢測(cè)及療效分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

4 葉興東;戴向農(nóng);黎小東;余丹丹;費(fèi)實(shí);湯少開(kāi);黃雪梅;任澤舫;朱慧蘭;;測(cè)序法對(duì)廣州地區(qū)沙眼衣原體omp1基因分型及突變研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第16次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)摘要集[C];2010年

5 邢衛(wèi)斌;彭軍;馬冬梅;門(mén)劍龍;;UF-100尿沉渣全自動(dòng)檢測(cè)儀檢測(cè)體外抗菌素抗衣原體活性[A];全國(guó)性與生殖醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2004年

6 俞小元;;沙眼衣原體和解脲支原體感染的探討[A];紀(jì)念卓越的人民醫(yī)學(xué)家林巧稚大夫誕辰100周年——全國(guó)婦產(chǎn)科高級(jí)學(xué)術(shù)論壇論文集[C];2001年

7 嚴(yán)軍;尤學(xué)平;;生殖道沙眼衣原體感染垂直傳播臨床觀察[A];全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合生殖健康學(xué)術(shù)研討會(huì)論文及摘要集[C];2004年

8 邢衛(wèi)斌;牟兆新;秦蘭英;王秀麗;劉全忠;;UF-100型全自動(dòng)檢測(cè)分析儀檢測(cè)沙眼衣原體的探索[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

9 劉全中;楊士強(qiáng);傅志宜;王樹(shù)椿;繳穩(wěn)玲;田靜群;;遷延難愈沙眼衣原體泌尿生殖道感染——幾種抗生素的療效評(píng)定和隨訪[A];2002中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

10 王強(qiáng);劉繼峰;宋芳吉;初長(zhǎng)虹;王楷;;沙眼衣原體所致非淋菌性尿道炎患者血清IL-8、TNF-α的檢測(cè)[A];2003中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2003年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 凹凸;沙眼衣原體可致不孕[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2001年

2 柯春榮;沙眼衣原體可導(dǎo)致不孕[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2003年

3 江錦琦;女性感染沙眼衣原體可致不孕[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2001年

4 許永杰;過(guò)度清潔亦惹禍[N];中國(guó)體育報(bào);2001年

5 馮建中;肢痛——洛美沙星惹的禍[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2008年

6 相洪琴 許俠;關(guān)注沙眼衣原體感染的流行[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

7 本報(bào)特約撰稿人 樊平;跨國(guó)藥企占盡優(yōu)勢(shì)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2009年

8 楊慧霞;沙眼衣原體感染防治對(duì)婦女健康意義重大[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2003年

9 明秀;女性淋菌病要與哪些疾病相鑒別[N];民族醫(yī)藥報(bào);2009年

10 楊慧霞;沙眼衣原體感染防治對(duì)婦女健康意義重大[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 粟玉珍;沙眼衣原體熱休克蛋白60與免疫致病[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2002年

2 陸原;中藥系列制劑治療CGI的臨床與實(shí)驗(yàn)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2002年

3 伍金林;尿液Gap-LCR-ELISA法檢測(cè)圍產(chǎn)期沙眼衣原體感染及基因型研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

4 齊蔓莉;沙眼衣原體E型DNA疫苗的構(gòu)建及其免疫效果的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2006年

5 鄭燕;優(yōu)化密碼沙眼衣原體主要外膜蛋白DNA疫苗免疫效果的研究[D];山東大學(xué);2007年

6 江勇;沙眼衣原體臨床株體外藥物敏感性與耐藥機(jī)制的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2008年

7 李燕;沙眼衣原體Pmp蛋白的表達(dá)純化及其臨床檢測(cè)的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2007年

8 杜昆;沙眼衣原體CT703蛋白在感染細(xì)胞中的表達(dá)及功能初探[D];中南大學(xué);2011年

9 鄧春;小嬰兒沙眼衣原體肺炎的連接酶鏈反應(yīng)—酶聯(lián)免疫吸附法診斷研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

10 程文;沙眼衣原體感染誘導(dǎo)炎癥機(jī)制的研究[D];中南大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 尤聰;沙眼衣原體培養(yǎng)陽(yáng)性率提高及臨床株熱休克蛋白60的轉(zhuǎn)錄隨傳代的變化[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

2 邢衛(wèi)斌;UF-100型全自動(dòng)檢測(cè)分析儀檢測(cè)沙眼衣原體及測(cè)定其藥敏實(shí)驗(yàn)的探索[D];天津醫(yī)科大學(xué);2003年

3 惠春;L_2型沙眼衣原體主要外膜蛋白基因克隆及表達(dá)[D];沈陽(yáng)藥科大學(xué);2002年

4 張耀光;臨床“疑似沙眼”患者沙眼衣原體感染陽(yáng)性率調(diào)查分析[D];佳木斯大學(xué);2007年

5 朱輝;大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物次抑菌濃度誘導(dǎo)沙眼衣原體耐藥的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

6 李濤;血清E型沙眼衣原體小鼠下生殖道感染模型的標(biāo)準(zhǔn)化研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

7 陳麗麗;沙眼衣原體基因分型及omp1基因多態(tài)性研究[D];南華大學(xué);2005年

8 展小飛;泌尿生殖道沙眼衣原體的隨訪和治療方法的評(píng)估及病程與維生素D3水平的聯(lián)系[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

9 王紅楓;沙眼衣原體E血清型的小鼠生殖道感染模型研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2005年

10 章錦曼;無(wú)癥狀單純型宮頸糜爛之面積與CT、HPV_（16/18）、GC感染的臨床研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2005年

本文編號(hào)：1969833