本文選題：人皰疹病毒7型 + ELISA　； 參考：《青島大學(xué)》2005年碩士論文

【摘要】：目的 構(gòu)建人皰疹病毒7型(HHV7)被膜蛋白pp85的原核高效表達(dá)克隆,制備用于HHV7感染血清學(xué)診斷的基因工程抗原。 方法 ①應(yīng)用HHV7標(biāo)準(zhǔn)株Glasgow感染SupT1細(xì)胞,收獲病變細(xì)胞制備粗提細(xì)胞抗原,并用Sephadex G-75層析柱初步純化,獲得HHV7細(xì)胞工程抗原。②應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增HHV7 ORF U14基因的主要抗原決定簇編碼區(qū)(328～533氨基酸),目的基因與原核表達(dá)載體pThioHis A分別雙酶切后連接,轉(zhuǎn)化宿主菌E.coli BL21,IPTG誘導(dǎo)融合蛋白表達(dá),經(jīng)鎳-敖合物瓊脂糖樹脂柱親和層析純化獲得基因工程抗原。Western blot檢測(cè)重組融合蛋白的特異性。③選擇最適濃度包被96孔ELISA反應(yīng)板,選擇血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),并與Qiagen公司生產(chǎn)的HHV7 IgM和HHV7 IgG抗體ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行比較。 結(jié)果 HHV7被膜蛋白pp85可在E.coli BL21中高效表達(dá),Western blot檢測(cè)結(jié)果表明該融合蛋白可與12份HHV7特異性IgM陽(yáng)性血清中的10份(83.3%)、12份HHV7特異性IgG陽(yáng)性血清中的11份(91.7%)發(fā)生反應(yīng),而10份陰性的血清均不與之發(fā)生反應(yīng)。基因工程抗原的各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)與Qiagen公司ELISA檢測(cè)試劑盒有較好的符合率。 結(jié)論 HHV7 pp85重組蛋白具有良好的抗原性和特異性,進(jìn)一步完善后可用于HHV7感染的臨床檢測(cè),為進(jìn)一步研制開發(fā)新型HHV7診斷試劑提供了重要的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:Objective to construct a prokaryotic expression clone of human herpesvirus 7 (HHV7) membrane protein pp85 and to prepare a genetically engineered antigen for serological diagnosis of HHV7 infection. Methods (1) HHV7 standard strain Glasgow was used to infect SupT1 cells, and the diseased cells were harvested and purified by Sephadex G-75 chromatographic column. HHV7 cell engineering antigen .2 was used to amplify the main antigen determining cluster coding region of HHV7 ORF U14 gene by PCR. The target gene was digested with the prokaryotic expression vector pThioHis A, and the fusion protein was induced by E.coli BL21. The recombinant fusion protein was purified by agarose resin affinity chromatography. The specificity of the recombinant fusion protein was determined by Western blot. The optimal concentration of the recombinant fusion protein was coated with 96 well ELISA reaction plate, and the serum samples were selected for detection. The results were compared with HHV7 IgM and HHV7 IgG antibody ELISA kits produced by Qiagen Company. Results HHV7 envelope protein pp85 could be highly expressed in E.coli BL21. The results showed that the fusion protein could react with HHV7 specific IgM in 10 out of 12 HHV7 specific IgM positive sera, and in 11 out of 12 HHV7 specific IgG positive sera. None of the 10 negative sera reacted with it. The technical parameters of genetic engineering antigen were in good agreement with the ELISA kit of Qiagen Company. Conclusion the recombinant HHV7 pp85 protein has good antigenicity and specificity and can be used in the clinical detection of HHV7 infection. It provides an important theoretical and experimental basis for the further development of new HHV7 diagnostic reagent.
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R346

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本文編號(hào)：1944793