本文選題：樹突狀細(xì)胞 + 移植耐受��； 參考：《華中科技大學(xué)》2007年博士論文

【摘要】： 研究目的:研究樹突狀細(xì)胞獲得耐受性,成為耐受性樹突狀細(xì)胞的機(jī)制;研究耐受性樹突狀細(xì)胞在誘導(dǎo)移植免疫耐受中的作用及臨床意義 研究方法:(1)通過體外實(shí)驗(yàn)研究多種免疫調(diào)節(jié)因子使樹突狀細(xì)胞(DCs)獲得耐受性,誘導(dǎo)其成為耐受性樹突狀細(xì)胞的機(jī)制。通過逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染Foxp3基因,在幼稚CD4+CD25-T細(xì)胞內(nèi)強(qiáng)制性表達(dá)FOXP3蛋白,以獲得CD4+ Foxp3+T細(xì)胞模型。通過流式細(xì)胞術(shù)研究轉(zhuǎn)染后的CD4+ Foxp3+T細(xì)胞對(duì)樹突狀細(xì)胞的免疫共刺激分子影響。通過混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)了解樹突狀細(xì)胞的免疫功能改變。(2)構(gòu)建人HLA-G1真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染K562細(xì)胞并與DCs共培養(yǎng)后,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DCs表面CD80,CD86,ILT3和ILT4分子表達(dá)情況,采用氚胸腺嘧啶核苷摻入法檢測(cè)DCs對(duì)T細(xì)胞免疫功能的影響。(3)構(gòu)建了包含人ILT4基因啟動(dòng)子的熒光素酶表達(dá)載體pGL3-ILTP并轉(zhuǎn)染THP-1細(xì)胞,以研究IL-10作用下THP-1細(xì)胞表面免疫抑制性受體ILT4的表達(dá)變化及其所涉及的基因轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子區(qū)的調(diào)節(jié)機(jī)制。(4)腎移植術(shù)前采集供者來(lái)源PBMC在體外細(xì)胞因子誘導(dǎo)培養(yǎng)下成為供者來(lái)源DCs,與腎移植手術(shù)受者PBMC中分離出來(lái)的CD8+T細(xì)胞共培養(yǎng),考察供者來(lái)源DCs與受者來(lái)源CD8+ T細(xì)胞的相互作用 研究結(jié)果:(1)逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染Foxp3基因轉(zhuǎn)染幼稚CD4+CD25-T細(xì)胞,成功建立了表達(dá)Foxp3的CD4+CD25-T細(xì)胞模型。強(qiáng)制性表達(dá)Foxp3的CD4+CD25-T細(xì)胞可以在體外發(fā)揮免疫抑制作用,誘導(dǎo)DCs表面CD80和CD86表達(dá)水平下調(diào)。體外淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)顯示Foxp3轉(zhuǎn)染小鼠CD4+CD25-T細(xì)胞可以抑制DCs對(duì)異基因淋巴細(xì)胞的活化。實(shí)驗(yàn)證實(shí)轉(zhuǎn)染Foxp3的CD4+CD25-T細(xì)胞對(duì)樹突狀細(xì)胞發(fā)揮作用依賴于細(xì)胞之間的直接接觸。(2)膜表達(dá)的HLA-G1分子與DCs作用后,DCs表面免疫共刺激分子CD80,CD86表達(dá)下調(diào),而抑制性分子ILT3,ILT4表達(dá)上調(diào)。HLA-G1作用后DCs作為異基因抗原刺激淋巴細(xì)胞增殖的活性明顯下降。(3)成功構(gòu)建了包含人ILT4基因啟動(dòng)子的熒光素酶表達(dá)表達(dá)載體pGL3-ILTP,通過流式細(xì)胞術(shù)以及半定量RT-PCR方法揭示,IL-10對(duì)單核來(lái)源THP-1細(xì)胞的抑制性受體ILT4表達(dá)存在促進(jìn)作用,這在蛋白質(zhì)水平和轉(zhuǎn)錄水平都得到了證實(shí)。通過雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果顯示IL-10有增強(qiáng)ILT4啟動(dòng)子活性的作用。(4)處于移植耐受狀態(tài)的腎移植患者外周血分離得到的CD8+T細(xì)胞其Foxp3的mRNA水平較其移植手術(shù)前的水平明顯升高。將處于移植耐受狀態(tài)的腎移植患者外周血分離得到的CD8+T細(xì)胞與其對(duì)應(yīng)的供者來(lái)源的DCs共培養(yǎng)后,供者來(lái)源的DCs的ILT3和ILT4表達(dá)增強(qiáng),呈現(xiàn)耐受DCs表型。 研究結(jié)論:(1)Foxp3轉(zhuǎn)染小鼠多克隆CD4+CD25-T細(xì)胞在體外誘導(dǎo)耐受性樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生,耐受性DCs出現(xiàn)特征性表型,其抑制功能與誘導(dǎo)T細(xì)胞免疫不應(yīng)答有關(guān)。(2)HLA-G1分子可以在體外條件下,下調(diào)DCs表面免疫共刺激分子水平,促進(jìn)ILT3、ILT4表達(dá),誘導(dǎo)免疫耐受性樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生。(3)IL-10可以通過影響人類單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系表達(dá)的免疫抑制性受體ILT4的啟動(dòng)子區(qū)活性來(lái)誘導(dǎo)耐受性DCs產(chǎn)生。(4)腎移植術(shù)后免疫耐受狀態(tài)穩(wěn)定的患者外周血存在CD8+Foxp3+T細(xì)胞亞群,可以誘導(dǎo)耐受性DCs產(chǎn)生,CD8+Foxp3+T細(xì)胞對(duì)耐受性DCs的誘導(dǎo)作用有抗原特異性。
[Abstract]:Objective : To study the tolerance of dendritic cells to the mechanisms of tolerance dendritic cells , and to investigate the role and clinical significance of tolerance dendritic cells in the induction of immune tolerance in transplantation .


Methods : ( 1 ) To investigate the effect of IL - 10 on the immune function of DCs . ( 2 ) To investigate the effect of IL - 10 on the immune function of DCs . ( 2 ) To investigate the effect of IL - 10 on the immune function of DCs .


In vitro lymphocyte proliferation assay showed that CD4 + CD25 - T cells transfected with Foxp3 could inhibit the activation of DCs from allogeneic lymphocytes .


Conclusion : ( 1 ) The expression of IL - 10 and CD8 + Foxp3 + T cells in peripheral blood of patients with stable immune tolerance after kidney transplantation can induce tolerance DCs .
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R392

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1937015