本文選題：系統(tǒng)性白色念珠菌感染 + HSP90��； 參考：《東北師范大學(xué)》2007年碩士論文

【摘要】： 白色念珠菌是寄生在健康宿主皮膚、粘膜的條件致病菌,它可以作為機(jī)會(huì)病原體在人體免疫能力下降和正常菌群失調(diào)時(shí),引起淺層感染和系統(tǒng)感染。近年來(lái),隨著因治療擴(kuò)散性腫瘤以及免疫抑制劑的應(yīng)用而引起的免疫缺陷患者日益增多,系統(tǒng)性白色念珠菌感染的發(fā)病率明顯升高,它的危害性極大,死亡率非常高。白色念珠菌得不到控制的主要原因是缺乏有效的早期診斷、治療和預(yù)防的方法。臨床上依賴(lài)于傳統(tǒng)的血培養(yǎng)的方法診斷該類(lèi)疾病,但存在著檢出率低,敏感性差和診斷過(guò)程時(shí)間長(zhǎng)的問(wèn)題。臨床上采用多粘菌素B和吡唑類(lèi)化學(xué)藥物對(duì)患者進(jìn)行治療,但是耐藥性的病例在不斷增加。為了防止其復(fù)發(fā),我們也延長(zhǎng)了治療的周期,但存在著明顯的副作用。所以早期檢測(cè)出白色念珠菌的感染,在患者進(jìn)入免疫抑制狀態(tài)前通過(guò)疫苗來(lái)增強(qiáng)機(jī)體免疫力具有重要意義。 本研究是利用展示有白色念珠菌熱休克蛋白90(HSP90)特異表位(DEPAGE)的雜合噬菌體(以下簡(jiǎn)稱(chēng)SE-CA-HSP90)作為抗原進(jìn)行抗系統(tǒng)性白色念珠菌感染的免疫保護(hù)作用的研究,以期為真菌預(yù)防性疫苗的開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)包括以下內(nèi)容: 1大量制備雜合噬菌體SE-CA-HSP90 在野生噬菌體的幫助下,將含有編碼白色念珠菌HSP90特異表位(DEPAGE)DNA序列的pfd8H載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌TG1,轉(zhuǎn)化pfd8H的大腸桿菌成功地分泌表達(dá)出展示有DEPAGE表位的雜合噬菌體,再用PEG6000回收和純化培養(yǎng)液中的噬菌體粒子。雜合噬菌體樣品經(jīng)SDS-PAGE電泳后,在凝膠上可見(jiàn)有一條融合蛋白帶,明顯滯后于野生型噬菌體外殼蛋白帶,采用敏感性較高的銀染色方法染色,未見(jiàn)其它雜蛋白帶,說(shuō)明達(dá)到純化要求。 2雜合噬菌體SE-CA-HSP90抗系統(tǒng)性白色念珠菌免疫保護(hù)研究 (1)建立系統(tǒng)性白色念珠菌感染模型,并篩選最佳感染劑量; (2)以雜合噬菌體SE-CA-HSP90為抗原免疫C57BL/6小鼠,同時(shí)注射野生型噬菌體和緩沖液TE作為對(duì)照組。數(shù)周后尾靜脈進(jìn)行系統(tǒng)性白色念珠菌感染; (3)不同時(shí)期進(jìn)行下列指標(biāo)的觀察和檢測(cè): 系統(tǒng)性白色念珠菌感染15天內(nèi)動(dòng)物死亡率的統(tǒng)計(jì); 感染15天后,將免疫動(dòng)物的腎臟研磨成勻漿,在沙堡氏培養(yǎng)基中培養(yǎng)白色念珠菌,檢測(cè)白色念珠菌菌落數(shù)的變化; 制作組織病理切片,進(jìn)行動(dòng)物腎臟受損情況的對(duì)比。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明免疫雜合噬菌體SE-CA-HSP90組,與免疫野生噬菌體組和注射TE組相比,對(duì)系統(tǒng)性白色念珠菌感染的抵抗力增加,表現(xiàn)在小鼠的存活率增加,寄居在腎中的白色念珠菌數(shù)量降低,組織病理學(xué)顯示腎小管內(nèi)的白色念珠菌數(shù)目顯著少于其它組別。結(jié)果說(shuō)明展示外源多肽的雜合噬菌體SE-CA-HSP90有可能發(fā)展成為有效的抗真菌疫苗。
[Abstract]:Candida albicans, a conditional pathogen parasitic on the skin and mucous membrane of a healthy host, can be used as an opportunistic pathogen to cause superficial infection and systemic infection when the immune ability of the human body is reduced and the normal flora is unadjusted. In recent years, the immune deficiency patients are increasing with the treatment of the use of diffuse tumor and immunosuppressant. The incidence of systemic Candida albicans infection is significantly higher, its harm is great and the mortality rate is very high. The main reason for the lack of control of Candida albicans is the lack of effective early diagnosis, treatment and prevention. It is clinically dependent on the traditional blood culture method to diagnose the disease, but the detection rate is low, and the sensitivity is poor. The problem of long duration of the diagnosis is the clinical use of polymyxin B and pyrazole chemicals to treat patients, but the cases of drug resistance are increasing. In order to prevent their recurrence, we have also extended the treatment cycle, but there are obvious side effects. So early detection of Candida albicans infection, the patients entered the free. It is of great significance to enhance immunity through vaccination before vaccination.
The present study is to use the heterozygous phage display (HSP90) specific epitope (HSP90) specific epitope (DEPAGE) of Candida albicans (hereinafter referred to as SE-CA-HSP90) as antigen to protect the immune protection of Candida albicans infection, in order to lay the foundation for the development of fungal prophylactic vaccines. This experiment includes the following contents:
1 a large number of heterozygous phage SE-CA-HSP90
With the help of the wild phage, the pfd8H vector containing the HSP90 specific epitope (DEPAGE) DNA sequence of the Candida albicans was transformed into the Escherichia coli TG1. The Escherichia coli transformed from pfd8H was successfully secreted and expressed the heterozygous phage displayed with the DEPAGE epitope, and then the phage particles in the culture liquid were recovered and purified with PEG6000. Heterozygous phage samples were used. After SDS-PAGE electrophoresis, there was a fusion protein band on the gel, which was obviously lagging behind the wild type phage shell protein band, stained with high sensitivity silver staining method and no other white egg white band, indicating that the purification requirement was reached.
Immune protection of 2 heterozygous phage SE-CA-HSP90 against systemic Candida albicans
(1) establish a systemic Candida albicans infection model and screen the best dose of infection.
(2) C57BL/6 mice were immunized with heterozygous phage SE-CA-HSP90 as antigen, and wild type phage and buffer TE were injected into the control group. The systemic Candida albicans infection was carried out in the tail vein for several weeks.
(3) observe and detect the following indicators at different times:
Statistics of animal mortality within 15 days of systemic Candida albicans infection;
After 15 days of infection, the kidneys of the immunized animals were grinded to homogenate, and Candida albicans were cultured in the medium of sand culture, and the colony number of Candida albicans was detected.
The pathological sections were made to compare the damage of animal kidneys.
The experimental results showed that the immune heterozygous phage SE-CA-HSP90 group, compared with the immunized wild phage group and the TE group, increased the resistance to systemic Candida albicans infection, increased the survival rate of the mice, decreased the number of Candida albicans in the kidney, and showed a significant number of Candida albicans in the renal tubules. Less than other groups, the results suggest that heterozygous phage SE-CA-HSP90 displaying exogenous peptides may develop into an effective antifungal vaccine.
【學(xué)位授予單位】：東北師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R379

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本文編號(hào)：1928090