發(fā)布時(shí)間：2018-05-14 15:33

  本文選題：枸櫞酸桿菌 + 大腸桿菌O157:H7　； 參考：《大連醫(yī)科大學(xué)》2007年碩士論文

【摘要】： 將腸出血性大腸桿菌O157:H7菌株EDL933的基因組序列與大腸桿菌K-12菌株MG1655的的基因組序列比較,發(fā)現(xiàn)在EDL933中具有47個(gè)長(zhǎng)度大于5kb的與細(xì)菌毒力、代謝等有關(guān)的O島,O43島就是其中之一,長(zhǎng)度為87kb,其含有尿素酶基因簇、亞碲酸鉀抗性基因簇及粘附因子,本室在研究過程中將其命名為UTA島。本實(shí)驗(yàn)研究EDL933中的UTA島在弗氏枸櫞酸桿菌中的分布情況,利用PCR和DNA雜交實(shí)驗(yàn)檢測(cè)UTA島的尿素酶基因簇( ureDABCEFG)、亞碲酸鉀抗性基因簇(terWZABCDEF)、粘附因子及此島兩側(cè)的連接序列(clpA及下游連接序列)共18個(gè)基因;同時(shí)根據(jù)基因簇的不同型別,選取代表性菌株進(jìn)行該島序列測(cè)定;采用美國(guó)CDC的PulseNet實(shí)驗(yàn)方法,利用細(xì)菌染色體XbaI酶切脈沖場(chǎng)凝膠電泳(Pulse Field Gel Electrophoresis,PFGE)后,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)菌株聚類分析(UPGMA方法),以了解枸櫞酸桿菌的分子流行病學(xué)特征,分析UTA島的不同型別與PFGE帶型之間是否具有相關(guān)性;此外還進(jìn)行實(shí)驗(yàn)菌株尿素酶及亞碲酸鉀抗性的表型實(shí)驗(yàn)。 本研究發(fā)現(xiàn):在此弗氏枸櫞酸桿菌中發(fā)現(xiàn)存在ure基因簇及ter基因簇,較完整的結(jié)構(gòu)分別為ureD-ureA-ureB-ureC-ureE-ureF-ureG, terW terZ terA  terB-terC-terD-terE-terF;EDL933中iha位于僅臨terF的下方,而通過EDL933的iha與本實(shí)驗(yàn)的測(cè)序菌株枸72進(jìn)行序列比對(duì)后,得知枸72的iha與ure、ter相聚較遠(yuǎn),可能不一同夠成毒力島,因而這里不一并列出。在不同株的枸櫞酸桿菌中,UTA島各有特點(diǎn),共檢測(cè)到該島的八種存在形式。其中六株菌(枸66, 67, 71,72,78和95)具有較完整的UTA島結(jié)構(gòu);其余菌株中含不完整的UTA島形式。在此弗氏枸櫞酸桿菌的菌株中,無(wú)論是完整的該島還是僅含ure基因簇或ter基因簇的菌株,其左位點(diǎn)均相同,其右位點(diǎn)基本上也均相同(除枸5,可能是由于基因序列變異較大引起的)。其具體分布如下:枸5: ureA -ureB -ureC-ureE-ureF;枸4、48001、48003的表現(xiàn)形式:ureA-ureB- ureC-ureE- ureF,terE;ureG(-),ter(-),但其它ure(+)的菌株:ureD-ureA- u -reB-ureC-ureE-ureF;枸70、82、94:ureD - ureA-ureB-ureC- ureE-ureF -ureG;枸74: ureD ureA ureB ureC-ureE-ureF,terB;枸2:ureD- u- reA-ureB-ureC-ureE-ureF , terW-terA -terB-terC-terD-terE-terF;枸3:ureD-ureA-ureB-ureC-ureE-ureF , terW-terZ -terA-terB-terC-terD -terE -terF;枸66、67、71、72、78、95:ureD-ureA -ureB -ureC-ureE-ureF-ureG,terW- terZ-terA - terB-terC-terD-terE-terF。使用Bionumerics數(shù)據(jù)庫(kù)軟件對(duì)PFGE圖像進(jìn)行分析,帶型與UTA島的不同型別之間存在相關(guān)性,相同PFGE帶型的菌株具有相同的UTA島結(jié)構(gòu)形式,PFGE的帶型越相似,其對(duì)應(yīng)菌株的UTA島結(jié)構(gòu)就越相似。尿素酶的表達(dá)與ureD有密切關(guān)系,可能個(gè)別氨基酸的變異在尿素酶的表達(dá)方面起至關(guān)重要的作用;另外ureG對(duì)于尿素酶的表達(dá)影響不大。亞碲酸鉀抗性水平與ter簇有密切關(guān)系,并且terABCD一般成簇存在,是決定亞碲酸鉀抗性的關(guān)鍵性成分;其次terW對(duì)于亞碲酸鉀抗性水平的提高有一定的促進(jìn)作用;再者,有些不含ter基因的菌株也具有較高的抗性,可能與ter簇以外的因素有一定的關(guān)系,例:teh、tmp等。
[Abstract]:The genomic sequence of EDL933 strain of Escherichia coli 157 : H7 was compared with that of Escherichia coli K - 12 strain MG1655 . It was found that there were 47 genes related to bacterial virulence , metabolism and so on in EDL933 .









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本文編號(hào)：1888473