化學(xué)修飾輔助的蛋白質(zhì)組研究策略的建立與初步應(yīng)用
本文選題:磺化 + 同系物標(biāo)記; 參考:《中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2006年博士論文
【摘要】:本論文針對(duì)當(dāng)前蛋白質(zhì)組學(xué)研究中肽段混合物復(fù)雜、蛋白質(zhì)末端信息難以獲得和質(zhì)譜鑒定可信度低等問題,將磺化修飾或同系物標(biāo)記技術(shù)與色譜或凝膠電泳分離技術(shù)相結(jié)合,提出了蛋白質(zhì)標(biāo)簽肽的富集、識(shí)別和鑒定的四種策略,并應(yīng)用于蛋白質(zhì)混合物中組氨酸肽或末端肽的選擇性富集或識(shí)別,以降低體系的復(fù)雜程度和其它肽段的干擾,促進(jìn)肽段的從頭測(cè)序和蛋白質(zhì)的鑒定。全文共分四章,介紹了四種方法:前兩種方法主要針對(duì)“shotgun”技術(shù)路線,從蛋白質(zhì)混合物酶切產(chǎn)生的肽段混合物中分離富集蛋白質(zhì)的末端肽或組氨酸肽以降低體系復(fù)雜程度;后兩章主要針對(duì)基于二維電泳的技術(shù)路線,通過磺化修飾或同系物標(biāo)記對(duì)蛋白質(zhì)的N端肽進(jìn)行選擇性識(shí)別。 本研究首次將磺化修飾與同系物標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用于蛋白質(zhì)末端肽和組氨酸肽的富集、識(shí)別與序列分析,建立了四種新方法,發(fā)表了2篇中文論文,撰寫了4篇英文論文,申請(qǐng)了一項(xiàng)國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目,申報(bào)了四項(xiàng)國(guó)家發(fā)明專利。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)及其簡(jiǎn)單混合物的研究結(jié)果表明,本論文所建立的四種方法可以針對(duì)不同的技術(shù)路線,從蛋白質(zhì)或肽段混合物中選擇性富集或識(shí)別蛋白質(zhì)的末端肽段或含組氨酸肽段,不僅降低了樣品的復(fù)雜程度,,提高了末端肽段的豐度,而且促進(jìn)了肽段的質(zhì)譜測(cè)序與鑒定,提高了質(zhì)譜鑒定的可信度。分析表明,這些方法在蛋白質(zhì)組研究中具有應(yīng)用前景。
[Abstract]:In this paper, we combine sulfonation modification or homologue labeling with chromatography or gel electrophoresis to solve the problems of complex peptide mixture in proteomics research, difficult to obtain protein terminal information and low reliability of mass spectrometry identification.Four strategies for the enrichment, recognition and identification of protein labeled peptides were proposed and applied to the selective enrichment or recognition of histidine peptides or terminal peptides in protein mixtures in order to reduce the complexity of the system and the interference of other peptide segments.To promote the ab initio sequencing of peptides and the identification of proteins.This paper is divided into four chapters. Four methods are introduced: the first two methods mainly aim at "shotgun" technology route, separating and enriching protein terminal peptide or histidine peptide from peptide segment mixture of protein mixture in order to reduce the complexity of the system;In the last two chapters, the N-terminal peptides of proteins are selectively recognized by sulfonation modification or homologue labeling.In this study, sulfonation modification and homology labeling techniques were applied to the enrichment, recognition and sequence analysis of protein terminal peptides and histidine peptides for the first time. Four new methods were established, 2 Chinese papers were published and 4 English papers were written.Applied for a National Natural Science Foundation project and declared four national invention patents.The results of the study on standard protein and its simple mixture show that the four methods developed in this paper can be used for different technical routes.The selective enrichment or recognition of the terminal peptide or histidine peptide from a protein or peptide segment mixture not only reduces the complexity of the sample, increases the abundance of the terminal peptide, but also promotes the sequencing and identification of the peptide by mass spectrometry.The reliability of mass spectrum identification is improved.The analysis shows that these methods have potential application in proteome research.
【學(xué)位授予單位】:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2006
【分類號(hào)】:R341
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