本文選題：隱孢子蟲 + 線粒體　； 參考：《河南農(nóng)業(yè)大學(xué)》2006年碩士論文

【摘要】：隱孢子蟲病是一種重要的人獸共患的原蟲病，目前尚無用于治療隱孢子蟲病的特效藥物。線粒體是真核生物中擁有蛋白和酶最多的細(xì)胞器，因而隱孢子蟲線粒體也可能成為藥物潛在的作用靶位。最近一些研究表明隱孢子蟲存在線粒體誘生的細(xì)胞器，但和其他原生動(dòng)物的線粒體存在著差異。隱孢子蟲具有退化的線粒體，但缺少線粒體基因組，完全依賴核基因來編碼所需的功能蛋白。 1．為了評(píng)價(jià)兩種常用免疫抑制方法對(duì)小白鼠排卵囊規(guī)律的影響。作者將19日齡小白鼠隨機(jī)分成兩組，第一組通過飲水給予地塞米松，第二組采用導(dǎo)胃管灌服地塞米松。第3天，兩組中每只小白鼠灌胃接種人源隱孢子蟲，每只小白鼠感染量為1.5×10~6個(gè)卵囊。結(jié)果：兩組均在感染的當(dāng)天就有卵囊排出，感染后第6天糞便卵囊計(jì)數(shù)明顯增加，隨之出現(xiàn)3個(gè)高峰期，此后逐漸下降。免疫抑制組小白鼠在卵囊持續(xù)期不斷有死亡但無腹瀉癥狀。結(jié)論：用這兩種免疫抑制方法，均能成功感染人源隱孢子蟲，但通過灌服地塞米松可使小白鼠獲得更高的OPG(每克糞便中的卵囊數(shù))值和更長的排卵囊持續(xù)期。 2．為了近一步了解人源隱孢子蟲在小白鼠體內(nèi)的內(nèi)生發(fā)育情況。作者采用19日齡昆明系小白鼠作為模型動(dòng)物，隨機(jī)分成8組，分3個(gè)感染劑量進(jìn)行人源隱孢子蟲分離株感染系列篩選試驗(yàn)，并確定隨劑量和時(shí)間不同對(duì)人源隱孢子蟲在小白鼠寄生部位的影響。感染后于4H、8H、12H、48H、72H破殺高劑量組。4D、6D、9D、12D，16D，20D破殺中劑量組。取每只小白鼠的消化道和其他臟器用福爾馬林固定，作組織切片觀察人源隱孢子蟲在小白鼠體內(nèi)的寄生部位和內(nèi)生發(fā)育情況。結(jié)果表明隱孢子蟲主要寄生在小白鼠十二指腸、空腸和回腸。在感染早期主要寄生在空腸和回腸，在感染中后期主要寄生在十二指腸和空腸。 3．為了從分子上了解本試驗(yàn)室所分離到隱孢子蟲株所屬的種或基因型，作者對(duì)所分離到隱孢子蟲種株進(jìn)行PCR擴(kuò)增18SrRNA基因全序列和HSP70基因序列，并對(duì)PCR擴(kuò)增片段進(jìn)行測(cè)序，，然后利用Clustal X、DNAstar和Paup等軟件對(duì)其進(jìn)行序列分析比較、構(gòu)建分子進(jìn)化樹，試圖從分子上證明河南省不同地區(qū)不同種類隱孢子蟲的遺傳特征，以闡明隱孢子蟲病的分子流行病學(xué)特點(diǎn)。通過18SrRNA基因全序列和HSP70序列分析，河南人源隱孢子蟲分離株為小球隱孢子蟲鼠基因型；河南鹿源隱孢子蟲分離株不同與小球隱孢子蟲鹿基因型；河南豬源隱孢子蟲的兩個(gè)分離株均為小球隱孢子蟲豬基因型，即豬隱孢子蟲；河南鵪鶉源的隱孢子蟲兩個(gè)分離株分別為貝氏隱孢子蟲和火雞隱孢子蟲；河南烏雞隱孢子蟲和鴕鳥隱孢子蟲分離株均為貝氏隱孢子蟲；河南牛源隱孢子蟲分離株為安氏隱孢子蟲。 4．本試驗(yàn)以核編碼的線粒體功能性蛋白基因Cpn60，AOX和PNO作為研究對(duì)象，對(duì)實(shí)驗(yàn)室分離到隱孢子蟲分離株進(jìn)行擴(kuò)增測(cè)序，以確定在動(dòng)物源隱孢子蟲線粒體相關(guān)基因是否存在，對(duì)擴(kuò)增出的序列進(jìn)行比對(duì)分析構(gòu)建進(jìn)化樹，以確定不同隱孢子蟲株之間的進(jìn)化關(guān)系，并與18SrRNA基因和HSP70基因構(gòu)建的進(jìn)化樹作對(duì)照，進(jìn)而評(píng)價(jià)這些基因是否更適合作為隱孢子蟲分類和進(jìn)化關(guān)系的基因座。結(jié)果通過CPN60、AOX和PNO基因編碼序列構(gòu)建進(jìn)化樹也同樣適于作為隱孢子蟲種系發(fā)育分析。
[Abstract]:Cryptosporidiosis is an important zoonotic protozoan disease, there is still no effective drug for the treatment of cryptosporidiosis. Mitochondria are organelles with most protein and enzyme in eukaryotes, so the mitochondrion of Cryptosporidium may be a potential target of drugs. The most recent studies show that Cryptosporidium insect mitochondria induced cell birth, but other protozoa and mitochondrial differences. Cryptosporidium has degenerated mitochondria, but the lack of mitochondrial genome, protein function is completely dependent on nuclear gene encoding is required.
1. in order to evaluate the effect of two kinds of commonly used methods of immunosuppressive mice pvax-cp15-p23-cp15 law. The 19 day old mice were randomly divided into two groups, the first group through drinking water treated with dexamethasone. The second groups by gavage. Dexamethasone guide tube for third days, two in each group mice were orally inoculated human Cryptosporidium, each mouse infection quantity is 1.5 * 10~6 oocysts. Results: the two groups were infected on the day of discharge oocysts, sixth days after infection fecal oocyst counts increased significantly, resulting in the 3 peak, then decreased gradually. The immunosuppressive mice in duration have been killed but oocysts without diarrhea conclusion: with the two kinds of immune suppression methods, can successfully infect human Cryptosporidium, but by gavage dexamathasone mice obtained higher OPG (the number of oocysts per gram feces) value and longer duration of oocyst.
2. in order to further our understanding of human Cryptosporidium in mice of endogenous development. The author adopts 19 day old Kunming mice as animal model, randomly divided into 8 groups, 3 of infective dose of Cryptosporidium infection series screening test, and determined with dose and time different effects on mice in parts of the parasitic human Cryptosporidium infection. After 4H, 8H, 12H, 48H, 72H break to kill high dose group.4D, 6D, 9D, 12D, 16D, 20D in the break to kill dose. Take each mouse digestive tract and other organs were fixed in formalin as the organization section observation of human Cryptosporidium growth in mice in vivo and parasitic site. Results show that Cryptosporidium parasites mainly in mouse duodenum, jejunum and ileum. In early infection mainly parasitic in jejunum and ileum, late in infection mainly parasitic on twelve duodenum and jejunum.
3. in order to understand the test chamber from the molecule isolated species or genotypes of Cryptosporidium isolates belong to the author the isolated Cryptosporidium isolates were amplified by PCR 18SrRNA gene sequence and HSP70 gene sequence, and amplified PCR fragments were sequenced, and then use Clustal X, DNAstar and Paup software analysis and comparison of the sequences, the phylogenetic trees, trying to prove from the molecular genetic characteristics of Cryptosporidium in different areas of Henan Province, to clarify the molecular epidemiology of cryptosporidiosis. Through the complete sequence of 18SrRNA gene and HSP70 sequence analysis, strain of Cryptosporidium parvum genotype in Henan source separation Cryptosporidium; and different strains of Cryptosporidium parvum genotype isolated by Henan deer deer sporozoans; Henan porcine Cryptosporidium isolates were two for Cryptosporidium parvum swine genotype, i.e. Cryptosporidium suis Henan; quail source of Cryptosporidium isolates were two Cryptosporidium and Cryptosporidium meleagridis; Henan chicken and ostrich Cryptosporidium Cryptosporidium isolates were Cryptosporidium baileyi; Henan Cryptosporidium from bovines by isolates of Cryptosporidium andersoni.
In this experiment, 4. mitochondrial functional nuclear protein gene Cpn60 encoding, AOX and PNO as the research object, the laboratory isolates of Cryptosporidium isolates was amplified and sequenced to determine the source of Cryptosporidium in animal mitochondrial related genes exist on the amplified sequence comparison analysis of the phylogenetic tree, to determine the different hidden the evolutionary relationship between spore strains, and phylogenetic tree was constructed with 18SrRNA gene and HSP70 gene as controls, and to evaluate whether these genes are more suitable as the locus of Cryptosporidium taxonomy and evolutionary relationships. The results by CPN60, AOX and PNO gene encoding sequence phylogenetic tree is also suitable for Cryptosporidium species development analysis.

【學(xué)位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R-332;R383

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4 劉s

本文編號(hào)：1763191