本文選題：骨髓間充質(zhì)干細胞 + 增殖��； 參考：《中國醫(yī)科大學》2005年碩士論文

【摘要】：實驗目的 骨髓間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一類存在于骨髓間質(zhì)中具有多向分化潛能的干細胞。近年應用MSCs移植修復中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷和治療神經(jīng)系統(tǒng)的各種疾病已成為神經(jīng)科學研究熱點。然而成體骨髓中MSCs的比例非常小,并且在體外培養(yǎng)MSCs過程中其增殖和分化率均有所下降。這些都限制了MSCs在細胞和基因治療中的應用。 本實驗單獨及聯(lián)合應用堿性成纖維生長因子(basic fibroblast growthfactor,bFGF)和維生素C作用于體外培養(yǎng)的MSCs,以尋求體外快速、大量增殖MSCs的有效方法,并將增殖后的MSCs移植入大腦中動脈閉塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠體內(nèi)檢測其在體內(nèi)的生長情況。從而為神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療中提供足夠數(shù)量具有高生物學活性的MSCs種子細胞提供新的思路。 實驗方法 1.體外分離純化MSCs,進行原代和傳代培養(yǎng)。取第3代MSCs根據(jù)培養(yǎng)液中加入不同影響因子分為4組:(1)對照組(2)維生素C組(3)bFGF組(4)維生素C+bFGF組。繼續(xù)培養(yǎng),逐日觀察各組細胞的生長狀況和形態(tài)變化特點。 2.免疫細胞化學技術測定各組細胞表面抗原CD29、CD34、CD44的表達,判定所培養(yǎng)細胞中是否存在造血細胞和內(nèi)皮細胞的污染。 3.將第3代MSCs接種在24孔板和96孔板內(nèi),根據(jù)分組加入相應濃度維生素C和bFGF進行培養(yǎng),繪制各組細胞的生長曲線。MTT法測定1、2、3、5和7天吸光度A值,結果進行統(tǒng)計學分析。
[Abstract]:Experimental purposeBone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) is a kind of stem cells with multiple differentiation potential in bone marrow mesenchymal cells.In recent years, the application of MSCs transplantation in the repair of central nervous system injury and the treatment of various diseases of the nervous system has become a research hotspot in neuroscience.However, the proportion of MSCs in adult bone marrow was very small, and the proliferation and differentiation rate of MSCs decreased in vitro.All these limit the application of MSCs in cell and gene therapy.In this study, the effects of basic fibroblast growth factor basic FGF1 and vitamin C on cultured MSCs in vitro were studied in order to find an effective method for rapid proliferation of MSCs in vitro.The proliferated MSCs was transplanted into middle cerebral artery occlusion (MCAO) rats.This provides a new idea for the treatment of nervous system diseases to provide a sufficient number of MSCs seed cells with high biological activity.Experimental method1.MSCs were isolated and purified in vitro for primary and passage culture.The third generation of MSCs was divided into 4 groups: 1) control group (2)) vitamin C group (4) vitamin C bFGF group.The cell growth and morphological changes were observed day by day.2.Immunocytochemistry was used to detect the expression of CD29, CD34, CD44, and to determine whether hematopoietic cells and endothelial cells were contaminated in the cultured cells.3.The third generation of MSCs was inoculated in 24-well plate and 96-well plate. The cells were cultured with vitamin C and bFGF. The growth curve of each group was plotted. The absorbance A values of 1, 2, 3 and 7 days were measured by MTT method. The results were statistically analyzed.
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R329.2

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