本文選題：N-V蛋白酶 + 多克隆抗體�。� 參考：《吉林大學(xué)》2006年碩士論文

【摘要】： N-V蛋白酶是從一種我國(guó)天然海洋生物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的具有強(qiáng)烈纖維蛋白溶解作用的纖溶酶,對(duì)血栓分解具有潛在的作用[1]。為了進(jìn)一步研究N-V蛋白酶的作用機(jī)理和它的代謝過(guò)程以及此藥在臨床上的應(yīng)用,本實(shí)驗(yàn)初步建立了ELISA的兩種檢測(cè)方法并對(duì)N-V蛋白酶在動(dòng)物體內(nèi)的代謝過(guò)程作了初步研究。 N-V蛋白酶是一種氨基肽酶[2],通過(guò)對(duì)N-V蛋白酶多克隆抗體的制備,我們對(duì)氨基肽酶這一酶類多克隆抗體的免疫制備過(guò)程有了初步了解,采用N-V蛋白酶加入弗氏佐劑免疫家兔的方法得到免疫血清[3],利用蛋白質(zhì)等電點(diǎn)、鹽析和疏水特性,運(yùn)用硫酸銨沉淀法和phenyl-sepharose疏水色譜柱結(jié)合法提純免疫血清。比一般的DEAE-纖維素層析、分子篩和硫酸銨-辛酸沉淀法獲得的抗體相比,具有純度高、實(shí)驗(yàn)步驟少、活性好、回收率高等優(yōu)點(diǎn)。分別用雙向免疫擴(kuò)散電泳和SDS-PAGE電泳測(cè)效價(jià)和純度,成功的用過(guò)碘酸鈉氧化法把HRP標(biāo)記于N-V蛋白酶多克隆抗體以及二抗即羊抗兔抗體,且酶標(biāo)記質(zhì)量完全符合以后的實(shí)驗(yàn)要求。 我們成功建立N-V蛋白酶的兩種ELISA檢測(cè)方法,分別為夾心ELISA和間接ELISA法。并將此方法與其他蛋白定量方法作了比較。該方法為N-V蛋白酶的藥代和毒理研究提供技術(shù)手段,為臨床中用藥提供參考和臨床檢驗(yàn)提供技術(shù),并初步確定正常家兔對(duì)N-V蛋白酶的體液免疫應(yīng)答特點(diǎn)以及N-V蛋白酶在家兔體內(nèi)的代謝過(guò)程。
[Abstract]:N-V protease is a fibrinolytic enzyme with strong fibrinolysis found in natural marine organisms in China. It has a potential role in thrombolysis [1].In order to further study the mechanism of N-V protease and its metabolic process and its clinical application, two methods for the detection of ELISA were established and the metabolic process of N-V protease in animals was studied.N-V protease is an aminopeptidase. Through the preparation of polyclonal antibody against N-V protease, we have a preliminary understanding of the preparation process of aminopeptidase, an enzyme polyclonal antibody.Immunized rabbits were immunized with N-V protease and Freund's adjuvant. Using protein isoelectric point, salting out and hydrophobic properties, the immunized serum was purified by ammonium sulfate precipitation method and phenyl-sepharose hydrophobic chromatographic column method.Compared with the conventional DEAE-cellulose chromatography, molecular sieve and the antibody obtained by ammonium sulphate-octanoic acid precipitation method have the advantages of high purity, less experimental steps, good activity and high recovery.The titer and purity of N-V protease polyclonal antibody and sheep anti-rabbit antibody were detected by two-dimensional immunodiffusion electrophoresis and SDS-PAGE electrophoresis, respectively. The HRP was successfully labeled with N-V protease polyclonal antibody and sheep anti-rabbit antibody by sodium periodate oxidation method.We successfully established two ELISA methods for the detection of N-V protease, sandwich ELISA and indirect ELISA, respectively.The method was compared with other protein quantification methods.This method provides a technical means for the pharmacokinetic and toxicological study of N-V protease, and provides a reference for the clinical use of drugs and techniques for clinical testing.The humoral immune response of normal rabbits to N-V protease and the metabolic process of N-V protease in rabbits were preliminarily determined.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R392.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1754110