本文選題：PTD　切入點(diǎn)：Foxp3融合蛋白　出處：《江蘇大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： Foxp3屬于FOX(forkhead box)轉(zhuǎn)錄因子家族，對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells Treg)的發(fā)生及生物學(xué)功能的發(fā)揮具有十分重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)表達(dá)外源性Foxp3可使非調(diào)節(jié)性T細(xì)胞獲得調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表型及功能。 蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域(protein transduction domain,PID)是HIV-1(human immunodeficiency virus type 1)基因編碼的反式激活蛋白(Trans-activator transcription，TAT)中的一段具有穿膜功能的多肽，能夠攜帶外源性蛋白穿過幾乎所有的真核細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞漿和核內(nèi)。 目的：構(gòu)建帶HIV-1 PTD序列的原核表達(dá)載體pET28a-PID，表達(dá)小鼠PTD-Foxp3融合蛋白，并研究其對(duì)T細(xì)胞免疫功能的調(diào)節(jié)作用。 方法：利用基因重組技術(shù)構(gòu)建pET28a-PTD原核表達(dá)載體及pET28a-PID-Foxp3融合蛋白表達(dá)載體，并在大腸埃希菌Rosetta(DE3)中表達(dá)融合蛋白，經(jīng)Ni~(2+)分離柱純化帶His標(biāo)簽的PID-Foxp3融合蛋白。采用Western-blot技術(shù)鑒定所表達(dá)的PTD-Foxp3蛋白；運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)確認(rèn)融合蛋白穿膜功能；通過混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)初步分析融合蛋白對(duì)T細(xì)胞活化增殖能力的調(diào)節(jié)。 結(jié)果：成功地構(gòu)建了pET28a-PID-Foxp3融合蛋白表達(dá)載體，，表達(dá)并純化了PTD-Foxp3融合蛋白。通過流式細(xì)胞術(shù)分析證實(shí)PTD-Foxp3融合蛋白能有效的進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)；而且能在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中有效抑制T細(xì)胞的活化增殖能力。 結(jié)論：成功表達(dá)具有生物學(xué)活性的PTD-Foxp3融合蛋白，為進(jìn)一步研究PTD-Foxp3融合蛋白生物學(xué)功能和構(gòu)建表達(dá)人PTD-Foxp3融合蛋白奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Foxp3 belongs to the FOX(forkhead box) transcription factor family, It is found that the expression of exogenous Foxp3 can induce the phenotype and function of regulatory T cells. Protein transduction domain (transduction) is a transmembrane transcriptional peptide encoded by HIV-1(human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1(human immunodeficiency virus type 1), which can carry foreign proteins through almost all eukaryotic cell membranes into the cytoplasm and nucleus. Aim: to construct a prokaryotic expression vector pET28a-PIDwith HIV-1 PTD sequence to express mouse PTD-Foxp3 fusion protein and to study its regulatory effect on T cell immune function. Methods: pET28a-PTD prokaryotic expression vector and pET28a-PID-Foxp3 fusion protein expression vector were constructed by gene recombination technique, and the fusion protein was expressed in Escherichia coli Rosetta-DE3. PID-Foxp3 fusion protein labeled with His was isolated and purified by Ni~(2 column. The expressed PTD-Foxp3 protein was identified by Western-blot technique, and the transmembrane function of the fusion protein was confirmed by flow cytometry. The regulation of fusion protein on T cell activation and proliferation was preliminarily analyzed by mixed lymphocyte reaction. Results: pET28a-PID-Foxp3 fusion protein expression vector was successfully constructed and PTD-Foxp3 fusion protein was expressed and purified. Flow cytometry showed that PTD-Foxp3 fusion protein could effectively enter the cells. Moreover, it can effectively inhibit the activation and proliferation of T cells in mixed lymphocyte reaction. Conclusion: the successful expression of PTD-Foxp3 fusion protein with biological activity lays a foundation for further study of biological function of PTD-Foxp3 fusion protein and construction of human PTD-Foxp3 fusion protein.
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R392

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 薛磊;徐志飛;;轉(zhuǎn)錄因子FOXP3在腫瘤免疫中的作用[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年09期

2 王宏偉;陳福琴;;FOXP3與自身免疫性甲狀腺疾病[J];國(guó)際內(nèi)科學(xué)雜志;2009年10期

3 汪薔華;趙守松;;CD4~+CD25~+Treg細(xì)胞在慢性乙型肝炎發(fā)病機(jī)制中的作用研究進(jìn)展[J];實(shí)用肝臟病雜志;2012年06期

4 奚敏;張瑞祺;;CD_4~+CD_(25)~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在病毒性肝炎中的研究進(jìn)展[J];臨床肝膽病雜志;2008年06期

5 王禮文;CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞及相關(guān)標(biāo)記物的研究進(jìn)展[J];臨床檢驗(yàn)雜志;2005年02期

6 曹新國(guó);王禮文;;人類免疫調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子FOXP3研究進(jìn)展[J];臨床檢驗(yàn)雜志;2006年01期

7 馬錚;王如文;;Foxp3基因與自身免疫性疾病[J];免疫學(xué)雜志;2008年01期

8 楊韶艷;郭洪;宋志強(qiáng);劉寶珩;郭紅衛(wèi);宋秋荷;郝飛;白云;;FOXP3基因多態(tài)性與斑禿的關(guān)聯(lián)研究[J];免疫學(xué)雜志;2010年04期

9 劉迪昕;林曉萍;;調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在牙周病理性損傷中作用的研究現(xiàn)狀[J];口腔醫(yī)學(xué);2013年12期

10 馬秋茹;李曉嵐;;FOXP3基因與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究[J];皮膚病與性病;2010年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 邱曉燕;焦正;張明;陳建平;施孝金;鐘明康;;FOXP3基因多態(tài)性對(duì)腎移植患者排斥發(fā)生率的影響[A];第十二次全國(guó)臨床藥理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議會(huì)議論文集[C];2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 郭昊;白介素35基因治療協(xié)同地西他濱抑制小鼠心臟移植排斥反應(yīng)的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2011年

2 宋秋荷;FOXP3基因內(nèi)含子1區(qū)SNP與尋常型銀屑病發(fā)病相關(guān)性的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

3 孫麗光;誘導(dǎo)T細(xì)胞成熟及免疫抑制劑對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響[D];吉林大學(xué);2006年

4 張建;原發(fā)性膽汁性肝硬化患者中CD4～+CD25～+免疫調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

5 張愛軍;靛玉紅對(duì)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響及在特發(fā)性血小板減少性紫癜中的應(yīng)用研究[D];山東大學(xué);2007年

6 楊治芳;LADA患者羅格列酮的治療及其免疫機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2007年

7 高琳;Foxp3，F(xiàn)as，F(xiàn)asL，COMT基因多態(tài)性與漢族尋常型銀屑病相關(guān)性分析[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

8 馬錚;重癥肌無力胸腺Foxp3表達(dá)及臨床意義的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

9 仲寧;Foxp3轉(zhuǎn)染CD4~+CD25~-T細(xì)胞誘導(dǎo)大鼠同種異體心臟移植免疫耐受的研究[D];蘇州大學(xué);2008年

10 繆春明;Foxo蛋白在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血不同腦區(qū)中表達(dá)及意義[D];吉林大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張秀娟;FOXP3、T淋巴細(xì)胞亞群在鼻息肉中的表達(dá)及其臨床意義[D];鄭州大學(xué);2010年

2 耿曄;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者CD4~+CD25~+T細(xì)胞FOXP3基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

3 周秉俠;FOXP3在玫瑰糠疹、扁平苔蘚、大斑塊型副銀屑病及蕈樣肉芽腫中的表達(dá)及意義[D];山東大學(xué);2011年

4 崔善;FOXJ1基因多態(tài)性與中國(guó)朝鮮族人群哮喘易感性的相關(guān)性研究[D];延邊大學(xué);2011年

5 周麗娜;酵母雙雜交系統(tǒng)篩選FOXP3相互作用蛋白[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

6 賈維勝;Foxp3基因轉(zhuǎn)染的CD4+CD25-T細(xì)胞對(duì)小鼠心臟移植物存活的影響[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

7 嚴(yán)定安;調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞在系統(tǒng)性紅斑狼瘡?fù)庵苎谋磉_(dá)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2007年

8 李廣生;細(xì)胞因子及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在大鼠肺纖維化中的作用[D];山西醫(yī)科大學(xué);2007年

9 焦海春;小鼠Foxp3重組蛋白的表達(dá)、多抗制備及Foxp3在小鼠1型糖尿病模型中的表達(dá)研究[D];南華大學(xué);2007年

10 奚敏;乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中FoxP3mRNA的表達(dá)水平[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

本文編號(hào)：1618733