發(fā)布時間：2018-03-16 06:33

  本文選題：PTD　切入點：Foxp3融合蛋白　出處：《江蘇大學》2007年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： Foxp3屬于FOX(forkhead box)轉錄因子家族，對調節(jié)性T細胞(regulatory T cells Treg)的發(fā)生及生物學功能的發(fā)揮具有十分重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)表達外源性Foxp3可使非調節(jié)性T細胞獲得調節(jié)性T細胞的表型及功能。 蛋白轉導結構域(protein transduction domain,PID)是HIV-1(human immunodeficiency virus type 1)基因編碼的反式激活蛋白(Trans-activator transcription，TAT)中的一段具有穿膜功能的多肽，能夠攜帶外源性蛋白穿過幾乎所有的真核細胞膜進入細胞漿和核內。 目的：構建帶HIV-1 PTD序列的原核表達載體pET28a-PID，表達小鼠PTD-Foxp3融合蛋白，并研究其對T細胞免疫功能的調節(jié)作用。 方法：利用基因重組技術構建pET28a-PTD原核表達載體及pET28a-PID-Foxp3融合蛋白表達載體，并在大腸埃希菌Rosetta(DE3)中表達融合蛋白，經(jīng)Ni~(2+)分離柱純化帶His標簽的PID-Foxp3融合蛋白。采用Western-blot技術鑒定所表達的PTD-Foxp3蛋白；運用流式細胞術確認融合蛋白穿膜功能；通過混合淋巴細胞反應初步分析融合蛋白對T細胞活化增殖能力的調節(jié)。 結果：成功地構建了pET28a-PID-Foxp3融合蛋白表達載體，，表達并純化了PTD-Foxp3融合蛋白。通過流式細胞術分析證實PTD-Foxp3融合蛋白能有效的進入細胞內；而且能在混合淋巴細胞反應中有效抑制T細胞的活化增殖能力。 結論：成功表達具有生物學活性的PTD-Foxp3融合蛋白，為進一步研究PTD-Foxp3融合蛋白生物學功能和構建表達人PTD-Foxp3融合蛋白奠定了基礎。
[Abstract]:Foxp3 belongs to the FOX(forkhead box) transcription factor family, It is found that the expression of exogenous Foxp3 can induce the phenotype and function of regulatory T cells. Protein transduction domain (transduction) is a transmembrane transcriptional peptide encoded by HIV-1(human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1(human immunodeficiency virus type 1), which can carry foreign proteins through almost all eukaryotic cell membranes into the cytoplasm and nucleus. Aim: to construct a prokaryotic expression vector pET28a-PIDwith HIV-1 PTD sequence to express mouse PTD-Foxp3 fusion protein and to study its regulatory effect on T cell immune function. Methods: pET28a-PTD prokaryotic expression vector and pET28a-PID-Foxp3 fusion protein expression vector were constructed by gene recombination technique, and the fusion protein was expressed in Escherichia coli Rosetta-DE3. PID-Foxp3 fusion protein labeled with His was isolated and purified by Ni~(2 column. The expressed PTD-Foxp3 protein was identified by Western-blot technique, and the transmembrane function of the fusion protein was confirmed by flow cytometry. The regulation of fusion protein on T cell activation and proliferation was preliminarily analyzed by mixed lymphocyte reaction. Results: pET28a-PID-Foxp3 fusion protein expression vector was successfully constructed and PTD-Foxp3 fusion protein was expressed and purified. Flow cytometry showed that PTD-Foxp3 fusion protein could effectively enter the cells. Moreover, it can effectively inhibit the activation and proliferation of T cells in mixed lymphocyte reaction. Conclusion: the successful expression of PTD-Foxp3 fusion protein with biological activity lays a foundation for further study of biological function of PTD-Foxp3 fusion protein and construction of human PTD-Foxp3 fusion protein.
【學位授予單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R392

【共引文獻】

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本文編號：1618733