本文關(guān)鍵詞： 動物模型 骨癌痛 痛行為學(xué)評估 骨質(zhì)破壞 大鼠 GFAP　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 據(jù)國際癌癥研究中心報告,除皮膚癌,全球每年新增癌癥病例為1000萬,估計到2020年這個數(shù)字可能達(dá)到1500萬。全球范圍內(nèi),2005年因癌癥導(dǎo)致死亡的患者達(dá)到760萬。在美國,每4個死亡患者中有1個因為癌癥所致,并且癌癥已超過心血管疾病排在致死病因之首。雖然癌癥的發(fā)病率逐年上升,但是隨著癌癥早期診斷技術(shù)和綜合治療水平 的不斷進步,癌癥患者的存活時間也明顯延長。但是,約有三分之二的晚期癌癥患者會發(fā)生骨轉(zhuǎn)移,骨轉(zhuǎn)移也被認(rèn)為是癌癥引起疼痛最常見的原因。隨著腫瘤細(xì)胞的生長,骨質(zhì)的正常結(jié)構(gòu)發(fā)生破壞,當(dāng)侵犯骨輕度受力或體位改變時會出現(xiàn)劇烈疼痛,嚴(yán)重影響患者的睡眠和生活,這是導(dǎo)致晚期腫瘤患者生存質(zhì)量下降的主要原因。 由于長期以來缺乏合適的動物模型,無法對癌痛的產(chǎn)生機制進行研究。近年來陸續(xù)出現(xiàn)的小鼠股骨、跟骨、肱骨和大鼠脛骨癌癥痛模型,極大地推動了癌癥痛的基礎(chǔ)研究。1999年,美國科研人員率先用同品系的溶骨纖維肉瘤細(xì)胞種植在小鼠股骨腔內(nèi),成功構(gòu)建了首例小鼠骨癌痛模型。2002年,英國科研人員用MRMT-1大鼠乳腺癌細(xì)胞成功構(gòu)建成首例大鼠脛骨骨癌痛模型。2005年,美國科研人員用大鼠前列腺癌細(xì)胞構(gòu)建成功大鼠脛骨骨癌痛模型。由于上述腫瘤細(xì)胞在國內(nèi)無法得到,本課題試了好幾種品系的大鼠腫瘤細(xì)胞,最終用大鼠的Walker256乳腺癌肉瘤細(xì)胞構(gòu)建成大鼠脛骨骨癌痛模型。并對接種后動物的致瘤率和痛敏行為進行了評估,對其骨結(jié)構(gòu)的破壞進行了影象學(xué)和組織病理切片分析,還對患側(cè)脊髓切片星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活進行了免疫組化的分析。結(jié)果如下: 1.手術(shù)后大鼠的患瘤率: 接種Walker256腫瘤細(xì)胞的大鼠共52只,其中觀察到有腫瘤細(xì)胞生長的為35只,患瘤率為67.3 %。有7只大鼠在實驗過程中出現(xiàn)不可預(yù)見性的突然死亡,不能進行實驗觀察,最后有痛行為學(xué)表現(xiàn)且進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計的大鼠共28只。占總數(shù)的53.8 %。 2.接種成功的腫瘤大鼠的生長狀態(tài)和腫瘤生長特征: 這28只大鼠在接受接種手術(shù)后的前2周生長狀態(tài)良好。85%的大鼠從PID15-18天開始,陸續(xù)出現(xiàn)不愿讓患側(cè)后肢負(fù)重的情況,表現(xiàn)為患肢足外翻現(xiàn)象。還有15%的大鼠出現(xiàn)這種情況較晚,在PID的19-21天出現(xiàn)。盡管每只大鼠出現(xiàn)痛行為學(xué)改變的時間不同,但一旦出現(xiàn),其以后的痛行為表現(xiàn)都比較接近。大鼠出現(xiàn)足外翻現(xiàn)象后,不久接種部位的組織出現(xiàn)腫脹,其后4-6天出現(xiàn)輕度惡液質(zhì),接下來惡液質(zhì)明顯加重,最終因惡液質(zhì)嚴(yán)重全身衰竭死亡或盆腔、腹腔廣泛轉(zhuǎn)移而死亡。90%的大鼠從出現(xiàn)痛敏到死亡的時間為6-9天,10%的為10-12天。 3接種成功的腫瘤大鼠放射影像學(xué)結(jié)果: 在PID的第5天,腫瘤組和sham組的X光片沒有觀察到脛骨骨質(zhì)有任何破壞的表現(xiàn)。在第17天,sham組的評分為0分,腫瘤組的平均評分為1.5,在PID 26天時,sham組的評分仍為0,腫瘤組的平均評分為4。 同一只大鼠動態(tài)的比較了其在PID5、17、26天的影像學(xué)差異,同時在PID26天,還進行了接種側(cè)和對側(cè)的骨質(zhì)的影像學(xué)比較。在第5天,骨質(zhì)沒破壞,在PID17天,腫瘤細(xì)胞向外侵蝕,出現(xiàn)明顯的骨皮質(zhì)破壞征象。隨著腫脹的加劇,到PID26天,影像學(xué)資料顯示整個骨結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯改變和破壞。 4接種成功的腫瘤大鼠接種側(cè)脛骨腫瘤組織病理學(xué)結(jié)果: Sham組的接種側(cè)脛骨結(jié)構(gòu)正常。而腫瘤組HE染色見腫瘤細(xì)胞充滿骨髓腔,正常骨結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重。 5接種成功的腫瘤大鼠痛行為學(xué)評估結(jié)果: 5.1大鼠正常走動痛行為學(xué)評分結(jié)果: 正常組和sham組的大鼠在觀察期中,手術(shù)側(cè)后肢的走動痛行為評分無變化,都為0分。而腫瘤組大鼠隨著腫瘤細(xì)胞的生長,局部組織腫脹明顯,痛行為學(xué)評分越來越高。 5.2接種成功的腫瘤大鼠熱痛敏結(jié)果: 正常組和sham組的大鼠在觀察期中,手術(shù)側(cè)后肢和對側(cè)后肢對輻射熱刺激無改變。而腫瘤組在早期,無統(tǒng)計學(xué)改變,但當(dāng)出現(xiàn)患側(cè)后足明顯不負(fù)重時,會出現(xiàn)明顯的的熱痛超敏期,持續(xù)2-3天。雖然不同的大鼠出現(xiàn)此期的時間不盡相同,但是幾乎所有有痛敏表現(xiàn)的大鼠均出現(xiàn)明顯的熱痛覺超敏期。過了熱超敏期,大鼠患側(cè)的PWL值在相同熱刺激下值有所上升,但仍比基礎(chǔ)值低,且有統(tǒng)計學(xué)差異。在腫瘤大鼠的終末期,90%的大鼠處在不吃不動的狀態(tài),反應(yīng)遲鈍,沒有正常鼠在新環(huán)境下的探索行為。這個時期測得的PWL值和基礎(chǔ)值無統(tǒng)計學(xué)差異。 5.3接種成功的腫瘤大鼠機械痛敏的結(jié)果: 機械痛敏的結(jié)果沒有熱痛敏那么顯著。Sham組和normal組在機械痛敏上沒有統(tǒng)計學(xué)差異。腫瘤組的機械痛敏出現(xiàn)的時間短,伴隨著熱痛超敏期,有統(tǒng)計學(xué)差異。但隨后的數(shù)據(jù)沒有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異。 6癌痛誘導(dǎo)脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞激活: 觀察顯示,normal組和sham組大鼠脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)正常,GFAP有低到中等程度的基礎(chǔ)表達(dá)。而腫瘤組,在早期,脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞活性無明顯變化,但在痛敏產(chǎn)生后,其表達(dá)較高,患側(cè)脊髓全層均呈現(xiàn)強烈的GFAP免疫陽性反應(yīng),以背角淺層為最高。 由以上結(jié)果得出如下結(jié)論: 1、用Walker256乳腺癌肉瘤細(xì)胞可以構(gòu)建成功大鼠脛骨骨癌痛模型; 2、由于個體免疫狀態(tài)和腫瘤細(xì)胞的不同,接種腫瘤細(xì)胞于脛骨骨髓腔后,患瘤率為67.3%,排除不明原因死亡,真正可以進行統(tǒng)計的為53.8%; 3、放射影象學(xué)和組織病理學(xué)數(shù)據(jù)顯示痛行為學(xué)的改變和正常骨結(jié)構(gòu)的破壞密切相關(guān),并且破壞程度和疼痛程度呈正相關(guān); 4、痛行為學(xué)評估認(rèn)為該模型有明顯的痛敏,早期即有非常明顯的熱痛敏,隨后痛敏隨著時間有改變。估計這個現(xiàn)象和下行易化有關(guān)。機械痛敏沒有熱痛敏那么明顯; 5、在痛敏出現(xiàn)時,患側(cè)脊髓星型膠質(zhì)細(xì)胞有明顯的增生肥大激活表現(xiàn)。
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【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R-332

【參考文獻(xiàn)】

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1 卓敏,G.F.Gebhart;中樞痛覺調(diào)制:下行性易化系統(tǒng)[J];生理科學(xué)進展;1993年03期

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本文編號：1487593