本文關鍵詞： 動物模型 骨癌痛 痛行為學評估 骨質破壞 大鼠 GFAP　出處：《第二軍醫(yī)大學》2007年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： 據國際癌癥研究中心報告,除皮膚癌,全球每年新增癌癥病例為1000萬,估計到2020年這個數字可能達到1500萬。全球范圍內,2005年因癌癥導致死亡的患者達到760萬。在美國,每4個死亡患者中有1個因為癌癥所致,并且癌癥已超過心血管疾病排在致死病因之首。雖然癌癥的發(fā)病率逐年上升,但是隨著癌癥早期診斷技術和綜合治療水平 的不斷進步,癌癥患者的存活時間也明顯延長。但是,約有三分之二的晚期癌癥患者會發(fā)生骨轉移,骨轉移也被認為是癌癥引起疼痛最常見的原因。隨著腫瘤細胞的生長,骨質的正常結構發(fā)生破壞,當侵犯骨輕度受力或體位改變時會出現劇烈疼痛,嚴重影響患者的睡眠和生活,這是導致晚期腫瘤患者生存質量下降的主要原因。 由于長期以來缺乏合適的動物模型,無法對癌痛的產生機制進行研究。近年來陸續(xù)出現的小鼠股骨、跟骨、肱骨和大鼠脛骨癌癥痛模型,極大地推動了癌癥痛的基礎研究。1999年,美國科研人員率先用同品系的溶骨纖維肉瘤細胞種植在小鼠股骨腔內,成功構建了首例小鼠骨癌痛模型。2002年,英國科研人員用MRMT-1大鼠乳腺癌細胞成功構建成首例大鼠脛骨骨癌痛模型。2005年,美國科研人員用大鼠前列腺癌細胞構建成功大鼠脛骨骨癌痛模型。由于上述腫瘤細胞在國內無法得到,本課題試了好幾種品系的大鼠腫瘤細胞,最終用大鼠的Walker256乳腺癌肉瘤細胞構建成大鼠脛骨骨癌痛模型。并對接種后動物的致瘤率和痛敏行為進行了評估,對其骨結構的破壞進行了影象學和組織病理切片分析,還對患側脊髓切片星形膠質細胞的激活進行了免疫組化的分析。結果如下: 1.手術后大鼠的患瘤率: 接種Walker256腫瘤細胞的大鼠共52只,其中觀察到有腫瘤細胞生長的為35只,患瘤率為67.3 %。有7只大鼠在實驗過程中出現不可預見性的突然死亡,不能進行實驗觀察,最后有痛行為學表現且進行數據統(tǒng)計的大鼠共28只。占總數的53.8 %。 2.接種成功的腫瘤大鼠的生長狀態(tài)和腫瘤生長特征: 這28只大鼠在接受接種手術后的前2周生長狀態(tài)良好。85%的大鼠從PID15-18天開始,陸續(xù)出現不愿讓患側后肢負重的情況,表現為患肢足外翻現象。還有15%的大鼠出現這種情況較晚,在PID的19-21天出現。盡管每只大鼠出現痛行為學改變的時間不同,但一旦出現,其以后的痛行為表現都比較接近。大鼠出現足外翻現象后,不久接種部位的組織出現腫脹,其后4-6天出現輕度惡液質,接下來惡液質明顯加重,最終因惡液質嚴重全身衰竭死亡或盆腔、腹腔廣泛轉移而死亡。90%的大鼠從出現痛敏到死亡的時間為6-9天,10%的為10-12天。 3接種成功的腫瘤大鼠放射影像學結果: 在PID的第5天,腫瘤組和sham組的X光片沒有觀察到脛骨骨質有任何破壞的表現。在第17天,sham組的評分為0分,腫瘤組的平均評分為1.5,在PID 26天時,sham組的評分仍為0,腫瘤組的平均評分為4。 同一只大鼠動態(tài)的比較了其在PID5、17、26天的影像學差異,同時在PID26天,還進行了接種側和對側的骨質的影像學比較。在第5天,骨質沒破壞,在PID17天,腫瘤細胞向外侵蝕,出現明顯的骨皮質破壞征象。隨著腫脹的加劇,到PID26天,影像學資料顯示整個骨結構發(fā)生明顯改變和破壞。 4接種成功的腫瘤大鼠接種側脛骨腫瘤組織病理學結果: Sham組的接種側脛骨結構正常。而腫瘤組HE染色見腫瘤細胞充滿骨髓腔,正常骨結構破壞嚴重。 5接種成功的腫瘤大鼠痛行為學評估結果: 5.1大鼠正常走動痛行為學評分結果: 正常組和sham組的大鼠在觀察期中,手術側后肢的走動痛行為評分無變化,都為0分。而腫瘤組大鼠隨著腫瘤細胞的生長,局部組織腫脹明顯,痛行為學評分越來越高。 5.2接種成功的腫瘤大鼠熱痛敏結果: 正常組和sham組的大鼠在觀察期中,手術側后肢和對側后肢對輻射熱刺激無改變。而腫瘤組在早期,無統(tǒng)計學改變,但當出現患側后足明顯不負重時,會出現明顯的的熱痛超敏期,持續(xù)2-3天。雖然不同的大鼠出現此期的時間不盡相同,但是幾乎所有有痛敏表現的大鼠均出現明顯的熱痛覺超敏期。過了熱超敏期,大鼠患側的PWL值在相同熱刺激下值有所上升,但仍比基礎值低,且有統(tǒng)計學差異。在腫瘤大鼠的終末期,90%的大鼠處在不吃不動的狀態(tài),反應遲鈍,沒有正常鼠在新環(huán)境下的探索行為。這個時期測得的PWL值和基礎值無統(tǒng)計學差異。 5.3接種成功的腫瘤大鼠機械痛敏的結果: 機械痛敏的結果沒有熱痛敏那么顯著。Sham組和normal組在機械痛敏上沒有統(tǒng)計學差異。腫瘤組的機械痛敏出現的時間短,伴隨著熱痛超敏期,有統(tǒng)計學差異。但隨后的數據沒有明顯的統(tǒng)計學差異。 6癌痛誘導脊髓星形膠質細胞激活: 觀察顯示,normal組和sham組大鼠脊髓背角星形膠質細胞形態(tài)正常,GFAP有低到中等程度的基礎表達。而腫瘤組,在早期,脊髓星形膠質細胞活性無明顯變化,但在痛敏產生后,其表達較高,患側脊髓全層均呈現強烈的GFAP免疫陽性反應,以背角淺層為最高。 由以上結果得出如下結論: 1、用Walker256乳腺癌肉瘤細胞可以構建成功大鼠脛骨骨癌痛模型; 2、由于個體免疫狀態(tài)和腫瘤細胞的不同,接種腫瘤細胞于脛骨骨髓腔后,患瘤率為67.3%,排除不明原因死亡,真正可以進行統(tǒng)計的為53.8%; 3、放射影象學和組織病理學數據顯示痛行為學的改變和正常骨結構的破壞密切相關,并且破壞程度和疼痛程度呈正相關; 4、痛行為學評估認為該模型有明顯的痛敏,早期即有非常明顯的熱痛敏,隨后痛敏隨著時間有改變。估計這個現象和下行易化有關。機械痛敏沒有熱痛敏那么明顯; 5、在痛敏出現時,患側脊髓星型膠質細胞有明顯的增生肥大激活表現。
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【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R-332

【參考文獻】

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1 卓敏,G.F.Gebhart;中樞痛覺調制:下行性易化系統(tǒng)[J];生理科學進展;1993年03期

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本文編號：1487593