本文關(guān)鍵詞： 結(jié)核分支桿菌 熱休克蛋白65 MUC1 治療性疫苗　出處：《中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2005年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：MUC1是Mucins粘蛋白中的一種,存在于正常腺管上皮及其來源的腫瘤細(xì)胞表面。它是一種大分子的糖蛋白,由多肽核芯和側(cè)枝糖鏈構(gòu)成,其多肽核芯的胞外段含有20個(gè)氨基酸的串聯(lián)重復(fù)序列(Variable numbers tandem repeats,VNTRs)。在多種腫瘤中,MUC1異常表達(dá),主要表現(xiàn)為表達(dá)量增高,細(xì)胞表面極性分布的改變和結(jié)構(gòu)改變等,成為免疫細(xì)胞攻擊的靶點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)MUC1核芯肽的PDTRP表位不僅能被MUC1抗體識(shí)別,而且也能被CTL細(xì)胞識(shí)別和殺傷,且不受MHC的限制。由于MUC1具有上述特點(diǎn),成為理想的抗腫瘤靶分子。本課題的目的即是開發(fā)一種基于熱休克蛋白的針對(duì)非小細(xì)胞肺癌(Non small cell lung cance,NSCLC)的MUC1治療性疫苗。 近年來發(fā)現(xiàn),熱休克蛋白—多肽復(fù)合物可通過受體(CD91)介導(dǎo)的內(nèi)吞作用被巨噬細(xì)胞吞噬,然后經(jīng)過蛋白酶體降解,最終進(jìn)入內(nèi)源性抗原遞呈途徑,從而激活細(xì)胞免疫。我們選擇結(jié)核分支桿菌熱休克蛋白65(HSP65)與鼠BP24或人BP25基因融合來作為腫瘤的治療性疫苗。它可以把BP24或BP25蛋白呈遞給MHC-I抗原呈遞途徑,進(jìn)而激活細(xì)胞免疫。 我們通過克隆得到鼠BP24和人BP25基因,構(gòu)建了HSP65-BP24-Ztag和HSP65-BP25-Ztag的pET28a表達(dá)載體,并在大腸桿菌中得到了高效表達(dá)。目的蛋白經(jīng)硫酸銨沉淀、陽離子層析、疏水層析獲得了純度超過90%的樣品。經(jīng)純化的蛋白作為非小細(xì)胞肺癌的治療性疫苗。應(yīng)用HSP65-BP24-Ztag融合蛋白在小鼠Lewis肺癌細(xì)胞模型上進(jìn)行免疫治療和預(yù)防試驗(yàn)。結(jié)果證明,預(yù)防免疫可以使小鼠成瘤小于對(duì)照組;治療免疫可抑制小鼠腫瘤生長,生存期延長。
[Abstract]:MUC1 is one of Mucins mucin , which is present in the surface of tumor cells of normal glandular epithelium and its origin . It is a large molecule glycoprotein composed of polypeptide core and side branch sugar chain . The extracellular portion of the polypeptide core contains 20 amino acids in tandem repeats ( Variable numbers tandem repeats , VNTR ) . MUC1 expression in various tumors is mainly expressed as an increase in the expression level , changes in the polarity distribution of the surface of the cell and structural changes , etc . , and becomes a target for immune cell attacks . In recent years , heat shock protein - polypeptide complexes can be phagocytosed by macrophages by endocytosis mediated by receptor ( CD91 ) and then degraded by proteasome to finally enter endogenous antigen presenting pathway , thus activating cell immunity . We chose Mycobacterium tuberculosis heat shock protein 65 ( HSP65 ) to fuse with murine BP24 or human BP25 gene as a therapeutic vaccine for tumors . The expression vector pET28a of HSP65 - BP24 - Ztag and HSP65 - BP25 - Ztag was constructed by cloning mouse BP24 and human BP25 gene . The purified protein was used as a therapeutic vaccine for non - small cell lung cancer . The purified protein was used as a therapeutic vaccine for non - small cell lung cancer .

【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R392.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 魏濱,谷淑燕,李燕,郭斐,阮力;表達(dá)EB病毒主要膜蛋白gp350/220的非復(fù)制型重組痘苗病毒的構(gòu)建[J];病毒學(xué)報(bào);2001年01期

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本文編號(hào)：1483779