本文關(guān)鍵詞： 臍帶 間充質(zhì)干細胞 胰島素分泌細胞 分化 誘導　出處：《汕頭大學》2007年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： 目的： 探討人臍帶華爾通膠質(zhì)來源的間充質(zhì)干細胞(MSCs)分化為胰島素分泌細胞的可能性，為1型糖尿病的細胞移植治療提供理論依據(jù)和新的細胞來源。 材料和方法： 從足月剖宮產(chǎn)的新生兒臍帶華爾通膠質(zhì)中分離培養(yǎng)出間充質(zhì)干細胞(MSCs)，用含尼克酰胺和β巰基乙醇的低糖DMEM培養(yǎng)基(L-DMEM)預誘導后，，以含尼克酰胺和β巰基乙醇的高糖DMEM培養(yǎng)基(H-DMEM)誘導其向胰島素分泌細胞分化，應用免疫細胞化學檢測胰島素的表達，以雙硫腙染色鑒定胰島β細胞，并用放射免疫法(RIA)檢測誘導后細胞培養(yǎng)液中的胰島素水平，所有檢測均以未誘導細胞作為實驗對照。 結(jié)果： 從人臍帶華爾通膠分離、培養(yǎng)的間充質(zhì)干細胞，可貼壁生長，體外生長形態(tài)類似于成纖維細胞，可以維持未分化狀態(tài)穩(wěn)定增殖，體外增殖可超過10代。尼克酰胺和β巰基乙醇聯(lián)合誘導可使人臍帶間充質(zhì)干細胞(MSCs)向胰島素分泌細胞分化，分化的細胞表達胰島β細胞的標記胰島素(insulin)。雙硫腙染色發(fā)現(xiàn)臍帶華爾通膠來源的間充質(zhì)干細胞(MSCs)經(jīng)尼克酰胺和β巰基乙醇誘導后細胞內(nèi)鋅離子增加。通過Insulin放射免疫法(RIA)檢測誘導前后細胞培養(yǎng)液中胰島素的濃度，發(fā)現(xiàn)實驗組和對照組胰島素水平分別為6.63mIU／L和3.39mIU／L，差別具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。 結(jié)論： 人臍帶華爾通膠中含有豐富的間充質(zhì)干細胞(MSCs)，易于培養(yǎng)擴增。人臍帶間充質(zhì)干細胞(MSCs)經(jīng)尼克酰胺和β巰基乙醇聯(lián)合誘導后可表達胰島β細胞的表面標記，可以增加細胞中的鋅離子含量使之具備胰島β細胞的特點，誘導后的細胞以也可以分泌胰島素。本研究初步證明，用尼克酰胺和β巰基乙醇可以誘導人臍帶華爾通膠來源的間充質(zhì)干細胞(MSCs)成為胰島素分泌細胞，從而為1型糖尿病細胞移植治療提供新的細胞來源。
[Abstract]:Objective: To explore the possibility of differentiation of mesenchymal stem cells derived from human umbilical cord Walton glial mesenchymal stem cells into insulin-secreting cells and to provide a theoretical basis and a new cell source for the treatment of type 1 diabetes mellitus. Materials and methods: Mesenchymal stem cells (MSCs) were isolated from the umbilical cord of newborns undergoing caesarean section. L-DMEM was preinduced in low-sugar DMEM medium containing nicotinamide and 尾 -mercaptoethanol. High glucose DMEM medium containing nicotinamide and 尾 -mercaptoethanol was used to induce the differentiation into insulin-secreting cells, and the expression of insulin was detected by immunocytochemistry. Islet 尾 cells were identified by dithizone staining and insulin levels were detected by radioimmunoassay (RIA). Uninduced cells were used as experimental controls. Results: The mesenchymal stem cells isolated from the human umbilical cord and cultured in vitro can grow on the wall, and the growth morphology in vitro is similar to that of fibroblasts, which can maintain stable proliferation in undifferentiated state. The combination of nicotinamide and 尾 -mercaptoethanol could induce the differentiation of human umbilical cord mesenchymal stem cells into insulin-secreting cells. Differentiated cells expressed islet 尾 -labeled insulin insulin.Dithizone staining found mesenchymal stem cells derived from umbilical cord Walton glue mesenchymal stem cells (MSCs). The concentration of insulin in the culture medium was detected by Insulin radioimmunoassay before and after the induction of nicotinamide and 尾 mercaptoethanol. It was found that the insulin levels in the experimental group and the control group were 6.63mIUP / L and 3.39mIUP / L, respectively, and the difference was statistically significant (P < 0.05). Conclusion: There are abundant mesenchymal stem cells (MSCs) in human umbilical cord Walton glue. Human umbilical cord mesenchymal stem cells (MSCs) were induced by nicotinamide and 尾 mercaptoethanol to express the surface markers of islet 尾 cells. It can increase the content of zinc ions in the cells to make them possess the characteristics of islet 尾 cells, and the induced cells can also secrete insulin. Nicotinamide and 尾 -mercaptoethanol can induce mesenchymal stem cells (MSCs) from human umbilical cord warton-glue-derived mesenchymal stem cells (MSCs) to become insulin-secreting cells, thus providing a new cell source for the transplantation of type 1 diabetic cells.
【學位授予單位】：汕頭大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R587.1;R329

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本文編號：1480355