本文關(guān)鍵詞： 弓形蟲 致密顆粒蛋白 融合蛋白 蛋白純化　出處：《中國(guó)病原生物學(xué)雜志》2014年03期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的構(gòu)建弓形蟲致密顆粒蛋白7(GRA7)基因重組質(zhì)粒并在大腸埃希菌中進(jìn)行表達(dá)。方法根據(jù)GRA7基因序列設(shè)計(jì)合成引物,用PCR方法從弓形蟲基因組DNA中擴(kuò)增GRA7基因片段,再克隆到pGEX-4T載體中,重組質(zhì)粒經(jīng)酶切、PCR鑒定并測(cè)序;重組質(zhì)粒在大腸埃希菌BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE分析并純化,Western blot分析其反應(yīng)原性。結(jié)果 GRA7基因PCR產(chǎn)物大小約為714bp,與預(yù)期相符;重組質(zhì)粒經(jīng)酶切及PCR鑒定構(gòu)建成功,測(cè)序結(jié)果與已知序列吻合;重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后表達(dá)的GRA7融合蛋白分子質(zhì)量單位約為53ku,該蛋白可被His標(biāo)簽抗體識(shí)別。結(jié)論成功重組了弓形蟲GRA7基因,表達(dá)蛋白具有反應(yīng)原性,為弓形蟲診斷抗原試劑盒的制備奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to construct the Toxoplasma gondii dense granule protein 7 (GRA7) gene recombinant plasmid and expressed in Escherichia coli. Methods according to the design and synthesis of primers of GRA7 gene sequence, GRA7 gene was amplified from the genomic DNA of Toxoplasma gondii by PCR method, then cloned into pGEX-4T vector. The recombinant plasmid was verified by enzyme digestion, PCR identification and sequencing; the recombinant plasmid in Escherichia coli BL21 (DE3) expression induced by SDS-PAGE, expression analysis and purification, analysis of its reactionogenicity Western blot GRA7. The PCR product was about 714bp in size, in line with expectations; the recombinant plasmid was identified by enzyme digestion and PCR sequencing was constructed successfully, results are consistent with the known sequence of the recombinant plasmid; transformation of bacteria induced by IPTG expression of GRA7 fusion protein molecular weight is about 53ku, the protein was identified by anti His tag antibody. Conclusion recombinant Toxoplasma gondii GRA7 gene expression protein reactionogenicity, It lays the foundation for the preparation of the diagnostic antigen kit for Toxoplasma gondii.

【作者單位】： 山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院 山東省寄生蟲病防治研究所;濟(jì)南大學(xué) 山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院;山東省濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院;
【基金】：山東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.2009C03083) 山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.2011HW049)
【分類號(hào)】：R382
【正文快照】： 弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種重要的機(jī)會(huì)性致病原蟲,可寄生在人和許多動(dòng)物有核細(xì)胞中,存活于納蟲泡(parasitophorous vaeuole,pV)的特化空泡內(nèi)。PV內(nèi)的致密顆粒細(xì)胞器(densegranule organelles)是一種分泌小泡,在修飾調(diào)節(jié)寄生蟲的納蟲泡結(jié)構(gòu)上起著重要作用,并且與蟲體在細(xì)

【參考文獻(xiàn)】

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1 陳U

本文編號(hào)：1469548