本文關(guān)鍵詞： DNA聚合酶β 轉(zhuǎn)染 NIH3T3細(xì)胞 p53 交鏈孢霉酚　出處：《鄭州大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景及目的： DNA聚合酶β(DNA polymerase β，DNA po1β)是參與體內(nèi)堿基切除修復(fù)(base excision repair，BER)過程的重要的損傷修復(fù)酶，其功能的正常發(fā)揮對維持細(xì)胞的正常進(jìn)程和遺傳的穩(wěn)定性具有重要作用。DNA po1β主要修復(fù)自由基氧化或胞嘧啶和甲基胞嘧啶脫氨基等過程產(chǎn)生的DNA損傷，也能解決外源性因素如亞硝胺類產(chǎn)生的烷基化堿基，在DNA和RNA水平上進(jìn)行損傷修復(fù)。正常細(xì)胞中，DNApo1β在整個細(xì)胞周期中都是低表達(dá)的，由于DNA po1β缺少3'-5'校讀功能，是所有聚合酶中保真度最低的酶。高表達(dá)的DNA po1β可能擾亂細(xì)胞內(nèi)的各種聚合酶類功能，參與其它DNA合成過程，并可導(dǎo)致NER過程的易錯合成，因此會引起基因組的不穩(wěn)定性，，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)，在多種腫瘤細(xì)胞和癌旁組織中發(fā)現(xiàn)DNA po1β基因突變及DNA po1β蛋白高表達(dá)。p53基因是最具代表性的抑癌基因，野生型p53蛋白在維持細(xì)胞正常生長、抑制惡性增殖中起著重要作用。交鏈孢霉酚(alternariol，AOH)是河南林州市食管癌高發(fā)區(qū)比較常見的一種霉菌毒素，能通過多種機(jī)制引起細(xì)胞癌變。本研究建立了高表達(dá)野生型DNA po1β的細(xì)胞系，并用AOH損傷細(xì)胞后，間接研究DNA po1β的損傷修復(fù)作用及與抑癌基因p53的關(guān)系，并為食管癌的病因?qū)W提供一定的資料。 方法： 將已構(gòu)建的含野生型DNA po1β的綠色熒光真核表達(dá)載體pEGFP-C3-po1β用脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染NIH3T3細(xì)胞，經(jīng)G418篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系，通過熒光倒置顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染基因在細(xì)胞中的表達(dá)。經(jīng)交鏈孢霉酚作用48小時后，流
[Abstract]:Background and purpose: DNA polymerase 尾 -DNA polymerase 尾 -DNA po1 尾 is involved in base excision repair in vivo. Excision repairBERs are important damage repair enzymes in the process. Its normal function plays an important role in maintaining the normal progress of cells and genetic stability. Po1 尾 mainly repairs DNA damage caused by free radical oxidation or cytosine and methyl cytosine deaminination. It can also solve exogenous factors such as alkylation bases produced by nitrosamines and repair the damage at the level of DNA and RNA. The expression of po1 尾 in normal cells is low in the whole cell cycle. DNA po1 尾 is the least fidelity enzyme of all polymerase due to its lack of 3- 5'reading function. The high expression of DNA po1 尾 may disturb the functions of various polymerase types in cells. Participate in other DNA synthesis processes, and can lead to the error-prone synthesis of NER process, thus causing genomic instability, leading to tumorigenesis. The mutation of DNA po1 尾 gene and the overexpression of DNA po1 尾 protein. P53 gene are the most representative tumor suppressor genes in various tumor cells and adjacent tissues. Wild type p53 protein plays an important role in maintaining normal cell growth and inhibiting malignant proliferation. AOH) is a common mycotoxin in the high incidence area of esophageal cancer in Linzhou City, Henan Province, which can cause cell carcinogenesis through many mechanisms. In this study, a cell line with high expression of wild-type DNA po1 尾 was established. The damage and repair of DNA po1 尾 and the relationship between DNA po1 尾 and tumor suppressor gene p53 were studied indirectly, and some data were provided for the etiology of esophageal cancer. Methods: The constructed green fluorescent eukaryotic expression vector pEGFP-C3-po1 尾 containing wild-type DNA po1 尾 was transfected into NIH3T3 cells by liposome mediated transfection. The stable transfected cell lines were obtained by G418 screening, and the expression of transfected genes in the cells was observed by fluorescence inverted microscope. After 48 hours of treatment with Alternazol, the expression of transfected cells was observed.
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R363

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本文編號：1464258