本文關(guān)鍵詞： RNA 干擾 端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶 p53 凋亡　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2005年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：端粒酶是一種核蛋白復(fù)合物,具有維持和延長(zhǎng)真核細(xì)胞染色體末端端粒結(jié)構(gòu)、調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖潛能和壽命的功能。由于在 90%的人惡性腫瘤細(xì)胞中涉及端粒酶的活化而在絕大多數(shù)正常體細(xì)胞中檢測(cè)不到端粒酶的活性,故近來(lái)端粒酶已成為頗具吸引力的腫瘤治療的分子靶標(biāo)。 具有活性的端粒酶由一個(gè) RNA 亞基和幾個(gè)蛋白組份構(gòu)成。RNA 亞基(human telomerase RNA, hTR)含有端粒 DNA 復(fù)制的模板。蛋白組分包括具有催化活性的端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT ) 和 端 粒 酶 相 關(guān) 蛋 白 1 ( human telomerase-associated protein 1,hTEP1)。hTR 和 hTEP1 在很多正常人組織中都有表達(dá),而 hTERT 則表達(dá)于細(xì)胞永生化過(guò)程中具有端粒酶活性的細(xì)胞中,在細(xì)胞的癌變過(guò)程中起關(guān)鍵作用。近來(lái),越來(lái)越多的研究表明,hTERT 的功能除了維持端粒的結(jié)構(gòu)外,還可以通過(guò)與其他分子相互作用而發(fā)揮不同的生物學(xué)功能。 為進(jìn)一步研究 hTERT 的新的生物學(xué)功能,發(fā)現(xiàn)與之相互作用的相關(guān)分子,我們應(yīng)用 RNA 干擾(RNA interference,RNAi)技術(shù)抑制 HepG2細(xì)胞 hTERT 的表達(dá),觀察 HepG2 細(xì)胞的生物學(xué)特性如細(xì)胞凋亡,生長(zhǎng)速度的改變;檢測(cè)了凋亡通路中幾個(gè)重要蛋白的表達(dá)水平以探討 hTERT抑制誘導(dǎo)凋亡發(fā)生的機(jī)制;同時(shí)研究了 p53 的表達(dá)對(duì) hTERT 的調(diào)節(jié)作用,本文的主要內(nèi)容如下: 第一部分 靶向 hTERT siRNA 有效序列的篩選 采用隨機(jī)設(shè)計(jì)方法和全長(zhǎng)基因?qū)ぐ屑夹g(shù)設(shè)計(jì)針對(duì) hTERT 轉(zhuǎn)錄體編碼區(qū)和非編碼區(qū)的 5 條雙鏈 DNA 作為合成 siRNA 的模板序列,在體外
[Abstract]:Telomerase is a nuclear protein complex that maintains and extends the telomere structure at the end of the chromosome of eukaryotic cells. The function of regulating cell proliferation potential and longevity. Telomerase activity is not detected in most normal somatic cells because telomerase activation is involved in 90% of human malignant tumor cells. Telomerase has recently become an attractive molecular target for cancer therapy. The active telomerase consists of a RNA subunit and several protein components. HTR) contains a template for telomere DNA replication. Protein components include telomerase reverse transcriptase (telomerase reverse transcriptase) with catalytic activity. Human telomerase reverse transcriptase. HTERT and human telomerase-associated protein 1. HTEP1).hTR and hTEP1 are expressed in many normal human tissues, while hTERT is expressed in cells with telomerase activity during immortalization. Recently, more and more studies have shown that hTERT functions in addition to maintaining the structure of telomere. They can also play different biological functions by interacting with other molecules. In order to further study the new biological function of hTERT and find the interacting molecules, we used RNA interference RNA interference. RNAi technique inhibited the expression of hTERT in HepG2 cells and observed the biological characteristics of HepG2 cells such as apoptosis and the change of growth rate. The expression levels of several important proteins in apoptotic pathway were detected to investigate the mechanism of hTERT inhibition induced apoptosis. At the same time, the regulation of p53 expression on hTERT was studied. The main contents of this paper are as follows: Part one: screening of effective sequences targeting hTERT siRNA A randomized design method and a full-length gene targeting technique were used to design five double-stranded DNA targeting the coding and non-coding regions of hTERT transcripts as template sequences for the synthesis of siRNA. In vitro
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類(lèi)號(hào)】：R346

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊英,李伍舉,丁雨,王升啟;反義寡核苷酸聯(lián)用對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞增殖的抑制作用[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2004年08期

2 夏云,林汝仙,鄭素軍,張敏麗,王升啟;靶向端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)RNAi載體的構(gòu)建及活性評(píng)價(jià)[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2004年12期

3 楊秉呼,孫偶君,張敏麗,王升啟;毛細(xì)管凝膠電泳法測(cè)定硫代寡核苷酸藥物癌泰得的含量[J];色譜;2004年03期

4 王秀中;王詩(shī)鴻;宋海峰;王清清;王升啟;;反義寡核苷酸藥物癌泰得及其代謝產(chǎn)物的獼猴體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2011年11期

5 ;Inhibition of tumor growth and metastasis with antisense oligonucleotides (Cantide) targeting hTERT in an in situ human hepatocellular carcinoma model[J];Acta Pharmacologica Sinica;2005年06期

6 張嵬,梁乾德,王曉博,丁雨,林汝仙,王升啟;硫代反義寡核苷酸藥物癌泰得純化工藝的建立[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;2005年15期

7 楊英,杜清友,王升啟;反義核酸協(xié)同化療藥物抑制肝癌細(xì)胞的增殖[J];中華肝臟病雜志;2003年12期

8 ;Antitumor mechanism of antisense cantide targeting human telomerase reverse transcriptase[J];World Journal of Gastroenterology;2003年09期

9 ;Combined effects of Cantide and chemotherapeutic drugs on inhibition of tumor cells' growth in vitro and in vivo[J];World Journal of Gastroenterology;2005年16期

10 ;Effective siRNA targets screening for human telomerase reverse transcriptase[J];World Journal of Gastroenterology;2005年16期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 楊秉呼;硫代反義寡核苷酸癌泰得的藥代動(dòng)力學(xué)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 楊英;反義寡核苷酸聯(lián)合用藥的抗腫瘤研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

2 張嵬;硫代反義寡核苷酸藥物癌泰得的臨床前研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

3 黃光勝;半乳糖受體介導(dǎo)的PCNA反義核酸對(duì)肝癌Bel-7402細(xì)胞的作用[D];暨南大學(xué);2005年

4 王秀中;反義寡核苷酸藥物癌泰得在獼猴體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2010年

，

本文編號(hào)：1448785