本文關(guān)鍵詞：大鼠白細(xì)胞介素-6重組腺病毒構(gòu)建及初步鑒定　出處：《免疫學(xué)雜志》2014年02期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 白細(xì)胞介素- 重組腺病毒 PC細(xì)胞 STAT

【摘要】：目的構(gòu)建攜帶大鼠白細(xì)胞介素-6(interleukin 6,IL-6)基因的重組腺病毒,為研究IL-6在神經(jīng)損傷中的生物學(xué)作用提供技術(shù)手段。方法體外擴(kuò)增大鼠IL-6基因,定向克隆到pAdTrace-TOX腺病毒穿梭質(zhì)粒中,構(gòu)建重組pAdTrace-IL-6過表達(dá)腺病毒質(zhì)粒,并與骨架質(zhì)粒pAd-Easy-1在BJ5183菌中發(fā)生同源重組,獲得pAd-IL-6腺病毒載體,經(jīng)PacⅠ酶切后轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞進(jìn)行包裝擴(kuò)增。通過Ad-IL-6腺病毒感染PC12細(xì)胞,Real-time PCR和Western blot檢測(cè)PC12細(xì)胞中IL-6及STAT3的表達(dá)。結(jié)果 PCR電泳及酶切、測(cè)序鑒定均證實(shí)目的基因IL-6正確克隆至腺病毒載體中,所構(gòu)建的腺病毒Ad-IL-6可感染PC12細(xì)胞,有效增加IL-6的表達(dá)水平,促進(jìn)IL-6信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白磷酸化STAT3的表達(dá)。結(jié)論成功構(gòu)建攜帶IL-6的重組腺病毒載體,該載體可顯著增高PC12細(xì)胞中IL-6基因和蛋白表達(dá)水平,并上調(diào)IL-6相關(guān)信號(hào)通路。
[Abstract]:Objective to construct rat interleukin -6 (interleukin 6, IL-6) recombinant adenovirus, provide technical means for the biological role of IL-6 in nerve injury. Methods rat IL-6 gene amplification in vitro, cloned into Adenovirus Shuttle Plasmid pAdTrace-TOX, the recombinant adenovirus pAdTrace-IL-6 overexpression plasmid, and homologous recombination with the skeleton plasmid pAd-Easy-1 in BJ5183 bacteria, pAd-IL-6 adenovirus vector by Pac I enzyme digestion and transfected into HEK293 cells for packaging amplification. PC12 cells infected by Ad-IL-6 adenovirus, the expression of IL-6 and STAT3 Real-time PCR and Western PC12 cells to detect blot. Results of PCR electrophoresis and enzyme digestion and sequencing were the results showed that the target gene IL-6 cloned into adenovirus vector, adenovirus Ad-IL-6 constructed can infect PC12 cells, increase the expression level of IL-6, promote IL-6 signaling pathway The expression of STAT3 was phosphorylated by key proteins. Conclusion the recombinant adenovirus vector carrying IL-6 can be successfully constructed, which can significantly increase the IL-6 gene and protein expression level in PC12 cells, and up regulate IL-6 related signaling pathways.

【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院營養(yǎng)研究中心
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81271385) 重慶市衛(wèi)生局重點(diǎn)項(xiàng)目(渝衛(wèi)2009-1-41)
【分類號(hào)】：R392-33
【正文快照】： 白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)是一種由184個(gè)氨基酸組成的分泌型蛋白,廣泛存在于人體內(nèi),T細(xì)胞、B細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞及部分腫瘤細(xì)胞等都可分泌IL-6[1-2]。中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷過程中,IL-6參與腦內(nèi)巨噬細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞等的激活,產(chǎn)生免疫反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn),

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 張峗;畢楊;龔敏;江偉;魏小平;李廷玉;陳潔;;大鼠siTLR4重組腺病毒載體的構(gòu)建及功能鑒定[J];免疫學(xué)雜志;2012年09期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李鳳蓮;劉景旭;侯亞梅;杜麗新;伊敬東;杜文君;田斌;;他汀類藥物對(duì)青年急性腦梗死患者血清IL-10、IL-17含量影響研究[J];國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2013年17期

2 劉莉;劉曉川;;依達(dá)拉奉對(duì)急性腦梗死患者療效及血清炎性細(xì)胞因子水平的影響[J];中國醫(yī)藥科學(xué);2013年22期

3 季輝;李俐濤;溫雅;苗江永;祝春華;牛小蕓;張祥建;;阿托伐他汀對(duì)進(jìn)展性腦卒中治療作用的探討[J];腦與神經(jīng)疾病雜志;2013年06期

4 余瑩瑩;鄭建瓊;周龍;;頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度與血清細(xì)胞因子IL-6、IL-18水平的相關(guān)性研究[J];中國民族民間醫(yī)藥;2013年23期

5 呂曉強(qiáng);盧志剛;;腦安膠囊對(duì)急性腦梗死合并慢性肺心病患者細(xì)胞因子的影響[J];臨床肺科雜志;2014年04期

6 童亮明;;丹紅注射液聯(lián)合腦心通對(duì)60例急性腦梗塞患者血漿炎性因子影響的研究[J];中國民族民間醫(yī)藥;2014年01期

7 方朝暉;趙進(jìn)東;王金萍;牛云飛;舒儀瓊;袁愛紅;吳倩;范青云;劉劍;鮑陶陶;羅源;陸瑞敏;郭呈林;江婷;崔李群;楊慧;;丹蛭降糖膠囊聯(lián)合阿托伐他汀鈣對(duì)糖尿病不伴有高血壓病患者頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度的影響[J];世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化;2013年05期

8 劉彩艷;趙自葉;鄭娟;段樹燕;郭懷祖;徐進(jìn);王皓;;重組可溶性人IL-6的原核表達(dá)純化和活性鑒定[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2013年06期

9 Shuying Dong;Xuhui Tong;Jun Li;Cheng Huang;Chengmu Hu;Hao Jiao;Yuchen Gu;;Total flavonoid of Litsea coreana leve exerts anti-oxidative effects and alleviates focal cerebral ischemia/reperfusion injury[J];Neural Regeneration Research;2013年34期

10 Xiaojie Liu;Zhigang Mei;Jingping Qian;Yongbao Zeng;Mingzhi Wang;;Puerarin partly counteracts the inflammatory response after cerebral ischemia/reperfusion via activating the cholinergic anti-inflammatory pathway[J];Neural Regeneration Research;2013年34期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 黃玲;氟非尼酮抗炎作用機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2013年

2 張霞燕;半胱氨酰白三烯CysLT_2受體通過激活小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)神經(jīng)元缺血性損傷[D];浙江大學(xué);2013年

3 喻鵬久;白花前胡素類化合物抗炎活性以及分子作用機(jī)制的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 劉蕾;交叉電項(xiàng)針治療腦梗死后氣管切開插管患者的臨床療效觀察[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2013年

2 衣洋;阿托伐他汀預(yù)處理對(duì)SD大鼠局部腦缺血再灌注損傷后IL-6、IL-1β、c-fos表達(dá)的影響[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

3 劉敏;miR-23a，，miR-24-2和miR-27a在炎癥反應(yīng)中的表達(dá)及其在LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞活化中的調(diào)節(jié)機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

4 張麗麗;活血開竅湯對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷NO含量及細(xì)胞凋亡的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

5 陳捷;進(jìn)展性腦梗死的相關(guān)危險(xiǎn)因素的臨床分析[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

6 楊鵬;魯西南地區(qū)青年缺血性腦卒中腦血管狹窄分布特征[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

7 張楠;步長(zhǎng)腦心通膠囊聯(lián)合丹紅注射液治療對(duì)急性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及部分機(jī)制[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

8 林鎮(zhèn)洲;不伴感染的急性卒中患者72小時(shí)內(nèi)降鈣素原的動(dòng)態(tài)變化[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

9 羅福全;參附注射液預(yù)先給藥對(duì)內(nèi)毒素血癥大鼠腸道的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

10 李婷婷;抗ApoA1抗體IgG與腦梗死相關(guān)性研究[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2013年

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 周國慶,周孝達(dá),李寧麗,沈佰華;多巴胺對(duì)大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞凋亡的影響[J];中華老年醫(yī)學(xué)雜志;1998年04期

2 石麗君,王春安,陳宜張;皮質(zhì)酮快速抑制PC12細(xì)胞乙酰膽堿誘發(fā)電流影響及機(jī)制探討[J];中國應(yīng)用生理學(xué)雜志;1999年02期

3 段宇,劉超,蔣須勤,覃又文,劉翠萍,武曉泓;白細(xì)胞介素-6和γ-干擾素基因在甲狀腺組織中表達(dá)的研究[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2000年02期

4 許文凱!450003鄭州,張炳勇!450003鄭州;內(nèi)科危重病患者腫瘤壞死因子和白細(xì)胞介素-6水平的研究[J];臨床薈萃;2001年19期

5 曲喜英,梅寒芳,祝其鋒;H_2O_2對(duì)PC12細(xì)胞par-4和NF-κBP65基因表達(dá)的影響[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2004年04期

6 韋葉生,汪明,覃志堅(jiān),張良,黃燕,唐任光;白細(xì)胞介素-6基因啟動(dòng)子-174G/C單核苷酸多態(tài)性的研究[J];右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2004年06期

7 王成龍,邵寧生,張明,楊光,張達(dá)矜,丁紅梅,王會(huì)信;特異識(shí)別已分化PC12細(xì)胞的ssDNA適體的結(jié)構(gòu)和功能研究[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2004年06期

8 張雄鷹;查國章;武延雋;余平;;沙眼衣原體K血清型感染細(xì)胞IL-6分泌水平的測(cè)定[J];長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年04期

9 羅曉光;任艷;葛春林;吳哲;禹紅梅;周進(jìn);閆榮;張朝東;王秋爽;;活化小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)PC12細(xì)胞中CREB激活程度影響的研究[J];中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志;2007年11期

10 崔建華,張西洲,何富文,王正理,周新梅,哈振德,趙升陽,張素萍;健康青年進(jìn)駐高原血清TNF-α和IL-6的變化[J];西北國防醫(yī)學(xué)雜志;1999年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 賈紅宇;盧安衛(wèi);徐世國;蔣建文;;CTLA-4基因重組腺病毒的構(gòu)建及其免疫活性的研究[A];2007年浙江省器官移植學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

2 張啟瑜;廖毅;虞冠鋒;孫運(yùn)鵬;沈志堅(jiān);;小鼠CD40Ig基因重組腺病毒載體系統(tǒng)的構(gòu)建和鑒定[A];2008年浙江省外科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

3 陳小武;陳志斌;王W

本文編號(hào)：1426531