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大鼠白細胞介素-6重組腺病毒構(gòu)建及初步鑒定

發(fā)布時間:2018-01-15 03:14

  本文關(guān)鍵詞:大鼠白細胞介素-6重組腺病毒構(gòu)建及初步鑒定 出處:《免疫學(xué)雜志》2014年02期  論文類型:期刊論文


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【摘要】:目的構(gòu)建攜帶大鼠白細胞介素-6(interleukin 6,IL-6)基因的重組腺病毒,為研究IL-6在神經(jīng)損傷中的生物學(xué)作用提供技術(shù)手段。方法體外擴增大鼠IL-6基因,定向克隆到pAdTrace-TOX腺病毒穿梭質(zhì)粒中,構(gòu)建重組pAdTrace-IL-6過表達腺病毒質(zhì)粒,并與骨架質(zhì)粒pAd-Easy-1在BJ5183菌中發(fā)生同源重組,獲得pAd-IL-6腺病毒載體,經(jīng)PacⅠ酶切后轉(zhuǎn)染HEK293細胞進行包裝擴增。通過Ad-IL-6腺病毒感染PC12細胞,Real-time PCR和Western blot檢測PC12細胞中IL-6及STAT3的表達。結(jié)果 PCR電泳及酶切、測序鑒定均證實目的基因IL-6正確克隆至腺病毒載體中,所構(gòu)建的腺病毒Ad-IL-6可感染PC12細胞,有效增加IL-6的表達水平,促進IL-6信號通路中關(guān)鍵蛋白磷酸化STAT3的表達。結(jié)論成功構(gòu)建攜帶IL-6的重組腺病毒載體,該載體可顯著增高PC12細胞中IL-6基因和蛋白表達水平,并上調(diào)IL-6相關(guān)信號通路。
[Abstract]:Objective to construct rat interleukin -6 (interleukin 6, IL-6) recombinant adenovirus, provide technical means for the biological role of IL-6 in nerve injury. Methods rat IL-6 gene amplification in vitro, cloned into Adenovirus Shuttle Plasmid pAdTrace-TOX, the recombinant adenovirus pAdTrace-IL-6 overexpression plasmid, and homologous recombination with the skeleton plasmid pAd-Easy-1 in BJ5183 bacteria, pAd-IL-6 adenovirus vector by Pac I enzyme digestion and transfected into HEK293 cells for packaging amplification. PC12 cells infected by Ad-IL-6 adenovirus, the expression of IL-6 and STAT3 Real-time PCR and Western PC12 cells to detect blot. Results of PCR electrophoresis and enzyme digestion and sequencing were the results showed that the target gene IL-6 cloned into adenovirus vector, adenovirus Ad-IL-6 constructed can infect PC12 cells, increase the expression level of IL-6, promote IL-6 signaling pathway The expression of STAT3 was phosphorylated by key proteins. Conclusion the recombinant adenovirus vector carrying IL-6 can be successfully constructed, which can significantly increase the IL-6 gene and protein expression level in PC12 cells, and up regulate IL-6 related signaling pathways.

【作者單位】: 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院營養(yǎng)研究中心
【基金】:國家自然科學(xué)基金項目(81271385) 重慶市衛(wèi)生局重點項目(渝衛(wèi)2009-1-41)
【分類號】:R392-33
【正文快照】: 白細胞介素-6(interleukin-6,IL-6)是一種由184個氨基酸組成的分泌型蛋白,廣泛存在于人體內(nèi),T細胞、B細胞、膠質(zhì)細胞、成纖維細胞、上皮細胞及部分腫瘤細胞等都可分泌IL-6[1-2]。中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷過程中,IL-6參與腦內(nèi)巨噬細胞、星形膠質(zhì)細胞等的激活,產(chǎn)生免疫反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn),

【參考文獻】

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【共引文獻】

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【相似文獻】

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3 陳小武;陳志斌;王W

本文編號:1426531


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