本文關(guān)鍵詞：日本血吸蟲DNA疫苗的研究和應(yīng)用　出處：《華中科技大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： DNA疫苗 質(zhì)粒發(fā)酵 質(zhì)粒純化 日本血吸蟲 融合基因

【摘要】： 血吸蟲病是一種世界性的傳染性疾病,它危害著人類的生命健康,阻礙社會發(fā)展。血吸蟲DNA疫苗是預(yù)防血吸蟲疾病的一種新方法,日本血吸蟲的DNA疫苗的研究取得了很大的進(jìn)展。本文克隆了日本血吸蟲的抗原基因;對抗原基因進(jìn)行基因融合;構(gòu)建日本血吸蟲DNA疫苗;研究了日本血吸蟲DNA疫苗的發(fā)酵工藝,分離純化工藝;研究了日本血吸蟲DNA疫苗在體內(nèi)、體外表達(dá)的可行性。主要取得以下成果: 1)克隆了四種日本血吸蟲抗原基因sj23、sjFABP、sjGAPDH、sj26,經(jīng)過酶切、測序驗(yàn)證陽性克隆子; 2)采用融合PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù),構(gòu)建了兩個融合基因sj23.FABP和sj26.GAPDH; 3)亞克隆四種日本血吸蟲抗原基因sj23、sjFABP、sjGAPDH、sj26和兩種日本血吸蟲抗原基因的融合基因sj23.FABP、sj26.GAPDH,插入到真核表達(dá)載體pVIVO2的多克隆位點(diǎn),構(gòu)建了14種日本血吸蟲DNA疫苗; 4)優(yōu)化了日本血吸蟲DNA疫苗的發(fā)酵條件:利用單因子實(shí)驗(yàn),從5種碳源、6種氮源中最優(yōu)碳源為甘油,最優(yōu)氮源為豆餅汁;最佳K2HPO4添加比例為20%;通過“Plackeet-Burman”實(shí)驗(yàn)從6種發(fā)酵培養(yǎng)基的成份中篩選出3種重要影響因子:豆餅汁,牛肉汁,甘油。通過“Box-Behnken”分析,獲得最佳培養(yǎng)基配方(m/v):NaCl 1%,YE 1%,磷酸鹽0.3%(其中K2PO4添加比例為20%),甘油1.68%,牛肉汁2.28%,豆餅汁4.21%,初始pH值為7.0; 5)建立了日本血吸蟲DNA疫苗的制備工藝:采用凝膠過濾去除RNA和雜蛋白,采用親和離子層析去除開環(huán)質(zhì)粒DNA,采用親和吸附去除內(nèi)毒素。最終產(chǎn)品經(jīng)過質(zhì)量評價,在瓊脂糖凝膠電泳圖譜中不可見RNA條帶,雜蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)占0.11%,超螺旋質(zhì)粒DNA含量達(dá)93.4%,總熱源含量為0.85EU/(mg plasmid)。各項(xiàng)指標(biāo)都達(dá)到了國家食品藥品監(jiān)督管理局對醫(yī)用級DNA疫苗的技術(shù)要求。 6)通過間接熒光免疫檢測,發(fā)現(xiàn)14種日本血吸蟲DNA疫苗都分別能夠在小鼠肌肉和MCF-7真核細(xì)胞中在抗原水平,成功表達(dá)。
[Abstract]:Schistosomiasis is a worldwide infectious disease, which endangers the health of human life and hinders the development of society. Schistosomiasis DNA vaccine is a new method to prevent schistosomiasis. Great progress has been made in the research of Schistosoma japonicum DNA vaccine. The antigenic gene of Schistosoma japonicum was cloned in this paper. Gene fusion of antigen gene; Construction of Schistosoma japonicum DNA vaccine; The fermentation and purification of Schistosoma japonicum DNA vaccine were studied. The feasibility of expression of Schistosoma japonicum DNA vaccine in vivo and in vitro was studied. 1) four kinds of Schistosoma japonicum antigen genes sj23, sjFABPN, sjGAPDH, sj26 were cloned, and the positive clones were confirmed by restriction endonuclease digestion and sequencing. 2) two fusion genes, sj23.FABP and sj26.GAPDH, were constructed by using fusion PCR technique. 3) subcloning of four Schistosoma japonicum antigen genes sj23, sjFABP, sjGAPDH, sj26, and two fusion genes, sj23.FABP, of Schistosoma japonicum antigen genes. Sj26.GAPDH, inserted into the polyclonal site of eukaryotic expression vector pVIVO2, was used to construct 14 DNA vaccines of Schistosoma japonicum. 4) the fermentation conditions of Schistosoma japonicum DNA vaccine were optimized. The optimal carbon source and soybean cake juice were glycerol and soybean cake juice respectively. The optimum addition ratio of K2HPO4 is 20. Through "Plackeet-Burman" experiment, three important influencing factors were selected from 6 kinds of fermentation medium: bean cake juice and beef juice. Glycerin. By "Box-Behnken" analysis, the best medium formula was obtained. The ratio of K2PO4 to K2PO4 was 20, glycerol was 1.68, beef juice was 2.28, bean cake juice was 4.21, initial pH value was 7.0; 5) the preparation process of Schistosoma japonicum DNA vaccine was established. The RNA and miscellaneous proteins were removed by gel filtration, and the open loop plasmid DNA was removed by affinity ion chromatography. Endotoxin was removed by affinity adsorption. After quality evaluation, the RNA band was not seen in agarose gel electrophoresis, and the content of miscellaneous protein was 0.11%. The content of superhelical plasmid DNA was 93.4%. The total heat source content is 0.85 EUU / mg plasmid.All indexes meet the technical requirements of the State Food and Drug Administration for medical grade DNA vaccine. 6) by indirect fluorescence immunoassay, 14 kinds of Schistosoma japonicum DNA vaccines were successfully expressed in mouse muscle and MCF-7 eukaryotic cells.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R392

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 吳春利;程小雯;呂星;房師松;王昕;;A型流感病毒M基因DNA疫苗載體構(gòu)建及免疫性研究[J];中國熱帶醫(yī)學(xué);2011年07期

2 齊文娟;方強(qiáng);;寄生蟲病DNA疫苗研究進(jìn)展[J];中國血吸蟲病防治雜志;2011年03期

3 李晨晨;于繼云;姜敏;涂亦嫻;馬曉林;張富春;;草原兔尾鼠卵透明帶3DNA疫苗pVAX1-sig-LTB-lZP3-C3d3的構(gòu)建表達(dá)及其免疫不育的研究[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2011年09期

4 鄧璐;鄒墨;劉艷;羅恩杰;;DNA疫苗的轉(zhuǎn)運(yùn)途徑及其安全性研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)動物防制;2011年08期

5 張亮;閻瑾琦;王越;肖毅;高昆;董金凱;王博;于繼云;;可復(fù)制型抗腫瘤DNA疫苗PSCK-2PFcGB的構(gòu)建及體內(nèi)外表達(dá)[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2011年06期

6 胡方靖;武軍駐;;pIHsp65GM的構(gòu)建及其對結(jié)核桿菌感染小鼠的保護(hù)[J];免疫學(xué)雜志;2011年08期

7 張陽;王英麗;;MUC1基因疫苗對乳腺腫瘤抑制的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國婦幼保健;2011年21期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

相關(guān)會議論文 前10條

1 居巍;劉君炎;;結(jié)核桿菌HSP65佐劑DNA疫苗的實(shí)驗(yàn)研究[A];第6次全國微生物學(xué)與免疫學(xué)大會論文摘要匯編[C];2004年

2 姜秀云;何昭陽;;活體電穿孔法導(dǎo)入DNA:牛結(jié)核病免疫接種新技術(shù)[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

3 靳彥文;鐘輝;馬清鈞;;惡性瘧原蟲DNA疫苗的安全性研究[A];中國生物工程學(xué)會第三次全國會員代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2001年

4 田潔;劉君炎;;ConA與結(jié)核桿菌HSP65DNA疫苗聯(lián)合應(yīng)用的研究[A];湖北省暨武漢市免疫學(xué)會第八屆學(xué)術(shù)會議論文集[C];2003年

5 熊金虎;趙民;邱小萍;伍欣星;;人乳頭瘤病毒嵌合型DNA疫苗的構(gòu)建及其免疫效應(yīng)研究[A];湖北省暨武漢市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會第七屆第十四次學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2003年

6 江云波;方六榮;肖少波;牛傳雙;張輝;陳煥春;;修飾的ORF5基因增強(qiáng)豬繁殖與呼吸綜合征DNA疫苗的免疫反應(yīng)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第六次研討會論文集[C];2005年

7 吳長有;;DNA疫苗與免疫記憶[A];2005全國第二屆核酸疫苗研討會論文集[C];2005年

8 崔保安;魏戰(zhàn)勇;楊明凡;張素梅;;DNA疫苗免疫佐劑的研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2003年

9 楊慧蘭;葛夢林;楊太成;劉榮卿;;單純皰疹病毒gD2 DNA疫苗免疫動物誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答[A];2003中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2003年

10 張冉;易新元;曾憲芳;;日本血吸蟲新基因克隆及DNA疫苗的構(gòu)建和保護(hù)性研究[A];中國動物學(xué)會全國第九次寄生蟲學(xué)學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2003年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 蔣明 周漢橋;DNA疫苗研究取得突破[N];健康報(bào);2005年

2 林明貴 金關(guān)甫;DNA疫苗 戰(zhàn)勝結(jié)核的希望[N];健康報(bào);2003年

3 ;防治早老性癡呆DNA疫苗問世[N];新華每日電訊;2004年

4 ;DNA疫苗“餓”殺小鼠腫瘤[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

5 陳勇;西尼羅病毒DNA疫苗開始臨床試驗(yàn)[N];健康報(bào);2005年

6 梅子;期待從今天開始[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

7 劉恕;艾滋病疫苗離我們還有多遠(yuǎn)[N];科技日報(bào);2005年

8 本報(bào)記者 王玲 柯玲;中國艾滋病疫苗與時間賽跑[N];經(jīng)濟(jì)日報(bào);2005年

9 曲國斌;征服艾滋病不是夢[N];健康報(bào);2001年

10 何雁;何大一：傾心祖國艾滋病防治[N];人民日報(bào)海外版;2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 張洪英;口蹄疫多表位DNA疫苗的免疫原性和安全性研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2003年

2 張靜;輪狀病毒分子流行病學(xué)調(diào)查及脂質(zhì)體DNA疫苗研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2002年

3 王濤;嗜肺軍團(tuán)菌mip基因DNA疫苗初步研究[D];四川大學(xué);2004年

4 宋立強(qiáng);異種同源鈣激活Cl～-通道DNA疫苗對小鼠哮喘模型的防治作用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

5 時陽;MAGE-1與IL-18共表達(dá)DNA疫苗的構(gòu)建及體內(nèi)外功能驗(yàn)證[D];吉林大學(xué);2004年

6 郭瀛軍;豬帶絳蟲囊蟲病DNA疫苗的中試及免疫效力研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

7 張夢寒;漢城病毒M片段和漢灘病毒部分S片段核酸疫苗pEGFP-M-S的構(gòu)建及基因免疫研究[D];蘇州大學(xué);2005年

8 焦解歌;豬Endoglin DNA疫苗誘導(dǎo)抗腫瘤血管生成機(jī)理研究[D];中南大學(xué);2005年

9 郭慧琛;O型口蹄疫病毒多基因DNA疫苗的研制[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2004年

10 張含;口服DNA疫苗防治實(shí)驗(yàn)性脈絡(luò)膜血管新生[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 朱路;日本血吸蟲DNA疫苗的研究和應(yīng)用[D];華中科技大學(xué);2007年

2 張恒;雞貧血病毒DNA疫苗的研究[D];山東師范大學(xué);2003年

3 曾政;布魯氏菌新型疫苗的構(gòu)建及其免疫原性研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2004年

4 楊帆;雞傳染性支氣管炎病毒分離株IBV_（WHNJ）M基因DNA疫苗研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

5 楊璇;癌胚抗原DNA疫苗的構(gòu)建及佐劑對其免疫效應(yīng)的影響[D];鄭州大學(xué);2002年

6 黃力;口蹄疫多表位DNA疫苗的免疫原性[D];河北醫(yī)科大學(xué);2004年

7 張強(qiáng)哲;H5亞型禽流感病毒HA DNA疫苗的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2003年

8 蔣英;白細(xì)胞介素12對結(jié)核病DNA疫苗效應(yīng)的增強(qiáng)作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2003年

9 蔣文明;以減毒沙門氏菌為載體傳遞豬繁殖與呼吸綜合征病毒DNA疫苗的口服免疫應(yīng)答[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

10 賈文影;新孢子蟲PO基因的真核表達(dá)及DNA疫苗的初步研究[D];延邊大學(xué);2010年

，

本文編號：1425455