本文關(guān)鍵詞：無(wú)細(xì)胞百日咳疫苗中百日咳毒素活性檢測(cè)方法的建立　出處：《中國(guó)生物制品學(xué)雜志》2014年12期 　論文類(lèi)型：期刊論文

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【摘要】：目的建立檢測(cè)無(wú)細(xì)胞百日咳疫苗(acellular pertussis vaccine,APV)中百日咳毒素(pertussis toxin,PT)活性的胎球蛋白結(jié)合試驗(yàn)ELISA方法。方法優(yōu)化APV中PT殘余含量的胎球蛋白結(jié)合試驗(yàn)ELISA檢測(cè)方法,分析不同抗原稀釋液對(duì)該方法的影響,并對(duì)該方法進(jìn)行線性、精密度、靈敏度、特異性驗(yàn)證。分析絲狀血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)、百日咳黏著素(pertactin,Prn)、白喉類(lèi)毒素(diphtheria toxoid,DT)、破傷風(fēng)類(lèi)毒素(tetanus toxoid,TT)在成品疫苗劑量時(shí)(即50μg/ml、16μg/ml、25 Lf/ml、7 Lf/ml)對(duì)PT與胎球蛋白結(jié)合的影響,確定疫苗解吸附條件,并對(duì)不同廠家的8批吸附無(wú)細(xì)胞百白破聯(lián)合疫苗進(jìn)行解析附后,檢測(cè)PT含量,計(jì)算CV。結(jié)果在胎球蛋白包被濃度為5μg/ml時(shí),使用p H 8.5含1%胎牛血清白蛋白(BSA)Tris緩沖液對(duì)樣品進(jìn)行稀釋后,直接用酶標(biāo)抗PT抗體進(jìn)行檢測(cè),建立的胎球蛋白結(jié)合試驗(yàn)ELISA檢測(cè)方法的劑量反應(yīng)曲線線性良好(r均0.99);試驗(yàn)內(nèi)CV為13.74%~5.85%,試驗(yàn)間CV為2.75%~10.39%,靈敏度可達(dá)4 ng/ml,精密度好,靈敏度高;降低了PTd的干擾作用,特異性較好。FHA、Prn、DT、TT在成品疫苗劑量時(shí)對(duì)PT與胎球蛋白的結(jié)合無(wú)影響;確定疫苗解吸附條件為T(mén)ris-檸檬酸鈉溶液(4%,w/v)(p H 8.5);各批疫苗3次檢測(cè)結(jié)果的CV值均符合要求,重復(fù)性較好。結(jié)論優(yōu)化后的胎球蛋白結(jié)合試驗(yàn)ELISA檢測(cè)方法可用于APV中殘余PT含量的檢測(cè)。
[Abstract]:Objective to establish a method for the detection of pertussis toxin in acellular pertussis vaccine. Methods the ELISA method for the determination of PT residual content in APV was optimized by using the method of fetal globulin binding test (ELISA). The influence of different antigen diluents on the method was analyzed, and the method was linear, precise and sensitive. Specificity verification. The filamentous hemagglutininine (FHAA) and pertussis glutin (Prn) were analyzed. Diphtheria toxoidus, tetanus toxoid. The effect of finished vaccine dosage (50 渭 g / ml ~ (16 渭 g / ml) ~ (16 渭 g / ml ~ (-1))) on the binding of PT to fetal globulin (FG) was determined, and the conditions of vaccine desorption were determined. Eight batches of adsorbed acellular tetanus tetanus vaccine from different manufacturers were analytically attached, PT content was detected, and CV was calculated. The results showed that the concentration of fetal globulin was 5 渭 g / ml. The samples were diluted with pH 8.5 containing 1% fetal bovine serum albumin (BSA) Tris buffer solution and detected directly with enzyme-labeled anti-PT antibody. The dose response curve of the established ELISA assay for fetal globulin binding test was linear to 0.99g. The CV in the test was 13.74 and 5.85, the CV in the test room was 2.75 and 10.39, the sensitivity was up to 4 ng / ml, the precision was good and the sensitivity was high. The interference effect of PTd was reduced, and the specificity of PTd was better. There was no effect on the binding of PT to fetal globulin in the dosage of finished vaccine. The conditions of vaccine desorption were determined as follows: Tris-sodium citrate solution (Tris-sodium citrate solution) = 4w / v / v ~ (-1) H ~ (8.5); The CV values of each batch of vaccines met the requirements and the repeatability was good. Conclusion the optimized ELISA assay for fetal globulin binding test can be used to detect the residual PT content in APV.
【作者單位】： 北京天壇生物制品股份有限公司;
【基金】：國(guó)家十二五重大新藥創(chuàng)制生物藥大品種技術(shù)升級(jí)項(xiàng)目(2012ZX09201301-001)
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【正文快照】： 百日咳是由鮑特百日咳桿菌引起的一種兒童易感的急性呼吸道傳染病,近年來(lái)隨著百日咳疫苗進(jìn)入免疫規(guī)劃[1-2],百日咳在很多國(guó)家已得到控制。無(wú)細(xì)胞百日咳疫苗(acellular pertussis vaccine,APV)逐漸取代全細(xì)胞百日咳疫苗(whole pertussis vaccine,WPV),不僅改善了免疫程序,且顯

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

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【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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