本文關(guān)鍵詞：與雌激素受體相互作用蛋白FHL2的功能研究　出處：《中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2007年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： FHL ER 蛋白質(zhì)相互作用 乳腺癌

【摘要】： 雌激素受體(estrogen receptor，ER)是核受體超級(jí)家族成員之一，它包括兩種亞型：α和β。兩種亞型在結(jié)構(gòu)上基本相似，均分為4個(gè)功能結(jié)構(gòu)域，即轉(zhuǎn)錄激活區(qū)AF1和AF2，DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(DBD)及位于D區(qū)的鉸鏈區(qū)。AF1具有配體(雌激素)不依賴的轉(zhuǎn)錄激活功能，AF2具有配體依賴的轉(zhuǎn)錄激活功能。AF1和AF2的有效轉(zhuǎn)錄激活均依賴于與其它蛋白質(zhì)的相互作用，ER通過(guò)AF1和AF2相互協(xié)同作用調(diào)控雌激素應(yīng)答的基因表達(dá)。ER在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，乳腺癌內(nèi)分泌的治療主要是通過(guò)降低ER轉(zhuǎn)錄活性而實(shí)現(xiàn)。因此調(diào)節(jié)ER轉(zhuǎn)錄活性的蛋白因子的發(fā)現(xiàn)和相應(yīng)的功能研究對(duì)于探討乳腺癌的發(fā)病機(jī)制、預(yù)防乳腺癌的發(fā)生、有效開(kāi)發(fā)治療與雌激素相關(guān)疾病的藥物具有重大意義。 我們以ERβAF1(1-145aa)為誘餌，用酵母雙雜交技術(shù)從人乳腺cDNA文庫(kù)中分離到了未曾報(bào)道的與ERβ相互作用的蛋白質(zhì)FHL2。FHL2是FHL家族蛋白成員，含4個(gè)半LIM結(jié)構(gòu)域，LIM結(jié)構(gòu)域的雙鋅指結(jié)構(gòu)廣泛地介導(dǎo)了蛋白—蛋白間的相互作用。 為進(jìn)一步確認(rèn)FHL2與ER之間存在特異性的蛋白質(zhì)間相互作用，我們進(jìn)行了GST沉降和免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，F(xiàn)HL2和ERa、ERβ在體外和體內(nèi)都存在相互作用，獲得了與酵母雙雜交結(jié)果相一致的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。通過(guò)FHL2和ER不同功能域缺失的系列突變體，揭示了FHL2和ER發(fā)生相互作用的結(jié)合區(qū)域，F(xiàn)HL2 N端的半個(gè)LIM結(jié)構(gòu)域就能與ER結(jié)合，F(xiàn)HL2與ERβ的AF1區(qū)結(jié)合，與ERa的AF2區(qū)結(jié)合。FHL2同一家族的另外2個(gè)成員FHL1、FHL3也能與ER相互作用。 在轉(zhuǎn)染含雌激素應(yīng)答元件的ERE熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)中，F(xiàn)HL2能以劑量依賴的方式抑制ER介導(dǎo)的ERE熒光素酶報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄。通過(guò)活性實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)FHL2抑制雌激素應(yīng)答元件的報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄活性的功能依賴于ER的存在，而且不是通過(guò)影響ER的表達(dá)水平而實(shí)現(xiàn)的。 為了深入研究FHL2基因的功能，我們制備了抗FHL2的鼠多克隆抗體，并利用該抗體檢測(cè)了FHL2在大鼠不同組織及其乳腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)。隨后我們構(gòu)建了有效的FHL2 siRNA真核表達(dá)載體，將RNAi實(shí)驗(yàn)與活性實(shí)驗(yàn)相結(jié)合，發(fā)現(xiàn)抑制FHL2的表達(dá)后，F(xiàn)HL2抑制雌激素應(yīng)答元件的報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄活性的功能也受到抑制。同時(shí)在乳腺癌細(xì)胞株T47D中構(gòu)建了FHL2過(guò)表達(dá)和低表達(dá)的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株，，再次從正反兩方面驗(yàn)證了FHL2能抑制ER報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄，由此推測(cè)FHL2是ER的共抑制子。 本實(shí)驗(yàn)室已證明FHL2與Smad4也存在相互作用，另有文獻(xiàn)表明Smad4能抑制ER下游基因的轉(zhuǎn)錄活性。我們利用轉(zhuǎn)錄活性實(shí)驗(yàn)證明FHL2與Smad4能協(xié)同促進(jìn)ERβ調(diào)節(jié)報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄；同時(shí)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)也表明FHL2、Smad4與ERβ共存在于同一復(fù)合物中。 這些研究結(jié)果表明，F(xiàn)HL2可能是雌激素信號(hào)通路的一個(gè)新型調(diào)控因子，通過(guò)與ER相互作用參與信號(hào)通路的調(diào)控，進(jìn)一步的深入研究將有助于了解新型雌激素受體ERβ信號(hào)通路的調(diào)控機(jī)制，為闡明乳腺癌的發(fā)生機(jī)制開(kāi)辟一個(gè)新的思路。
[Abstract]:The estrogen receptor ( ER ) is one of the members of the nuclear receptor super family . It includes two subtypes : 偽 and 尾 . The two isoforms are structurally similar and are divided into four functional domains , namely , transcriptional activation regions AF1 and AF2 , DNA binding domain ( dbd ) and hinge region located in the D region . The active transcription activation of AF1 and AF2 is dependent on the interaction with other proteins . We used ER尾 AF1 ( 1 - 145 aa ) as bait , and isolated from human breast cDNA library by yeast two - hybrid technique , which was a member of FHL family protein , containing 4 semi - LIM domains and LIM domain . The structure of double zinc fingers mediated the interaction of protein - protein . In order to further confirm the specific protein - to - protein interactions between HLA - L2 and ER , we carried out GST - sedimentation and immune co - precipitation experiments . The results showed that the binding region of the interaction between the two hybrid results was obtained . In the experiment of transfected ERE luciferase reporter gene transfected with estrogen responsive element , the transcription of ER - mediated ERE luciferase reporter gene was inhibited in dose - dependent manner . In order to study the function of the gene , we prepared a polyclonal antibody to the mouse polyclonal antibody , and then used the antibody to detect the expression of the mRNA in different tissues and breast cancer cell lines of the rat . After that , we constructed an effective eukaryotic expression vector of the siRNA , which was used to inhibit the transcriptional activity of the reporter gene of the estrogen responsive element . We have shown that Smad4 can inhibit the transcription activity of ER downstream genes . We prove that Smad4 can promote the transcription of ER 尾 - regulated reporter gene by means of transcriptional activity . At the same time , the co - precipitation experiment also shows that the coexistence of Smad4 and ER尾 is in the same complex . The results of these studies indicate that the control mechanism of estrogen receptor ER尾 signaling pathway may be helpful to understand the regulation mechanism of estrogen receptor ER尾 signaling pathway by interacting with ER , which opens up a new way to elucidate the pathogenesis of breast cancer .

【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R737.9;R341

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳曦;趙沐子;李建民;劉慶淮;;Lims A:一個(gè)新的LIM同源域基因的克隆和初步分析[J];國(guó)際眼科雜志;2009年06期

2 余宏;馬青艷;林吉進(jìn);;FHL2蛋白對(duì)心血管系統(tǒng)的調(diào)控作用[J];廣東醫(yī)學(xué);2013年23期

3 熊志紅;孫啟鴻;葉棋濃;;FHL2蛋白的研究進(jìn)展[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2007年04期

4 伍志強(qiáng);韓為東;趙亞力;司藝玲;楊潔;田麗媛;孟元光;;FHL2調(diào)控Id2功能活性的研究[J];軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào);2009年02期

5 韓為東;趙亞力;伍志強(qiáng);司藝玲;楊潔;田麗媛;孟元光;;FHL2與Id蛋白相互作用的表位分析[J];軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào);2009年02期

6 李妍妍;劉樹(shù)楷;林吉進(jìn);;FHL2蛋白及其參與心臟離子通道電流調(diào)控的研究進(jìn)展[J];嶺南心血管病雜志;2011年01期

7 程立波;陳潔;趙沐子;劉慶淮;李建民;;Lims E:一個(gè)新的LIM同源域基因的克隆和初步分析[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2007年06期

8 翁申達(dá);尤鋒;范兆飛;文愛(ài)韻;王麗娟;;牙鲆Lhx1基因的克隆和表達(dá)分析[J];海洋科學(xué);2013年11期

9 謝超;王方圓;袁運(yùn)生;郜盡;朱潤(rùn)芝;韓偉;俞雁;;酵母雙雜交研究小鼠肝臟再生TGF-β調(diào)控通路中相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的相互作用[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年05期

10 韓為東;趙亞力;伍志強(qiáng);司藝玲;楊潔;田麗媛;孟元光;;FHL2通過(guò)相互作用抑制Id2的功能活性[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2008年09期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前8條

1 張葵;抗人EpCAM單鏈抗體的制備及其應(yīng)用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

2 章慶春;大鼠移植心臟的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];中南大學(xué);2006年

3 郭俊唐;FHL家族和EYA2在肺癌中表達(dá)的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2008年

4 鄭一瓊;FHL1在乳腺癌紫杉聯(lián)合蒽環(huán)類藥物新輔助化療中的預(yù)測(cè)價(jià)值[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2009年

5 楊秉芬;HSP70L1生物功能的初步研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2009年

6 楊堯;c-Abl非受體酪氨酸激酶與FHL2相互作用及其生物學(xué)意義[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2009年

7 郜盡;肝臟再生調(diào)控相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子間相互作用網(wǎng)絡(luò)的初步研究[D];上海交通大學(xué);2008年

8 梁亮;小鼠KyoT家族的新異構(gòu)發(fā)現(xiàn)及其對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳曦;一種新的HSP90和HSP70伴侶蛋白TTC36在人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞中的定位和功能研究以及基因LimsA的克隆分析[D];南京醫(yī)科大學(xué);2009年

2 李妍妍;FHL2對(duì)心臟HERG鉀離子通道表達(dá)的調(diào)控作用[D];汕頭大學(xué);2011年

3 劉金彪;山羊LHX3基因遺傳變異分析及Myf5基因CDS區(qū)的克隆[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2011年

4 程立波;NYD-SP15基因的原核表達(dá)、抗體的制備以及細(xì)胞發(fā)育相關(guān)基因LIMS E的克隆分析[D];南京醫(yī)科大學(xué);2007年

5 蘇丹;殼聚糖-siRNA分子納米載體的制備、鑒定和基因沉默效應(yīng)[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2007年

6 羅霄;LHX6基因的甲基化檢測(cè)及其在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)研究[D];西南大學(xué);2008年

7 張宇聲;探索FHL2在斑馬魚(yú)中的同源基因?qū)ζ浒l(fā)育的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2008年

8 沈秀張;心臟HERG鉀通道相互作用蛋白的篩選及其對(duì)該通道調(diào)控功能的研究[D];汕頭大學(xué);2009年

9 王璐;FHL2蛋白在牙周膜細(xì)胞礦化過(guò)程中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2010年

10 夏銘笛;不明原因苗勒管發(fā)育異�；颊週HX1基因的研究[D];山東大學(xué);2010年

本文編號(hào)：1417121