本文關(guān)鍵詞：活細(xì)胞內(nèi)脊髓灰質(zhì)炎病毒復(fù)制復(fù)合體蛋白相互作用研究　出處：《中國科學(xué)院研究生院（武漢病毒研究所）》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 脊髓灰質(zhì)炎病毒為單股正鏈RNA病毒。當(dāng)病毒基因組RNA進(jìn)入寄主細(xì)胞質(zhì)后，可直接翻譯出大分子的多聚蛋白肽，并迅速被水解加工為次級前體P1，P2和P3，然后三個次級前體分別進(jìn)一步分級剪切成多種具有重要功能的終末產(chǎn)物蛋白。一些病毒蛋白和宿主蛋白以及病毒的RNA一起組成病毒復(fù)制復(fù)合體，高效迅速地指導(dǎo)病毒核酸的合成。其中P3的剪切產(chǎn)物3AB，3B(VPg)，3D等在病毒的復(fù)制復(fù)合體的組成及功能行使中具有重要作用：3B(VPg)共價結(jié)合于RNA新生鏈的5’端，起RNA合成起始引發(fā)作用；3D是延長RNA新生鏈的聚合酶；3AB是膜結(jié)合蛋白，幫助病毒復(fù)制復(fù)合體定位于細(xì)胞內(nèi)膜上。 研究脊髓灰質(zhì)炎病毒復(fù)制復(fù)合體內(nèi)關(guān)鍵蛋白間相互作用，闡明病毒復(fù)制復(fù)合體的作用機制，對揭示病毒復(fù)制機理以及理解病毒與寄主細(xì)胞間相互作用具有重要意義。迄今為止，已經(jīng)發(fā)展了許多蛋白質(zhì)相互作用的研究方法如：酵母雙雜交、免疫共沉淀、SPR等。但這些方法都無法實現(xiàn)蛋白質(zhì)相互作用的原位、活體、實時研究。熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)是一種在活細(xì)胞內(nèi)研究蛋白質(zhì)相互作用的新技術(shù)，可以在活體內(nèi)原位、無損地可視化蛋白-蛋白間相互作用。本研究利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)，首次在活細(xì)胞內(nèi)可視化研究了脊髓灰質(zhì)炎病毒復(fù)制復(fù)合體內(nèi)關(guān)鍵蛋白質(zhì)間的相互作用。 本論文主要研究了脊髓灰質(zhì)炎病毒復(fù)制復(fù)合體內(nèi)三種關(guān)鍵蛋白質(zhì)3AB、VPg、3D在活細(xì)胞內(nèi)的定位和相互作用情況。利用激光共聚焦顯微鏡和FRET技術(shù)分析樣品。單獨轉(zhuǎn)染實驗顯示：3AB蛋白主要分布在細(xì)胞質(zhì)區(qū)域，且聚集成小的不規(guī)則的顆粒；而VPg和3D蛋白主要均勻分布于全細(xì)胞。蛋白的共轉(zhuǎn)染實驗顯示：3AB-VPg這組蛋白在活細(xì)胞中可相互作用，且作用區(qū)域集中在細(xì)胞質(zhì)，分析結(jié)果顯示FRET效率平均值為8.3±0.6％(n=44)；同時3AB-3D這組蛋白在活細(xì)胞中也可相互作用，且作用區(qū)域集中在細(xì)胞質(zhì)，分析結(jié)果顯示FRET效率平均值為6.1±0.8％(n=46)；而VPg-3D這組蛋白在活細(xì)胞中雖然可觀察到明顯的相互作用，但作用區(qū)域分散在整個細(xì)胞，沒有特別集中的區(qū)域，分析結(jié)果顯示FRET效率平均值為6.8±0.5％(n=51)�？梢娪�3AB蛋白參與的兩組相互作用區(qū)域集中在細(xì)胞質(zhì)區(qū)域，與病毒復(fù)制復(fù)合體產(chǎn)生位置類似。此外，通過脊髓灰質(zhì)炎病毒的感染實驗，我們發(fā)現(xiàn)病毒的感染對3AB-VPg、3AB-3D這兩組蛋白間相互作用無明顯影響，但是卻加強了蛋白VPg和3D間的相互作用，使FRET效率的平均值從6.8±0.5％(n=51)上升為11.1±1.1％(n=43)。 借助熒光蛋白標(biāo)記和熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)，本論文研究了脊髓灰質(zhì)炎病毒復(fù)制復(fù)合體內(nèi)三種關(guān)鍵蛋白質(zhì)3AB、VPg、3D在活細(xì)胞內(nèi)的定位和相互作用�；罴�(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)3AB、VPg、3D相互作用的研究結(jié)果證明了它們在脊髓灰質(zhì)炎病毒的復(fù)制復(fù)合體形成中的重要作用，，為深入認(rèn)識病毒復(fù)制復(fù)合體的形成和作用機制，闡明病毒復(fù)制機理提供了重要的數(shù)據(jù)資料。
[Abstract]:When the viral genome RNA enters the host cytoplasm , the multimeric peptide of the macromolecule can be directly translated , and the three sub - precursors are rapidly hydrolyzed into a plurality of terminal product proteins with important functions . The three sub - precursors are further fractionated and cut into a plurality of terminal product proteins with important functions . In order to clarify the mechanism of interaction between proteins and to understand the mechanism of viral replication and to understand the interaction between viruses and host cells , it is important to study the mechanism of viral replication and to understand the interaction between proteins and host cells . In this paper , the localization and interaction of three key proteins 3AB , VPg and 3D in living cells were studied . In this paper , the localization and interaction of three key proteins 3AB , VPg and 3D in living cells were studied by means of fluorescent protein labeling and fluorescence resonance energy transfer technique .

【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)院研究生院（武漢病毒研究所）
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R373

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1416258