本文關(guān)鍵詞：腸道病毒遺傳性分析及早期實驗室診斷方法的研究　出處：《福建醫(yī)科大學(xué)》2005年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 非脊髓質(zhì)炎腸道病毒 定型 遺傳性分析 基因組 通用抗原 單克隆抗體

【摘要】：腸道病毒型別多,變異大,是多種急慢性疾病的主要病原。在脊髓灰質(zhì)炎病毒消滅后期,本研究以福建省57 例急性弛緩性麻痹(AFP)病例中分離到的非脊髓灰質(zhì)炎腸道病毒(non-polio enterovirus,NPEV)為對象,用傳統(tǒng)血清中和試驗結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行診斷和定型。結(jié)果顯示,應(yīng)用組合血清進(jìn)行中和試驗定型,54.39%病毒能定出型別,45.61%無法定型。而應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)不僅鑒定了其型別,發(fā)現(xiàn)兩株新型病毒FJ96-71 和FJ02-47,還及時快速地對一起病毒性腦炎流行的病原進(jìn)行了鑒定與分析。可見分子生物學(xué)鑒定方法較傳統(tǒng)方法不僅省時快速,而且能對傳統(tǒng)方法所無法定型的病毒進(jìn)行鑒定,及時地確定疾病流行的病原。 FJ96-71 病毒經(jīng)蝕斑純化后,通過全基因組序列測定與分析,結(jié)合電鏡形態(tài)學(xué)診斷、細(xì)胞培養(yǎng)時病變特點和抗原性分析,確認(rèn)屬于腸道病毒新血清型HEV75,并制備了型特異性中和抗體,為今后相應(yīng)疾病的預(yù)防控制作準(zhǔn)備。 福建省NPEV 流行型別豐富,其中不僅含國外報道較多與無菌性腦炎等嚴(yán)重后果疾病關(guān)系密切型別—ECV6、ECV11、ECV13 和ECV30 等,而且包含最近國外未見報道卻引起本地?zé)o菌性腦炎較大范圍流行的型別—ECV19。 對腸道病毒抗原位點集中且與血清型相關(guān)性好的衣殼蛋白VP1 基因全長或部分序列進(jìn)行遺傳性分析,結(jié)果顯示,腸道病毒福建分離株與國外參考株間差異大,具本土特點。部分血清型分離株間也存在較大差異,說明一個血清型在福建省內(nèi)還存在多傳播鏈流行。因此遺傳性分析在追蹤病毒性疾病流行來源具有重要意義。 借鑒國外對腸道病毒通用抗原研究的成果,結(jié)合福建分離株遺傳特征,以福建株為模板,體外擴(kuò)增通用抗原目的基因片段,利用基因工程重組技術(shù),用pET30a 和pET42a 表達(dá)系統(tǒng)在大腸桿菌BL21 中進(jìn)行表達(dá),誘導(dǎo)后重組蛋白表達(dá)量約占總體蛋白表達(dá)量的40%。經(jīng)Western blot 檢測,重組蛋白能被國外商品化的腸道病毒組特異性的5-D8/1 單抗、含PV 抗體的人血清與分別代表腸道病毒A、B、D 三組的單型血清所識別。制備其相應(yīng)的多抗和單抗,與5-D8/1 單抗同時應(yīng)
[Abstract]:Enterovirus is the main pathogen of many acute and chronic diseases. It is the main pathogen of many acute and chronic diseases. Non-poliovirus non-polio enterovirus was isolated from 57 cases of acute flaccid paralysis (AFP) in Fujian Province. NPEV) was used for diagnosis and typing by traditional serum neutralization test and molecular biological technique. The results showed that 54.39% of the viruses could be identified by using combined serum neutralization test. 45.61% could not be typed. The molecular biology technology not only identified its type, but also found two new viruses FJ96-71 and FJ02-47. The identification and analysis of a viral encephalitis pathogen was also carried out in time and quickly. It can be seen that molecular biological identification method is not only faster than the traditional methods. And it can identify the virus which the traditional method can not be stereotyped, and identify the pathogen of the disease in time. After the FJ96-71 virus was purified by plaque, the whole genome sequence was determined and analyzed, combined with the morphological diagnosis of electron microscope, the pathological characteristics and antigenicity of cell culture were analyzed. The new serotype HEV75 of enterovirus was confirmed and the type-specific neutralizing antibody was prepared to prepare for the prevention and control of the disease in the future. Fujian Province is rich in epidemic types of NPEV, which not only contains more foreign reports and aseptic encephalitis and other serious consequences of diseases closely related to the type-ECV6 ECV11. ECV13, ECV30 and so on, but not recently reported abroad but caused by local aseptic encephalitis in a wide range of types-ECV19. The full-length or partial sequence of capsid protein VP1 gene which has concentrated antigen sites of enterovirus and has good correlation with serotype was analyzed. The difference between Fujian isolate and foreign reference strain of enterovirus is great, and there are some differences among some serotype isolates. It is suggested that a serotype still exists in Fujian province, so genetic analysis is of great significance in tracing the source of viral diseases. Referring to the achievements of foreign research on common antigen of enterovirus, combining with the genetic characteristics of Fujian isolate, using Fujian strain as template, the target gene fragment of common antigen was amplified in vitro, and the recombinant technology of gene engineering was used. E. coli BL21 was expressed by pET30a and pET42a expression system. After induction, the expression of recombinant protein accounted for about 40% of the total protein expression, which was detected by Western blot. The recombinant protein can be obtained by the foreign commercial enterovirus group specific 5-D8 / 1 monoclonal antibody, the human serum containing PV antibody and the representative of enterovirus Agna B, respectively. Group D is recognized by monotypic serotypes. The corresponding polyantibodies and McAbs are prepared, which should be matched with 5-D8 / 1 McAbs.
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R373

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 文洪梅;昌思思;陸林;田炳均;趙智嫻;張杰;湯晶晶;丁崢嶸;;2009年云南省邊境地區(qū)健康兒童腸道病毒測序定型和ECHO7、ECHO13病毒的基因特征分析[J];病毒學(xué)報;2011年04期

2 袁鑫;;回望中國移民尋根里程碑——《祖先游戲》[J];科技信息;2011年16期

3 謝恩廣;趙光宇;;煤礦斜井防跑車裝置的現(xiàn)狀分析與未來發(fā)展[J];中國科技信息;2011年17期

4 ;[J];;年期

5 ;[J];;年期

6 ;[J];;年期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

相關(guān)會議論文 前4條

1 田冬青;蔣玉文;陳小云;楊京嵐;丁家波;;產(chǎn)氣莢膜梭菌多重PCR定型方法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2006學(xué)術(shù)年會論文集（下冊）[C];2006年

2 唐海波;李朝旭;;自我認(rèn)知在相貌定型中的作用[A];中國社會心理學(xué)會2008年全國學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2008年

3 ;棉包滌織物的染整工藝[A];康地恩杯第八屆全國染整前處理學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

4 汪吉艮;陳偉;;人棉高支雙捻向強捻紡線織物上漿實踐[A];“常紡院杯”全國織造新產(chǎn)品開發(fā)學(xué)術(shù)研討會暨2008織造年會論文集[C];2008年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 張譽;帕卡：以銷定產(chǎn) 以客定型[N];中國交通報;2002年

2 通訊員 陳衛(wèi)東;漢江公司不斷開發(fā)新產(chǎn)品[N];中國航空報;2000年

3 記者 施勇峰;三峽工程升船機(jī)定型[N];新華每日電訊;2002年

4 卜衛(wèi);小羊迷路了[N];中國婦女報;2001年

5 本報記者 張仲超;兩名大學(xué)生贏了聯(lián)家超市[N];中國商報;2000年

6 胡喜盈 姚興寶;“家樂�！弊ァ靶⊥怠笔欠裼袡�(quán)“偷一罰十”[N];人民政協(xié)報;2001年

7 記者 盧勁松;司法改革是否應(yīng)忽視法院調(diào)查取證制度[N];民主與法制時報;2002年

8 卿荏;男女角色如何轉(zhuǎn)變[N];中國人口報;2001年

9 本報記者 蔣和葆;熱水器市場迎來陽光時代[N];中國消費者報;2002年

10 馬自祥;弘揚隴原傳統(tǒng)文化[N];甘肅日報;2000年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前6條

1 楊秀惠;腸道病毒遺傳性分析及早期實驗室診斷方法的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2005年

2 李選剛;細(xì)化羊毛的研究[D];蘇州大學(xué);2004年

3 鄧長玉;浮動抵押制度研究[D];西南政法大學(xué);2008年

4 田冬青;產(chǎn)氣莢膜梭菌的多重PCR定型及α、β和ε毒素基因的克隆、表達(dá)和抗血清的制備[D];中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;2007年

5 董海卓;延伸法在紡織上應(yīng)用幾個問題探討[D];東華大學(xué);2006年

6 宋少坤;固—固復(fù)合相變材料的制備及性能研究[D];武漢理工大學(xué);2012年

，

本文編號：1412485