本文關鍵詞：人臍血間質干細胞向神經元樣細胞誘導分化和移植的實驗研究　出處：《蘇州大學》2005年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的1.建立體外培養(yǎng)、擴增人臍帶血間充質干細胞(MSCs)的方法,探討其生物學特性。2. 探討來源于人臍血的間充質干細胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)分化成神經元樣細胞的可行性。3. 觀察移植源于人臍血間質干細胞誘導分化的神經元樣細胞是否可以促進大鼠脊髓損傷的行為和功能恢復。 方法1.無菌條件下取正常足月剖腹產的臍帶血,用淋巴細胞分離液分離臍血的單個核細胞,以偏酸性的MesencultTM作為培養(yǎng)基進行培養(yǎng)和純化獲得貼壁細胞層,測定MSCs 的生長曲線。2.培養(yǎng)和純化后獲得貼壁細胞,取擴增第三代后的MSCs 向神經元樣細胞誘導分化。用免疫熒光標記方法檢測神經元特異性標記物。3.25 只SD 大鼠隨機分成移植組和對照組. 建立NYU 脊髓損傷模型移植組移植5-溴脫氧尿核苷(Brdu)標記的源于臍血的MSCs 在體外培養(yǎng)、擴增,并向神經元樣細胞分化的細胞。用免疫熒光標記方法檢測神經元特異性標記物。對照組注射PBS液.采用BBB 評分標準對移植組和照組所有大鼠術前和術后24h,1, 2, 3, 4,5 周進行運動功能評價.組織學和免疫組化分析移植細胞的定位和分化情況。 結果1.來源于臍血的單個核細胞在體外用合適的培養(yǎng)基培養(yǎng),細胞貼壁后出現破骨樣及間充質樣的細胞,間充質細胞為成纖維樣的細胞形態(tài),并表達MSCs相關的抗原與源于骨髓的MSCs 一致。2. 無菌條件下收集正常足月剖腹產的臍帶血,經肝素抗凝,用淋巴細胞分離液分離臍血的單個核細胞,以偏酸性的MesencultTM 作為培養(yǎng)基進行培養(yǎng)和純化,獲得貼壁細胞,取擴增第三代后的MSCs向神經元樣細胞誘導分化。用免疫熒光標記方法檢測神經元特異性標記物。3. 免疫組化標記顯示經誘導后的MSCs 表達膠質纖維酸性蛋白(GFAP),神經絲蛋白(NF)和神經元特異性烯醇化酶(NSE).移植后在脊髓病理切片中出現Brud 標記的移植細胞.神經功能檢測發(fā)現一周后移植組功能恢復較對照組具有顯著性差異(p0.05)。 結論1.臍帶血中含有的MSCs 可在體外培養(yǎng)、擴增,能夠為實驗和臨床的應用提供一種新的間充質干細胞來源。2. 源于臍血的MSCs 在體外可以培養(yǎng)、擴增,并向神經元樣細胞分化,能作為神經干細胞的來源而用于實驗研究和臨床應用。
[Abstract]:Objective 1. To establish a method for amplification of human umbilical cord blood mesenchymal stem cells (MSCs) in vitro. To investigate the biological characteristics of mesenchymal stem cells derived from human umbilical cord blood. The feasibility of differentiation into neuron-like cells by MSCs. 3. To observe whether the neuron-like cells derived from human umbilical cord blood mesenchymal stem cells can promote the recovery of behavior and function of spinal cord injury in rats. Methods 1. The cord blood of normal term caesarean section was collected under aseptic condition and the mononuclear cells of cord blood were separated by lymphocytes. 2. The adherent cell layer was obtained by culture and purification of partially acidic MesencultTM. The growth curve of MSCs was measured. 2. The adherent cells were obtained after culture and purification. After the third generation of MSCs was amplified to differentiate into neuron-like cells, 3.25 SD rats were randomly divided into transplantation group and control group. Establishment of NYU Spinal Cord injury Model Transplantation of 5-Bromodeoxyuridine (5-Bromodeoxyuridine). Brdu-labeled MSCs derived from umbilical cord blood was cultured in vitro. Amplification. Neurons differentiated into neuron-like cells. Neuron-specific markers were detected by immunofluorescence labeling. PBS solution was injected into the control group. BBB was used. The scoring criteria were 24 hours before and 24 hours after operation in both the transplantation group and the radiation group. The motor function was evaluated at 1, 2, 3 and 4 weeks. The localization and differentiation of transplanted cells were analyzed by histological and immunohistochemical methods. Results 1. Mononuclear cells derived from cord blood were cultured in appropriate medium in vitro. Osteoclasts and mesenchymal cells appeared after adherent, and mesenchymal cells were fibroblast-like. 2. The expression of MSCs related antigen was consistent with that of MSCs derived from bone marrow. The umbilical cord blood of normal term caesarean section was collected under aseptic condition and anticoagulant by heparin. Mononuclear cells from umbilical cord blood were isolated from lymphocytes and cultured and purified on the medium of acidic MesencultTM. The adherent cells were obtained. The third generation MSCs was induced to differentiate into neuron-like cells. The neuron-specific marker .3.The immunocytochemical staining showed that the MSCs was induced by immunocytochemistry. Expression of glial fibrillary acidic protein (GFAP). GFAP). Neurofilament protein (NFN) and neuron-specific enolase (NSE). Brud labeled transplanted cells were found in the pathological sections of spinal cord after transplantation, and the neural function test showed that the functional recovery of the transplantation group was significantly different from that of the control group one week later (p 0.05). MSCs contained in umbilical cord blood can be cultured and amplified in vitro. 2. It can provide a new mesenchymal stem cell source. 2. MSCs derived from umbilical cord blood can be cultured, expanded and differentiated into neuron-like cells in vitro. Can be used as a source of neural stem cells for experimental research and clinical applications.
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R329.2

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