本文關(guān)鍵詞：麻疹病毒通過(guò)受體SLAM對(duì)昆蟲(chóng)細(xì)胞的感染及其誘發(fā)細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究　出處：《武漢大學(xué)》2005年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：已經(jīng)證明淋巴細(xì)胞信號(hào)刺激因子SLAM(signaling lymphocytic activation molecule)是麻疹病毒的第二受體。我們?cè)谲偎捭y線夜蛾核型多角體病毒(AcMNPV)的極晚期啟動(dòng)子Ppolh下游,插入編碼增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)的報(bào)道基因,構(gòu)建了一種來(lái)源于桿狀病毒的載體——Bacmid-egfp。利用這種帶標(biāo)記的重組桿狀病毒感染Sf9細(xì)胞,強(qiáng)烈的綠色熒光說(shuō)明重組桿狀病毒的感染。并且,因?yàn)椴皇桥c外源基因在同一個(gè)啟動(dòng)子下,桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中EGFP表達(dá)對(duì)該系統(tǒng)沒(méi)有影響。我們?cè)贐acmid-egfp中插入Ppol控制的麻疹病毒(measles virus,MV)細(xì)胞受體SLAM基因,構(gòu)建重組桿狀病毒rv-egfp-SLAM。在昆蟲(chóng)細(xì)胞Sf9中,得到融合有六個(gè)組氨酸標(biāo)簽的SLAM,分子量大約為46kD。HPLC證明,經(jīng)過(guò)鎳柱純化的SLAM為比較單一的蛋白。激光共聚焦證明,使用重組桿狀病毒表達(dá)的SLAM定位在Sf9細(xì)胞膜表面。用純化的蛋白做pull down,發(fā)現(xiàn)它可以與麻疹病毒的血凝素H蛋白相互作用,證明桿狀病毒表達(dá)的SLAM可能具有麻疹病毒受體的功能。 進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證明,當(dāng)用麻疹病毒感染表達(dá)SLAM蛋白的Sf9細(xì)胞時(shí),我們可以觀察到細(xì)胞融合,而且細(xì)胞的融合程度與麻疹病毒的感染復(fù)數(shù)成正相關(guān)。在mRNA水平,我們檢測(cè)到麻疹病毒H基因在Sf9細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄。免疫細(xì)胞組化結(jié)果顯示了麻疹病毒在SLAM-Sf9細(xì)胞中的復(fù)制。最后,流式細(xì)胞檢測(cè)說(shuō)明,麻疹病毒可以誘發(fā)表達(dá)
[Abstract]:SLAM(signaling lymphocytic activation molecule. It is the second receptor of measles virus. We are downstream of the very late promoter Ppolh of the nucleotypic polyhedrosis virus (AcMNPV). A reporter gene encoding enhanced green fluorescent protein (EGFP) was inserted. A baculovirus-derived vector Bacmid-egfp. was constructed to infect Sf9 cells with this tagged recombinant baculovirus. Strong green fluorescence indicates the infection of the recombinant baculovirus. And, because it is not under the same promoter as the foreign gene. The expression of EGFP in baculovirus expression system had no effect on the system. We inserted Ppol controlled measles virus measurements virus into Bacmid-egfp. The recombinant baculovirus rv-egfp-SLAM was constructed by SLAM gene. In insect Sf9, SLAM with six histidine tags was obtained. The molecular weight was about 46kD. HPLC and the SLAM purified by nickel column was a single protein. The SLAM expressed by recombinant baculovirus was located on the surface of Sf9 cell membrane. The purified protein was used for pull down-down. It was found that it could interact with hemagglutinin H protein of measles virus. It is suggested that the SLAM expressed by baculovirus may have the function of measles virus receptor. Further experiments have shown that cell fusion can be observed when Sf9 cells expressing SLAM protein are infected with measles virus. And the degree of cell fusion is positively correlated with the number of measles virus infections. At the mRNA level. We detected the transcription of measles virus H gene in Sf9 cells. Immunohistochemical results showed the replication of measles virus in SLAM-Sf9 cells. Finally, flow cytometry showed that. Measles virus can induce expression
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R373

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1406576