本文關(guān)鍵詞：沙門菌invA基因的克隆、表達(dá)與表達(dá)產(chǎn)物的初步研究　出處：《四川大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的： 通過(guò)擴(kuò)增沙門菌invA基因，構(gòu)建pET-invA重組子，實(shí)現(xiàn)沙門菌invA基因在大腸桿菌中的高效表達(dá)，，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)金屬離子親和層析純化后，免疫CD1小鼠和新西蘭大白兔，獲得多克隆抗體，并對(duì)免疫血清的性質(zhì)進(jìn)行初步研究，為后續(xù)研究該蛋白的特性和應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 方法： 本研究分為三部分： 1．沙門菌invA基因原核表達(dá)重組質(zhì)粒的構(gòu)建：根據(jù)invA基因序列設(shè)計(jì)引物，用PCR方法自沙門菌基因組中擴(kuò)增invA基因目的片段。將該基因與原核表達(dá)質(zhì)粒載體pET-30c(+)連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-invA，并轉(zhuǎn)化克隆宿主菌E．coli DH5a，利用卡那霉素抗性篩選陽(yáng)性克隆，質(zhì)粒小量提取后，用雙酶切和基因序列測(cè)定鑒定重組質(zhì)粒。 2．沙門菌InvA融合蛋白的表達(dá)、純化及鑒定：第一部分所得重組質(zhì)粒pET-invA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌E．coli BL21(DE3)，IPTG誘導(dǎo)融合蛋白表達(dá)，SDS-PAGE分析目的蛋白表達(dá)情況；通過(guò)鎳金屬離子親和層析對(duì)InvA融合蛋白進(jìn)行純化，SDS-PAGE檢測(cè)蛋白純度和分子量，用anti-His-tag單克隆抗體以Western blotting鑒定誘導(dǎo)表達(dá)的重組InvA蛋白。 3．InvA融合蛋白的免疫原性研究：使用考馬斯亮蘭法總蛋白定量測(cè)試盒對(duì)所得到的純化產(chǎn)物進(jìn)行含量測(cè)定后，用來(lái)免疫CD1小鼠和新西蘭大白兔，間接ELISA法測(cè)定多克隆抗體的效價(jià)，并通過(guò)玻片凝集試驗(yàn)觀察所制
[Abstract]:Objective:
Through the amplification of Salmonella invA gene, construct pET-invA recombinant, efficient expression of invA gene in Salmonella in Escherichia coli, the expressed product by metal ion affinity chromatography, immune CD1 mice and rabbits to obtain the polyclonal antibody, and the nature of the immune serum were preliminarily studied, and lay the foundation for further research and application characteristics the protein.
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本文編號(hào)：1391351