本文關鍵詞：炭疽桿菌噬菌體裂解酶基因在大腸桿菌中的表達及鑒定　出處：《生物工程學報》2005年02期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：利用PCR方法擴增炭疽桿菌噬菌體裂解酶 (γlysin)基因 ,克隆至大腸桿菌表達載體pET2 2b中 ,經菌落PCR篩選、序列測定和酶切鑒定證實表達載體pET2 2b -γlysin構建成功 ,并在EscherichiacoliBL2 1(DE3)中獲得了高表達。目的蛋白約占菌體總蛋白的 4 0 % ,5L發(fā)酵罐中的產酶水平高達 15g L。菌體經超聲破碎 ,制備無細胞抽提液 ,StreamlineSP和SPHP柱層析以及SephacrylS- 10 0凝膠過濾三步純化 ,得到分子量為 2 7kD單一條帶的目的蛋白 ,薄層掃描分析顯示其純度大于 95 %。目的蛋白的收率為 19 1% ,純化倍數為 35 0。生物活性鑒定重組的γ噬菌體裂解酶具有特異性 :可快速裂解炭疽桿菌 ,比活為 14 0 0u mg左右 ;而對大腸桿菌、枯草桿菌及蠟樣芽孢桿菌沒有裂解活性。
[Abstract]:The bacteriophage lyase (緯 lysin) gene of Bacillus anthracis was amplified by PCR and cloned into E. coli expression vector pET2 2b. The gene was screened by colony PCR. Sequence analysis and restriction endonuclease identification confirmed that the expression vector pET2 2b- 緯 lysin was successfully constructed. The target protein accounted for about 40% of the total bacterial protein. The enzyme production level in 5L fermenter was as high as 15g / L. Thalli was broken by ultrasonic to produce cell-free extract. StreamlineSP and SPHP column chromatography and Sephacryl S100 gel filtration were used. The target protein with a molecular weight of 27 KD was obtained. TLC analysis showed that the purity of the protein was more than 95 and the yield of the target protein was 19 1%. The specific activity of 緯 phage lyase was about 1400u mg, and the specific activity of 緯 phage lyase was about 1400u mg. The specific activity of 緯 phage lyase was about 1400u mg. However, there was no cleavage activity for Escherichia coli, Bacillus subtilis and Bacillus cereus.
【作者單位】： 軍事醫(yī)學科學院生物工程研究所 軍事醫(yī)學科學院生物工程研究所 吉林大學生命科學學院 軍事醫(yī)學科學院生物工程研究所 軍事醫(yī)學科學院生物工程研究所 軍事醫(yī)學科學院生物工程研究所 軍事醫(yī)學科學院生物工程研究所 軍事醫(yī)學科學院生物工程研究所
【分類號】：R346
【正文快照】： 炭疽桿菌噬菌體裂解酶 (γlysin)由 2 33個氨基酸殘基組成 ,是N 乙酰胞壁酸 L 丙氨酸酰胺酶 ,通過破壞炭疽桿菌細胞壁中的N 乙酰胞壁酸和L 丙氨酸之間的交聯而使其裂解[1] 。許多研究表明 ,噬菌體裂解酶具有以下特征 :1 噬菌體裂解酶是dsDNA噬菌體所特有的在病毒復制晚期合

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本文編號：1390213