本文關鍵詞：癌—睪丸抗原OY-TES-1基因重組、表達及抗體血清學分析　出處：《廣西醫(yī)科大學》2007年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】： 目的:初步了解OY-TES-1在各種組織的表達及其抗體出現(xiàn)的情況,分析OY-TES-1與腫瘤發(fā)生發(fā)展以及其抗體與腫瘤和其它疾病的關聯(lián),探討將OY-TES-1用于腫瘤免疫治療的可能性。 方法:(1)RT-PCR擴增OY-TES-1cDNA序列,構(gòu)建OY-TES-1原核重組表達質(zhì)粒,表達和純化OY-TES-1融合蛋白;(2)對OY-TES-1進行生物信息學分析;(3)制備OY-TES-1多克隆抗體;(4)利用實時定量PCR(qRT-PCR)和免疫組織化學(IHC)技術,從mRNA和蛋白質(zhì)兩個水平研究OY-TES-1的基因表達特點;(5)采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測不同腫瘤、肝硬化、不育癥病人及正常人血清中相應的抗體,并對其臨床意義做初步的分析。 結(jié)果:(1)通過大腸桿菌成功表達出融合蛋白麥芽糖結(jié)合蛋白/OY-TES-1(MBP/OY-TES-1),對表達的蛋白行蛋白質(zhì)飛行質(zhì)譜儀鑒定,確定與目的蛋白肽段相符。(2)OY-TES-1mRNA在正常組織中廣泛表達,以睪丸組織中OY-TES-1的相對表達量最高,約為其他正常組織90倍以上;在HCC、腦膜瘤和膠質(zhì)瘤中,OY-TES-1mRNA表達水平明顯高于癌旁組織和對應的正常組織,并與腫瘤臨床指標無關。(3)免疫組織化學(IHC)顯示在所檢測的多種正常組織和細胞中(10例睪丸組織、8例結(jié)腸、7例肝、6例骨骼肌、5例胃、5例晶狀體、3例外周血白細胞和1例腎),除1例腎組織中的腎小管外,其余均未見OY-TES-1蛋白陽性反應;在非腫瘤病變組織中,1例前列腺炎與2例慢性乙型肝炎均為陰性,4例HCC癌旁的肝硬化組織有1例陽性,50%(4/8)不育癥病人睪丸組織呈現(xiàn)OY-TES-1蛋白陽性反應。HCC、結(jié)腸癌和胃癌中OY-TES-1蛋白陽性率分別為40%(4/10)、33.3%(1/3)和25%(4/16),而7例肺癌組織均為陰性反應。(4)血清學檢測未發(fā)現(xiàn)76例正常人和17例肝硬化病人血清中有相應抗體;腫瘤病人血清抗體陽性率為14.9%(56/377),其中食管癌為30%(3/10),HCC為20%(12/58);不育癥病人血清抗體陽性率高達70.8%(46/65),并有較高的抗體滴度,統(tǒng)計學分析顯示OY-TES-1抗體血清學檢測用于診斷不育癥有顯著意義(P＜0.05)。 結(jié)論:OY-TES-1是一種限制性表達于正常組織、選擇性高表達于腫瘤組織的抗原,屬于癌睪丸相關抗原,有望成為用于腫瘤免疫治療的靶抗原;OY-TES-1抗體的出現(xiàn)與不育癥的關系需作深入的研究。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression and anti - tumor development and the association between the antibody and tumor and other diseases , and to explore the possibility of the treatment for tumor immunotherapy . Methods : ( 1 ) RT - PCR was used to amplify the cDNA sequence , construct the prokaryotic recombinant expression plasmid , and express and purify the fusion protein . ( 2 ) To investigate the gene expression characteristics of both mRNA and protein by means of real - time quantitative PCR ( qRT - PCR ) and immunohistochemistry ( IHC ) . ( 5 ) The corresponding antibodies in serum of different tumors , liver cirrhosis , infertility and normal controls were detected by enzyme linked immunosorbent assay ( ELISA ) , and the clinical significance was analyzed . Results : ( 1 ) The positive reaction of the fusion protein maltose - TES - 1 ( MBP - TES - 1 ) was successfully expressed by E . coli . Conclusion : It is a kind of antigen which can be expressed in normal tissues and highly expressed in tumor tissues . It is expected to be the target antigen used in tumor immunotherapy .

【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R392

【參考文獻】

相關期刊論文 前4條

1 范蓉,羅昱,肖紹文;腫瘤-睪丸抗原的特性及臨床應用[J];國外醫(yī)學(腫瘤學分冊);2005年03期

2 范蓉;肖紹文;何少健;張小靜;羅昱;羅國容;謝小薰;;精子蛋白Sp32/OY-TES-1基因mRNA表達的探討[J];解剖學報;2006年01期

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4 陳守義;李軍濤;徐勁;魏權德;謝紅艷;胡旭初;余新炳;;華支睪吸蟲分泌蛋白基因(CsCrSP)的克隆和生物信息學分析[J];中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志;2006年03期

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本文編號：1389762